一种复合佐剂及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种以脂质体为载体的复合佐剂及其制备方法和应用。其中复合佐剂由两种TLR激动剂联合，主要由TLR3激动剂和TLR4激动剂联合，可同时激活以上两种TLR信号通路，更高效地激活先天免疫系统。本发明专利技术亦提供一种免疫组合物，包含上述复合佐剂和抗原。所述复合佐剂和抗原联用，能显著增强疫苗的细胞免疫反应。本发明专利技术的复合佐剂成本低、制备简单，安全性好，可作为多种疫苗的候选佐剂。可作为多种疫苗的候选佐剂。

【技术实现步骤摘要】
一种复合佐剂及其制备方法和应用


[0001]本申请属于生物医药工程领域，特别涉及一种复合佐剂及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。

技术介绍

[0002]Toll样受体(Toll
‑
like receptors，TLR)是表达于多种细胞表面的一类模式识别受体，可以识别病原体，如细菌、病毒和寄生虫等的分子模式。人类共有10类TLR受体，分别识别高度保守的微生物分子模式，如脂多糖(TLR4受体识别)、脂肽(TLR2识别)、鞭毛蛋白(TLR5识别)、单链或双链RNA(TLR7/8，TLR3识别)和含有CpG基序的DNA(TLR9识别)等。
[0003]TLR4是目前研究较为深入的TLR，属于Ⅰ型跨膜蛋白，其配体包括革兰阴性菌脂多糖(LPS)及其衍生物单磷酰脂A(MPLA)等。TLR4激动剂或单独应用，或作为复合佐剂的主要组分，或与其他TLR激动剂联合使用，已广泛用于多种疫苗的研发，展现良好的应用前景。
[0004]就不同的TLR激动剂联合使用而言，复合佐剂的制剂形式、复合组分的选择以及配伍的抗原种类均是能够对佐剂活性和疫苗效果产生重大影响的重要因素，因此，采用不同配方制备的复合佐剂，其佐剂活性是难以预测的，需要实验验证。专利技术人将本专利技术所述的两种TLR激动剂，特别是TLR3和TLR4激动剂，即Poly I:C和MPL按一定比例混合入脂质体制剂体系后与水痘带状疱疹疫苗联合免疫，发现两种类型的TLR激动剂优势互补，有效地活化了特异性的细胞免疫反应。因此，采用这种策略获得的复合佐剂具有很好的应用前景，可望同时应用于预防性疫苗及治疗性疫苗领域。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种新的安全性和免疫刺激活性好，具有人体应用前景的复合佐剂及其制备方法和应用。将TLR3激动剂和TLR4激动剂以最佳的联用方式制备复合佐剂，可同时激活以上两种TLR信号通路，更高效地激活先天免疫系统。
[0006]本专利技术人经研究出人意料地发现，采用恰当的配伍方式将TLR3激动剂和TLR4激动剂制备于脂质体制剂中作为复合佐剂，具有更强的免疫刺激活性，且与带状疱疹病毒疫苗联合应用，可显著提高疫苗的免疫原性，产生远高于包含其他任意两种TLR激动剂的脂质体制剂的免疫刺激活性。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]本专利技术一方面提供一种复合佐剂，其在脂质体制剂中包含两种不同的TLR激动剂。
[0009]在一些实施方式中，所述TLR激动剂包括TLR2激动剂、TLR3激动剂、TLR4激动剂、TLR5激动剂、TLR6激动剂、TLR7激动剂、TLR8激动剂、TLR7/8激动剂或TLR9激动剂。
[0010]在一些实施方式中，所述TLR激动剂优选为TLR3激动剂和TLR4激动剂。
[0011]在一些实施方式中，所述TLR3激动剂和TLR4激动剂的质量比为(1:1)～(30:1)，在一些优选的实施方式中，所述TLR3激动剂和TLR4激动剂的质量比为1:1、5:1或30:1。
[0012]在一些实施方式中，所述TLR3激动剂选自Poly I:C、Poly ICLC和Poly I:C
12
U中的
一种。
[0013]在一些优选的实施方式中，所述TLR3激动剂是Poly I:C，其分子量介于66,000至1200,000道尔顿之间，例如，75,000至1100,000道尔顿之间、96,000至950,000道尔顿之间、150,000至550,000道尔顿之间，特别是从66,000至660,000道尔顿之间。
[0014]在一些实施方式中，所述TLR4激动剂选自革兰阴性菌脂多糖LPS、3D
‑
单磷酰脂质A(MPL)、吡喃葡萄糖基脂质A(GLA)、热休克蛋白、纤维蛋白和盘尾丝虫的活化相关蛋白(Ov
‑
ASP
‑
1)中的一种。
[0015]在一些优选的实施方式中，所述TLR4激动剂是MPL。
[0016]在一些实施方式中，每人用剂量复合佐剂包含MPL 25
‑
50μg，PolyI:C 25
‑
1500μg，优选MPL 25μg、PolyI:C 25μg，MPL 50μg、PolyI:C 250μg或MPL 50μg、PolyI:C 1500μg。
[0017]在一些实施方式中，所述复合佐剂进一步还包含选自肽聚糖、脂磷壁酸、咪喹莫特、瑞喹莫特、CpG
‑
ODN和细菌鞭毛蛋白中一种或多种的TLR激动剂。
[0018]在一些实施方式中，所述复合佐剂可以在脂质体制剂中包含例如TLR4激动剂联合TLR3激动剂和TLR9激动剂、TLR3激动剂联合TLR7/8激动剂和TLR9激动剂的复合形式。
[0019]在一些实施方式中，所述复合佐剂还可以在脂质体制剂中包含例如TLR4激动剂联合TLR9激动剂、TLR4激动剂联合TLR7/8激动剂、TLR4激动剂联合TLR1/2激动剂或TLR7激动剂联合TLR9激动剂的复合形式。
[0020]在一些实施方式中，所述复合佐剂还包含一种或多种额外的免疫刺激剂，所述的免疫刺激剂包括皂苷或其衍生物。
[0021]在一些实施方式中，所述皂苷衍生物选自QS
‑
7、QS
‑
17、QS
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18和QS
‑
21中的一种或几种，优选为QS
‑
21。
[0022]在一些实施方式中，所述脂质体制剂包含单一/多类型脂质和固醇。
[0023]本专利技术第二方面公开一种复合佐剂，在脂质体制剂中包含TLR3激动剂和TLR4激动剂，所述复合佐剂包括：
[0024]a)由DOPC组成的脂质；
[0025]b)胆固醇；和
[0026]c)MPL与PolyI:C，
[0027]其中所述DOPC组成的脂质与胆固醇的重量比是3
‑
5:0.8
‑
1.2，胆固醇与MPL的重量比是4
‑
6:0.8
‑
1.2，MPL与PolyI:C的重量比是1:1
‑
1:30。
[0028]本专利技术所述的复合佐剂，其中每人用剂量中所述DOPC重量为800
‑
1200μg，胆固醇的重量为200
‑
300μg，MPL的重量为25
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50μg，PolyI:C的重量为25
‑
1500μg。
[0029]在一个实施例中，本专利技术所述的复合佐剂，其中每人用剂量中所述DOPC重量为1000μg，胆固醇的重量为250μg，MPL的重量为25
‑
50μg，PolyI:C的重量为25
‑
1500μg。
[0030]在一个实施例中，本专利技术所述的复合佐剂，其中每人用剂量中所述DOPC重量为1000μg，胆固醇的重量为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合佐剂，在脂质体制剂中包含TLR3激动剂和TLR4激动剂，其特征在于所述复合佐剂包括：a)由DOPC组成的脂质；b)胆固醇；和c)MPL与PolyI:C，其中所述由DOPC组成的脂质与胆固醇的重量比是3
‑
5:0.8
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1.2，胆固醇与MPL的重量比是4
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6:0.8
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1.2，MPL与PolyI:C的重量比是1:1
‑
1:30。2.如权利要求1所述的复合佐剂，其特征在于其中每人用剂量中所述DOPC重量为800
‑
1200μg，胆固醇的重量200
‑
300μg，MPL的重量25
‑
50μg，PolyI:C的重量为25
‑
1500μg。3.如权利要求2所述的复合佐剂，其特征在于其中每人用剂量中所述DOPC重量为1000μg，胆固醇的重量250μg，MPL的重量25
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50μg，PolyI:C的重量为25
‑
1500μg。4.如权利要求3所述的复合佐剂，其特征在于其中每人用剂量中所述DOPC重量为1000μg，胆固醇的重量250μg，MPL的重量25μg，PolyI:C的重量为25μg。5.如权利要求3所述的复合佐剂，其特征在于其中每人用剂量中所述DOPC重量为1000μg，胆固醇的重量250μg，MPL的重量50μg，PolyI:C的重量为1500μg。6.一种复合佐剂，在脂质体制剂中包含TLR3激动剂和TLR4激动剂，其特征在于所述复合佐剂包括：a)由DOPC和DOTAP组合的脂质混合物；b...

【专利技术属性】
技术研发人员：袁楚晓，姚文荣，王维龙，虎丽兴，高超，陈健平，洪坤学，刘勇，
申请(专利权)人：北京安百胜生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：