一种EGFR基因突变检测的引物探针组合及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种基因突变的检测产品，具体涉及一种EGFR基因突变检测的引物探针组合及其应用，所述引物探针组合包括检测引物探针，所述检测引物探针包括EGFR基因突变检测特异性引物对、EGFR基因特异性探针、扩增阻断探针和内参系统；其中，所述EGFR基因的突变检测的位点为18‑21外显子突变位点。本发明专利技术对EGFR基因突变具有特异性强、灵敏度高、操作简单快速等优点，检测结果具有较好的准确性和重复性，可以对肿瘤组织样本进行检测，能够辅助临床治疗，具有重要价值。

Primer probe combination for detection of EGFR gene mutation and its application

The invention relates to a detection product for gene mutation, in particular to a primer probe combination for EGFR gene mutation detection and its application. The primer probe combination comprises a detection primer probe, the detection primer probe includes a specific primer pair for EGFR gene mutation detection, an EGFR gene specific probe, and an amplification blocking probe. The mutation detection site of the EGFR gene is 18_21 exon mutation site. The invention has the advantages of strong specificity, high sensitivity, simple and rapid operation for EGFR gene mutation, and the detection result has good accuracy and repeatability, and can detect tumor tissue samples, and can assist clinical treatment, and has important value.

【技术实现步骤摘要】
一种EGFR基因突变检测的引物探针组合及其应用
本专利技术属于分子生物学
，涉及一种基因突变的检测产品，具体涉及一种EGFR基因突变检测的引物探针组合及其应用。
技术介绍
肺癌和结直肠癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤，并已成为绝大多数国家癌症死亡的主要原因。其中以非小细胞肺癌(NSCLC)最常见。目前靶向治疗已经成为非小细胞肺癌(NSCLC)和结直肠癌临床治疗的重要手段。大量研究资料表明EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区(tyrosinekinasecodingdomain，TKI)的18-2l外显子上，而这些突变与吉非替尼药物反应性有关，原因可能是这些突变改变了EGFR胞内ATP结合区的结构，提高了EGFR对吉非替尼的结合能力。虽然已报道不下30种突变与药物反应有关，但是主要是19外显子的框内缺失(746-753)性突变，约占所有突变的45％；21外显子的替代突变(主要是L858R和L861Q)，约占所有突变的40-45％，目前普遍认为，这两个热点突变可以增强肿瘤细胞对TKI的敏感性，并且可作为TKI治疗的有效预测指标。18外显子G719X约占突变5％，20外显子插入突变占本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种EGFR基因突变检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括对EGFR基因突变检测特异性引物对、EGFR基因特异性探针、扩增阻断探针和内参系统；其中，所述EGFR基因突变检测特异性引物对的错配率为15‑30％。

【技术特征摘要】
1.一种EGFR基因突变检测的引物探针组合，其特征在于，所述引物探针组合包括对EGFR基因突变检测特异性引物对、EGFR基因特异性探针、扩增阻断探针和内参系统；其中，所述EGFR基因突变检测特异性引物对的错配率为15-30％。2.根据权利要求1所述的引物探针组合，其特征在于，所述EGFR基因突变检测特异性引物对的错配率为20-25％；优选地，所述扩增阻断探针与EGFR基因突变检测特异性引物对中的下游引物的碱基重叠序列为3-10bp，优选为6-9bp；优选地，所述EGFR基因的突变检测的位点为2239_2247del9、2239_2248>C、2238_2248>GC、2235_2249del15、2236_2250del15、2237_2255>T、2239_2256del18、2240_2257del18、2239_2258>CA、2239_2251>C、2240_2251del12、2237_2251del15、2235_2252>AAT、2238_2252>GCA、2239_2253del15、2236_2253del18、2237_2254del18、2240_2254del15、2238_2255del18、L858R、T790M、2307_2308ins9、2310_2311insGGT、2319_2320insCAC、G719S、G719C、G719A、S768I、L861Q和S492R。3.根据权利要求1或2所述的引物探针组合，其特征在于，所述扩增阻断探针的5’端和3’端进行修饰；优选地，所述扩增阻断探针的5’端修饰有荧光基团或硫代修饰；优选地，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合，优选为NED；优选地，所述扩增阻断探针的3’端修饰有淬灭基团、磷酸化修饰或C3Spacer修饰；优选地，所述淬灭基团选自MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种或至少两种的组合，优选为MGB；优选地，所述EGFR基因特异性探针的5’端和3’端进行修饰；优选地，所述EGFR基因特异性探针的5’端修饰有荧光基团；优选地，所述荧光基团为FAM、HEX、TET、JOE、NED、VIC、CY3、CY5、ROX或TAMRA中的任意一种或至少两种的组合，优选为FAM；优选地，所述EGFR基因特异性探针的3’端修饰淬灭集团；优选地，所述淬灭基团选自MGB、BHQ-1、BHQ-2、BHQ-3或Phosphorothioate中的任意一种或至少两种的组合，优选为MGB。4.根据权利要求1-3中任一项所述的引物探针组合，其特征在于，所述EGFR基因突变检测特异性引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.1-36所示；优选地，所述EGFR基因特异性探针的核苷酸序列如SEQIDNO.37-42所示；优选地，所述扩增阻断探针的核苷酸序列如SEQIDNO.43-51所示；优选地，所述内参系统包括内参引物对和内参探针；优选地，所述内参引物对的核苷酸序列如SEQIDNO.52-53所示；优选地，所述内参探针的核苷酸序列如SEQIDNO.54所示。5.一种检测EGFR基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-4中任一项所述的引物探针组合物。6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阴性质控、阳性质控和辅助试剂；优选地，所述阴性质控为TE缓冲液；优选地，所述阳性质控为EGFR基因19外显子2240-2257del18突变质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：白静，盛青松，姚鲁帅，
申请(专利权)人：无锡市申瑞生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32