一种针对制造技术

本发明专利技术属于生物医药工程领域，特别提供了一种针对

【技术实现步骤摘要】
一种针对HPV免疫原性蛋白的冻干保护剂及其应用


[0001]本申请属于生物医药工程领域，特别涉及一种针对
HPV
免疫原性蛋白的冻干保护剂及其应用
。

技术介绍

[0002]人乳头瘤病毒（
HPV
）是一种环状的双链
DNA
病毒，其基因组长度约为
8000
对碱基，包含
8~9
个编码高度保守的核心蛋白的开放阅读框（
ORFs
），表达参与病毒基因组复制（
E1、E2
和
E4
）和组装（
L1
和
L2
）的蛋白，以及辅助蛋白（
E5、E6
和
E7
）
。HPV
的型别是根据高度保守的
L1
基因内成对的核苷酸序列来区分的，不同型别的
HPV
在核苷酸水平上至少有
10%
的差异，同一个种内的
HPV
型别
≥70%
的
L1
序列相同
。Alpha
属的
HPV
型别主要感染生殖器黏膜
、
肛门黏膜和上呼吸道黏膜，如果持续感染，则可能导致女性最常见的癌症之一宫颈癌，以及较为罕见的非角质化黏膜和下生殖道的癌变
、
肛门癌
、
口咽癌等
。
许多
Beta
属和
Gamma
属的<br/>HPV
型别与儿童早期获得的皮肤不明显感染有关，并可在数年或数十年持续产生低水平的病毒颗粒
。
[0003]病毒样颗粒（
virus
‑
like particles
，
VLP
）是由病毒的一个或多个结构蛋白在体内或体外自组装而成的空心颗粒，呈正二十面体或螺旋结构，形态结构与天然病毒类似，但不含病毒的遗传物质，无法复制和扩增，因而能有效地诱导机体产生对病毒的免疫反应，同时不具备感染致病的能力，降低了免疫过程中的风险，已被广泛应用于乙肝
、HPV
等疫苗的开发中
。
[0004]VLP
疫苗虽有众多优点，但性质不稳定，即便是在低温下也容易出现病毒样颗粒的聚集
、
变性
、
析出等问题，为运输和储存增加了很大难度
。
为保证稳定性，必须要在完成纯化组装后将
VLP
样品尽快制成液体状态，这样不仅会增加生产的时间和经济成本，也会增加运输的成本和要求
。
相比于普通液体疫苗，冻干疫苗性质稳定
、
便于存储，可在常规冷链条件下贮存运输，能有效节约成本
、
并延长保存时间，使用时在重构后可快速产生抗体
、
保持原有的较好的免疫效果，因此成为多种疫苗（特别是重组蛋白疫苗）的优选形式
。
然而，
VLP
因其稳定性的不足，在冻干时也极易发生变性
、
聚集等情况，因此难以有效转化成冻干产品，在实际生产操作中仍然存在困难
。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种针对
HPV
免疫原性蛋白（特别是结构蛋白或病毒样颗粒）的冻干保护剂
、
以及该冻干保护剂在制作
HPV
疫苗中的应用
。
[0006]本专利技术的技术方案如下：本专利技术第一方面提供了一种针对
HPV
免疫原性蛋白的冻干保护剂，所述冻干保护剂中含有浓度不低于
0.2M
（例如
0.2M、0.25M、0.3M、0.35M、0.4M、0.45M
或
0.5M
，或上述任意两个相邻数值之间的任意数值）的氯化钠
。
[0007]在一些优选的实施方式中，所述冻干保护剂中氯化钠的浓度为
0.3~0.5M。
[0008]申请人发现，在对
HPV
的
VLP
进行冻干时，如果冻干体系中含有较高浓度（特别是
0.3~0.5M
）的氯化钠时，
VLP
冻干前后的活性能够保持高度一致，同时可有效降低冻干复溶后不溶性颗粒的含量和粒径，从而确保
VLP
冻干后的品质，大大降低了
VLP
冻干的难度
。
[0009]进一步地，所述冻干保护剂中还含有至少一种糖类和
/
或至少一种多元醇
。
[0010]糖类和多元醇类都是冻干保护剂中常用的成分，添加到冻干体系中可以防止抗原在高盐浓度下析出沉淀；在本专利技术中，糖类和多元醇类成分与高浓度氯化钠联合使用，不仅能够防止盐析，还可以协同作用
、
保持
VLP
冻干前后的活性稳定
。
[0011]在一些优选的实施方式中，所述糖类为蔗糖，所述多元醇为甘露醇
。
[0012]进一步地，所述冻干保护剂中蔗糖的含量为
0~4wt.%
（例如
0、0.5wt.%、1wt.%、1.5wt.%、2wt.%、2.5wt.%、3wt.%、3.5wt.%
或
4wt.%
，或上述任意两个相邻数值之间的任意数值），优选为
1~4wt.%
；甘露醇的含量为
0~4wt.%
（例如
0、0.5wt.%、1wt.%、1.5wt.%、2wt.%、2.5wt.%、3wt.%、3.5wt.%
或
4wt.%
，或上述任意两个相邻数值之间的任意数值）
。
[0013]在本申请提供的高渗条件下，该组合可以有效地发挥冻干保护作用，提高蛋白样品的物理和化学稳定性，防止盐析
、
聚集
、
变性等情况的发生
。
[0014]一种最优选的实施方式中，所述冻干保护剂中含有
0.5M
氯化钠
、1wt.%
蔗糖
、2wt.%
甘露醇
。
[0015]该配方是本申请提供的冻干保护剂的一种优选的实施方式，可以从稳定性
、
外观
、
酸碱性
、
溶解性
、
颗粒度
、
纯度以及比活性等多个方面对冻干品发挥保护作用，从而最大限度地保证
HPV
蛋白疫苗（特别是
VLP
疫苗）冻干复溶后的使用效果
。
[0016]本专利技术第二方面提供了冻干保护剂在制备
HPV
免疫原性蛋白的冻干制品中的应用
。
[0017]进一步地，所述
HPV
免疫原性蛋白包含...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.
一种针对
HPV
免疫原性蛋白的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中含有浓度不低于
0.2M
的氯化钠
。2.
如权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中氯化钠的浓度为
0.3~0.5M。3.
如权利要求1所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中还含有至少一种糖类和
/
或至少一种多元醇
。4.
如权利要求3所述的冻干保护剂，其特征在于，所述糖类为蔗糖，所述多元醇为甘露醇
。5.
如权利要求4所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中蔗糖的含量为
1~4 wt.%
，甘露醇的含量为
0~4 wt.%。6.
如权利要求5所述的冻干保护剂，其特征在于，所述冻干保护剂中含有
0.5M
氯化钠
、1 wt.%
蔗糖
、2 wt.%
甘露醇
。7.
权利要求
1~6
中任一项所述的冻干保护剂在制备
HPV
免疫原性蛋白的冻干制品中的应用
。8.
如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述
HPV
免疫原性蛋白包含
HPV6
型
、11
型
、16
型
、18
型
、31
型
、33
型
、35
型
、39
型
、45
型
、51
型
、52
型
、56
型
、58
型及
59
型中的一种或多种的
L1
蛋白和
/
或
L2
蛋白
。9.
如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述
HPV
免疫原性蛋白包含
HPV
结构蛋白或病毒样颗粒
。10.
如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述冻干制品为重组亚单位疫苗或病毒样颗粒疫苗
。11.
一种
HPV
免疫原性组合物的冻干制剂，其特征在于，所述组合物包括权利要求
1~6
中任一项所述的冻干保护剂以及至少一种
HPV
免疫原性蛋白，所述冻干制剂为所述
HPV
免疫原性组合物在减压干燥条件下去除溶剂得到的冻干粉
。12.
如权利要求
11
所述的冻干制剂，其特征在于，所述
HPV
免疫原性蛋白包含
HPV6
型
、11
型
、16
型
、18
型
、31
型
、33
型
、35
型
、39
型
、45
型
、51
型
、52
型
、56
型
、58
型及
59
型中的一种或多种的
L1
蛋白和
/
或
L2
蛋白
。13.
如权利要求
12
所述的冻干制剂，其特征在于，所述
HPV
免疫原性蛋白为
HPV
结构蛋白或病毒样颗粒
。14.
如权利要求
13
所述的冻干制剂，其特征在于，冻干之前的所述
HPV
免疫原性组合物中，所述
HPV
免疫原性蛋白的含量为
10~5000
μ
g/ml。15.
如权利要求
14
所述的冻干制剂，其特征在于，所述组合物中还含有佐剂，所述佐剂包含角鲨烯
、
吐温
、
生育酚
、
司盘
、MPL、LPA、CpG、poly(I:C)
...

【专利技术属性】
技术研发人员：班靖洋，刘娟，孙汉奇，范录云，张旭佩，林荣，刘勇，
申请(专利权)人：北京安百胜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：