一种核酸快速提取方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种核酸快速提取方法，包括以下步骤：1)将样品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均匀；所述提取溶液中含有Tris缓冲液；2)将吸附膜浸渍于提取溶液；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜，将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。本发明专利技术同时提供与上述方法对应的试验盒。本发明专利技术以固相提取的原理，在弱碱性条件下，使带负电的核酸吸附于经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜，再通过洗脱液进行洗脱，以快速地获得核酸；该方法提取过程快速、杂质少、对温度的限制性小、核酸不易解离，适用于户外等条件简陋的场合。

A rapid extraction method of nucleic acid and its kit

The present invention discloses a method for rapid extraction of nucleic acid, including the following steps: 1) placing the sample into a collection tube containing the extracted solution and dispersing it evenly; the extracted solution contains Tris buffer solution; 2) impregnated with the adsorbed membrane in the extraction solution; the adsorption membrane is a cellulose treated by an anion resin containing quaternary ammonium salt. Membrane; 3) use washing buffer to wash the adsorption membrane and release the nucleic acid in the eluent or PCR reaction solution. The invention also provides a test box corresponding to the above method. The invention uses the principle of solid phase extraction to adsorb the negative electric nucleic acid on the cellulose membrane treated by the anion resin containing quaternary ammonium salt under the condition of weak alkali, and elute the nucleic acid quickly by elution solution to obtain the nucleic acid quickly. The process is fast, less impurities, less restrictive to temperature, and the nucleic acid is not easy to be solved. It is suitable for simple outdoor conditions.

【技术实现步骤摘要】
一种核酸快速提取方法及其试剂盒
本专利技术涉及基因工程技术方法及其仪器
，尤其涉及一种核酸快速提取方法及其试剂盒。
技术介绍
核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。提供分离纯化核酸总的原则：1)应保证核酸一级结构的完整性；2)排除其它分子的污染。在分离过程中，应该注意以下事项：1.)尽量简化操作步骤，缩短提取过程，以减少各种有害因素对核酸的破坏；2)减少化学因素对核酸的降解，为避免过酸、过碱对核酸链中磷酸二酯键的破坏，操作多在pH4-10的条件下进行；3)减少物理因素对核酸的降解，而易造成降解的因素主要包括机械剪切力和高温；核酸提取过程中，一般在低温操作，但现在发现在室温快速提取与低温提取，获得核酸的质量没有太大差异；4)防止核酸的生物降解，细胞内或外来的各种核酸酶消化核酸链中的磷酸二酯键，直接破坏核酸的一级结构，如DNA酶和RNA酶；其中DNA酶是需要金属二价离子Mg2+、Ca2+的激活，使用EDTA、柠檬酸盐螯合金属二价离子基本可以抑制DNA酶活性。而RNA酶不但分布广泛，极易污染样品，而且耐高温、耐酸、耐碱、不易失活，所以是生物降解RNA提取过程的主要危害因素。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的之一在于提供一种易于在户外操作的核酸快速提取方法。本专利技术的目的之二在于提供一种快速核酸提取试剂盒。本专利技术的目的之一采用如下技术方案实现：一种核酸快速提取方法，包括以下步骤：1)将样品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均匀；所述提取溶液中含有Tris缓冲液；2)将吸附膜浸渍于提取溶液；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜，将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。进一步地，步骤1)中，所述Tris缓冲液的pH值为8.0。进一步地，步骤1)中，所述提取溶液中，还含有最终浓度为以下浓度的以下组分：1M的异硫氰酸胍、0.5wt％TritonX100，1wt％Tween-20，60μg/mL的蛋白酶K。进一步地，步骤1)中，加入研磨球进行分散；所述提取溶液中，还含有最终浓度为以下浓度的以下组分：2M的异硫氰酸胍、150mMNaCl、10mMEDTA，1％Tween-20，0.5％SDS。进一步地，所述研磨球为钢球。进一步地，步骤3)中，在pH＝8.3的条件下释放核酸。本专利技术的目的之二采用如下技术方案实现：一种快速核酸提取试剂盒，包括提取溶液、吸附膜、洗涤缓冲液和洗脱液，所述提取溶液中含有Tris缓冲液，所述提取溶液的pH值为8.0；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；所述洗脱液的pH值为8.3。进一步地，所述提取溶液中，还含有最终浓度为以下浓度的以下组分：1M的异硫氰酸胍、0.5wt％TritonX100，1wt％Tween-20，60μg/mL的蛋白酶K。进一步地，还包括研磨球，所述研磨球为钢球。进一步地，所述洗脱液为含有0.1wt％Tween-20的Tris缓冲液。相比现有技术，本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供了一种核酸快速提取方法及其试剂盒，以固相提取的原理，在弱碱性条件下，使带负电的核酸吸附于经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜，再通过洗脱液进行洗脱，以快速地获得核酸；该方法提取过程快速、杂质少、对温度的限制性小、核酸不易解离，适用于户外等条件简陋的场合。附图说明图1为本专利技术操作示意图；图2为吸附膜吸附能力试验的对照组的荧光定量PCR检测结果；其中曲线A-F代表PCR反应中加入的核酸浓度依次为38000pg/μL,3800pg/μL,380pg/μL,38pg/μL,3.8pg/μL,0.38pg/μL；图3为吸附膜吸附能力试验的试验组的荧光定量PCR检测结果；其中曲线a-f代表PCR反应中加入的核酸浓度依次为38000pg/μL,3800pg/μL,380pg/μL,38pg/μL,3.8pg/μL,0.38pg/μL；图4为吸附膜吸附能力试验的普通PCR测结果对照图其中泳道A-F代表对照组PCR反应中加入的核酸浓度依次为38000pg/μL,3800pg/μL,380pg/μL,38pg/μL,3.8pg/μL,0.38pg/μL；其中泳道a-f代表试验组PCR反应中加入的核酸浓度依次为38000pg/μL,3800pg/μL,380pg/μL,38pg/μL,3.8pg/μL,0.38pg/μL；图5为不同样品的核酸提取检测结果；其中，M:DL2000Marker；1:副溶血弧菌；2:猪链球菌II型；3:伪狂犬血清；4:伪狂犬细胞上清；5:猪瘟淋巴组织；图6为提取时间优化图；图7为洗涤时间优化图；图8为灵敏度试验；图9为实施例1的提快速核酸提取试验盒与Axgen核酸提取试验盒的比较其中，M:DL2000Marker；1：Axgen的核酸提取试剂盒；2：实施例1。具体实施方式下面，结合附图以及具体实施方式，对本专利技术做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。本专利技术提供一种核酸快速提取方法，包括以下步骤：1)将样品置入含有提取溶液的收集管，分散均匀；所述提取溶液中含有Tris缓冲液；2)将吸附膜浸渍于提取溶液；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜，于洗脱液或PCR反应液释放核酸。该方法利用在Tris缓冲液的弱碱条件下，经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜的表面分布有大量的季铵碱基，与样品中的核酸进行阴离子交换，从而快速将核酸吸附于纤维素膜，洗涤去杂质后，再洗脱释放核酸，进一步进行PCR扩增等，以快速获得样品的遗传信息。以下具体实施方式中，如未特殊说明，所采用的病料或试剂均可通过市售的方式或普通的试验手段获得。部分试剂或试剂盒的来源信息如下所示：体液病毒RNA/DNA小量制备试剂盒购自Axygen公司；RNA酶抑制剂、M-MLV逆转录酶购自Promega公司；dNTP购自TaKaRa公司；琼脂糖凝胶DNA纯化回收试剂盒以及普通质粒小量提取试剂盒均购自Omega公司。以下具体实施方式中，可检测的样品的形式包括但不限于血清、细胞上清或组织样品。实施例1：一种快速核酸提取试剂盒，包括提取溶液、吸附膜、洗涤缓冲液和洗脱液或PCR反应液，所述提取溶液中含有Tris缓冲液，所述提取溶液的pH值为8.0；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；所述洗脱液的pH值为8.3；该提取溶液包括以最终浓度计的以下组分：1M的异硫氰酸胍、100mMTris(pH8)、0.5wt％TritonX100、1wt％Tween-20、60μg/mL的蛋白酶K；该洗涤缓冲液由以最终浓度计的以下组分组成：30mMTris(pH8.0)、0.1％Tween-20.实施例2：一种快速核酸提取试剂盒，包括提取溶液、吸附膜、研磨球、洗涤缓冲液和洗脱液或PCR反应液，所述提取溶液中含有Tris缓冲液，所述提取溶液的pH值为8.0；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；所述洗脱液的pH值为8.3；该提取溶液包括以最终浓度计的以下组分：2M异硫氰酸胍，100mMTris(pH8)，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将样品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均匀；所述提取溶液中含有Tris缓冲液；2)将吸附膜浸渍于提取溶液；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜，将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。

【技术特征摘要】
1.一种核酸快速提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将样品置入含有提取溶液的收集管，分散裂解均匀；所述提取溶液中含有Tris缓冲液；2)将吸附膜浸渍于提取溶液；所述吸附膜是经含有季铵盐的阴离子树脂处理后的纤维素膜；3)使用洗涤缓冲液浸洗吸附膜，将吸附膜置于洗脱液或PCR反应液中释放核酸。2.如权利要求1所述的核酸快速提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述Tris缓冲液的pH值为8.0。3.如权利要求1所述的核酸快速提取方法，其特征在于，步骤1)中，所述提取溶液中，还含有最终浓度为以下浓度的以下组分：1M的异硫氰酸胍、0.5wt％TritonX100、1wt％Tween-20、60μg/mL的蛋白酶K。4.如权利要求1所述的核酸快速提取方法，其特征在于，步骤1)中，加入研磨球进行分散；所述提取溶液中，还含有最终浓度为以下浓度的以下组分：2M的异硫氰酸胍、150mMNaCl、10mMEDTA，1％Tween-20，0.5％...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯月娥，伍建敏，李中圣，
申请(专利权)人：广东海大畜牧兽医研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44