一株抗龋病植物乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株抗龋病植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）K41及其应用。本发明专利技术提供的植物乳杆菌K41，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.15462，保藏日期2018年3月20日。该菌株分离至四川省南充市顺庆区延安路的农家自制泡菜，在MRS琼脂培养基上生长良好，可以抑制变异链球菌UA159菌体生长、胞外多糖形成、羟基磷灰石降解、生物膜形成，具有很好的自聚及共聚能力，对抗生素、盐、酸具有较好的耐受性，易于在口腔中定植。动物试验表明K41可以抑制大鼠牙釉质脱矿及龋病程度，应用于功能性食品，对人体健康具有非常重要的意义。

A caries resistant lactobacillus plantarum and its application

The invention discloses an anti caries plant lactobacillus plantarum (Lactobacillus plantarum) K41 and its application. The Lactobacillus plantarum K41 provided by the invention is preserved in the General Microbial Center of China Microbial Species Preservation Management Committee, the preservation number CGMCC No. 15462, and the preservation date is March 20, 2018. The strain was isolated from Pickles made by farmers in Yan'an Road, Shunqing District, Nanchong City, Sichuan Province, and grew well on MRS agar medium. It could inhibit the growth of Streptococcus mutans UA159, the formation of extracellular polysaccharides, the degradation of hydroxyapatite and the formation of biofilm. It had good self-polymerization and copolymerization ability, and had better antibiotic, salt and acid properties. Good tolerance, easy to colonize in the mouth. Animal experiments show that K41 can inhibit enamel demineralization and dental caries in rats. It is very important for human health to apply K41 to functional food.

【技术实现步骤摘要】
一株抗龋病植物乳杆菌及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一株对龋病具有控制作用的植物乳酸菌及其在制备功能性食品中的应用。
技术介绍
龋病，又称“虫牙”或“蛀牙”，是人类口腔常见的细菌感染性疾病，世界卫生组织已将其与肿瘤和心血管疾病并列为人类三大重点防治疾病。世界权威医学杂志《柳叶刀》所公布的2016年全球疾病负担研究（GlobalBurdenofDiseaseStudy2016,GBD）数据显示，全球恒牙龋病患病率居所有疾病首位，发病率居第二位，仅次于上呼吸道感染，乳牙龋病发病率位居第五位。2017年国家卫生计生委发布的第4次全国口腔健康流行病学普查结果显示，我国5岁儿童龋患率达70.9%，12岁儿童龋患率为34.5%；与十年前相比，5岁和12岁儿童龋患率分别上升了5.8和7.8个百分点，12岁儿童龋均为0.86颗。国务院办公厅所发布的《中国防治慢性病中长期规划（2017-2025年）》中明确指出，应加大龋病干预力度，将12岁儿童患龋率控制在30%以内。有研究表明，引起龋病主要的病原菌是链球菌，包括唾液链球菌、血液链球菌、轻型链球菌，变异链球菌等，其中变异链球菌（Streptococcusmutans）是最主要的致病菌。一方面因为变异链球菌具有很强产酸和耐酸特性，可以在口腔环境中大量生长繁殖，引起口腔pH降低；另一方面变异链球菌可以利用口腔中碳水化合物产生不溶性胞外多糖，造成大量产酸耐酸细菌的积累，形成菌斑生物膜，加快羟基磷灰石的降解及龋病的形成，很多研究表明菌斑生物膜是导致龋病的根本原因。早期预防是控制龋病的重要环节，目前主要通过使用洗必泰、氟化物进行预防，但基于化学试剂的耐药性及儿童不爱刷牙的特点，不宜使用抗牙菌斑药物，故目前急需要提供一种可以降低龋病发生率的安全、有效、可行的方法。基于少部分乳酸菌对变异链球菌的抑制作用，所以分离筛选对变异链球菌有抑制的乳酸菌，对于预防口腔龋病具有良好的应用前景。乳酸菌（Lacticacidbacteria，LAB）作为一种益生菌，被美国食品药品监督管理局（FDA）和世界卫生组织（WHO）认定是对人体有利的微生物，被广泛用于食品、医药、饲料、轻工业等。但乳酸菌在口腔中的运用仍具有争议性，其中，Hasslöf.P等人通过对179名志愿者采用随机双盲试验表明早期摄入LactobacillusparacaseiF19对龋病发生、变异链球菌和乳酸菌的数量没有长期的影响；Fitzgerald等人发现嗜酸乳杆菌具有产酸耐酸能力，可以与变异链球菌产生协同作用加剧龋病的发生；然而，Hedayati-Hajikand等人通过随机双盲试验对138名2-3的儿童进行临床试验发现，早期食用含有益生菌的咀嚼片可以减少龋病的发生；Campus等人也发现摄入3周含有LactobacillusbrevisCD2的糖果对龋病、变异链球菌数量、牙龈出血具有一定的抑制作用。植物乳杆菌作为一种益生菌，被广泛应用于肉类加工和食品发酵过程中。目前植物乳杆菌的报道主要集中在对肠道，心血管疾病的研究，关于对口腔益生性的研究较少，包括：1）YangY,ChenW,ZhangH,etal.ProbioticcharacteristicsofLactobacilusplantarumHO-69appliedinoralcavity.[J].WestChinaJournalofStomatology,2008,26(5):482-485.该研究表明植物乳杆菌HO-69具有广谱抑制活性，且不易于龋病的形成，是口腔应用中的潜在益生菌。2）ChunCC,ChenKC,DerDP,etal.AntibacterialpropertiesofLactobacillusplantarumisolatedfromfermentedmustardsagainstStreptococcusmutans[J].AfricanJournalofMicrobiologyResearch,2013,7(40):4787-4793.该研究从传统发酵芥菜中分离出一株对变异链球菌具有抑制作用的植物乳酸杆菌B0105，当pH=4时，对变异链球菌的抑菌圈大小为16.0±0.1mm，并表明抑制物质主要是细菌素化合物。3）GuoX,ZhangJ,YangZ.ScreeningofLacticAcidBacteriaforInhibitingOralStreptococcusmutansandPreliminaryStudyofAntibacterialMechanism[J].FoodScience,2016.试验表明植物乳杆菌K25对变异链球菌具有很强的抑菌效果，抑菌圈直径大于13.0mm，变异链球菌1.2499的最小抑菌浓度为1.25×107CFU/mL。4）AhnKB,BaikJE,ParkOJ,etal.LactobacillusplantarumlipoteichoicacidinhibitsbiofilmformationofStreptococcusmutans[J].PlosOne,2018,13(2):e0192694.这项研究表明变异链球菌生物膜的抑制率与植物乳杆菌的浓度有关，且抑制率在40%～85%。基于以上报道，部分植物乳杆菌对龋病具有潜在的控制作用，但目前仅停留在体外试验，而且乳酸菌体外对龋病的控制作用并不能直接说明其在体内也有相同的效果，因而将这些菌株应用于实际生产也还有一定的距离。故通过体内外试验筛选一株对龋病具有较好控制作用的植物乳杆菌，将其应用于功能性食品领域，可以抵抗龋病的发生，具有广阔应用价值和前景。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一株抗龋病植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）K41及其应用。本专利技术通过以下技术方案实现：所述植物乳杆菌K41于2018年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15462，保藏地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。所述植物乳杆菌K41是从四川省南充市顺庆区延安路的农家自制泡菜中分离得到。所述植物乳杆菌K41，在MRS琼脂培养基上生长良好，菌落为乳白色，表面光滑，边缘整齐，不透明，触媒阴性，对菌体形态进行镜检，革兰氏染色呈阴性，杆状。所述植物乳杆菌K41，对变异链球菌UA159的抑菌圈直径为（14.7±1.5）mm，略高于阳性对照醋酸氯己定，但无显著性差异。所述植物乳杆菌K41，通过自聚及共聚能力试验表明，该菌株具有很强的自聚集能力，同时与变异链球菌UA159的共聚能力在4h也高达41.87%。所述植物乳杆菌K41，对不溶性胞外多糖、羟基磷灰石（HAP）具有很好的抑制效果，抑制率分别为90.70%、58.96%。所述植物乳杆菌K41，与变异链球菌UA159共培养时，生物膜中UA159数量减少了93.13%，且生物膜结构变得疏松，多糖含量明显降低。所述植物乳杆菌K41，对酸、盐、抗生素具有一定的耐受性。所述植物乳杆菌K41，通过动物模型试验表明可以减少大鼠牙釉质的脱矿程度，控制龋病的形成。所述植物乳杆菌K41，通过采用细菌通用引物27F和1492R对其16SrDNA进行扩增，得到有1464碱本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）K41于2018年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 15462。

【技术特征摘要】
1.植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）K41于2018年3月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.15462。2.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙群，张国建，李雨庆，卢淼，刘绒梅，李洋，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川,51