一种RNA的提取液、制备方法及油棕果RNA提取方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种RNA的提取液、制备方法及油棕果RNA提取方法。本发明专利技术所述的RNA提取液各组分均为常用的试剂，制备方法简单，质量稳定可控。采用本发明专利技术所述的RNA提取液提取油棕果的RNA，所得的油棕果RNA完整性好，质量好，降解少，杂质少，提取时间大大缩短。

【技术实现步骤摘要】
一种RNA的提取液、制备方法及油棕果RNA提取方法
本专利技术涉及生物
，特别是指一种RNA的提取液、制备方法及油棕果RNA提取方法。
技术介绍
油棕(学名：ElaeisguineensisJacq.)属多年生单子叶植物，是热带木本油料作物。油棕的果肉、果仁含油丰富，在各种油料作物中，有“世界油王”之称。由于油棕果实含有大量的色素、油脂、多糖等成分，其RNA提取难度较大。而纯度高、完整性好、无杂质污染的RNA是进行克隆、cDNA文库构建等分子生物学研究的基础。一些常用的RNA提取试剂盒，包括InvitrogenTrizol和Tiagen的RNAplant等，并不适应油棕果RNA的提取。提取过程中，RNA降解严重，提取效率极低。即使能够提取得到RNA，也含有大量杂质，难以进行后续的研究分析。CTAB法虽然可以用于油棕果RNA的提取，但是这种方法非常繁琐，耗时较长，提取的RNA降解严重，同时含有较多的DNA污染，影响进一步的研究。
技术实现思路
本专利技术提出了一种RNA的提取液、制备方法及油棕RNA提取方法，能够显著缩短油棕果RNA的提取周期，操作简便，RNA质量好，降解少，杂质少。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种RNA的提取液，每100ml的RNA提取液中包括：进一步，每100ml的RNA提取液中包括：上述RNA提取液的制备方法，包括以下步骤：取配方量的β-巯基乙醇、异硫氰酸铵、异硫氰酸胍、氯化钠、甘油、醋酸钠、水混合均匀，再加入配方量的水饱合苯酚混匀，定容即得。进一步，加入的醋酸钠预先配成摩尔浓度为3mol/L的醋酸钠溶液。一种油棕果RNA的提取方法，包括以下步骤：(1)取研磨的油棕果加入以上所述的RNA提取液，充分混匀，然后在15-35℃下放置5-15分钟；(2)加入氯仿，充分震荡，然后在15-35℃下放置5-10分钟；(3)离心，然后将上清液吸到新的离心管中；在上清液中加入异丙醇和无水乙醇，充分混匀，静置之后离心，离心后将上清液倒掉；(4)再加入体积浓度为75％的乙醇，离心，然后将上清倒掉，自然挥发除去全部乙醇；然后加入水，充分震荡使之完全溶解。进一步，所述步骤(1)中每80-100mg油棕果中加入1ml油棕提取液。进一步，所述步骤(2)中每1ml油棕果提取液加入150-250μl氯仿。进一步，所述步骤(3)中，两次离心操作均在10000-12000转/分钟下离心10-20分钟；在3-8℃下静置10分钟；每1ml油棕果提取液加入200-400μl异丙醇和100-300μl无水乙醇；进一步，所述步骤(4)中，在8000-12000转/分钟下离心3-8分钟；每1ml油棕果提取液中加入1-3ml的75％乙醇；水的加入量为每1ml油棕果提取液中加入水20-30μl。本专利技术的有益效果：本专利技术所述的RNA提取液各组分均为常用的试剂，制备方法简单，质量稳定可控。采用本专利技术所述的RNA提取液提取油棕果的RNA，28S,18S和5SRNA带清晰，没有拖带，说明所得的油棕RNA完整性好。同时采用本专利技术所述的油棕提取液及提取方法提取的RNAA260/A280值在1.86到2.08之间，而CTAB法提取油棕RNA，其A260/A280值在1.1到1.42。因而本专利技术所述的提取液及提取方法提取的RNA质量好，杂质少，便于进行后续进一步的研究分析。此外，采用CTAB法提取油棕果RNA一般需要5-7小时，而本专利技术所述的提取方法仅需1.5-2小时左右即可完成整个提取过程，提取时间大大缩短。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为4种RNA提取方法提取油棕果的RNA的电泳图，包括CTAB法，InvitrogenTrizol，Tiagen的RNAplant以及本专利技术所述的RNA提取液(M)。图2为采用Agilent2100Bioanalyzermicrofluidicelectrophoresischip检测用CTAB以及本专利技术提取方法提取的油棕果RNA的质量。其中，(a)CTAB提取RNA的芯片电泳图；(b)根据芯片电泳结果，模拟的水平电泳图；(c)M提取RNA的芯片电泳图；(d)根据芯片电泳结果，模拟的水平电泳图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1一种RNA的提取液，每100ml的RNA提取液中包括：实施例2一种RNA的提取液，每100ml的RNA提取液中包括：实施例3一种RNA的提取液，每100ml的RNA提取液中包括：实施例4一种RNA提取液的制备方法，包括以下步骤：取配方量的β-巯基乙醇、异硫氰酸铵、异硫氰酸胍、氯化钠、甘油、醋酸钠、水混合均匀，再加入水饱合苯酚混匀，即得。醋酸钠预先配成摩尔浓度为3mol/L的醋酸钠溶液再加入。实施例5一种油棕果RNA的提取方法，包括以下步骤：(1)取80-100mg研磨的油棕果加入1ml实施例1-4任一项中制得的RNA提取液，充分混匀，然后在15℃下放置5分钟；(2)加入150μl氯仿，充分震荡，然后在15℃下放置5分钟；(3)12000转/分钟下离心10分钟，然后将上清液吸到新的离心管中；在上清液中加入400μl异丙醇和300μl无水乙醇，充分混匀，在3℃下静置10分钟之后,10000转/分钟下离心20分钟，离心后将上清液倒掉；(4)再加入1ml体积浓度为75％的乙醇，在8000为转/分钟下离心3分钟，然后将上清倒掉；将离心管打开，使乙醇全部自然挥发掉；然后加入20μl水，充分震荡使之完全溶解。实施例6一种油棕果RNA的提取方法，包括以下步骤：(1)取80-100mg研磨的油棕果加入1ml实施例1-4任一项中所述的RNA提取液，充分混匀，然后在35℃下放置15分钟；(2)加入250μl氯仿，充分震荡，然后在35℃下放置10分钟；(3)10000转/分钟下离心20分钟，然后将上清液吸到新的离心管中；在上清液中加入200μl异丙醇和100μl无水乙醇，充分混匀，在8℃下静置10分钟之后,10000转/分钟下离心15分钟，离心后将上清液倒掉；(4)再加入3ml体积浓度为75％的乙醇，在12000为转/分钟下离心8分钟，然后将上清倒掉；将离心管打开，使乙醇全部自然挥发掉；然后加入25μl水，充分震荡使之完全溶解。实施例7一种油棕果RNA的提取方法，包括以下步骤：(1)取80-100mg研磨的油棕果加入1ml实施例1-4任一项中所述的RNA提取液，充分混匀，然后在25℃下放置10分钟；(2)加入200微升氯仿，充分震荡，然后在20℃下放置8分钟；(3)12000转/分钟下离心15分钟，然后将上清液吸到新的离心管中；在上清液中加入300μl异丙醇和200μl无水乙醇，充分混匀，在4℃下静置10分钟之后,12000转/分钟下离心10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA的提取液，其特征在于，每100ml的RNA提取液中包括：

【技术特征摘要】
1.一种RNA的提取液，其特征在于，每100ml的RNA提取液中包括：2.如权利要求1所述的一种RNA的提取液，其特征在于，每100ml的RNA提取液中包括：3.一种如权利要求1或2所述的RNA提取液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：取配方量的β-巯基乙醇、异硫氰酸铵、异硫氰酸胍、氯化钠、甘油、醋酸钠、水混合均匀，再加入水饱合苯酚混匀，即得。4.如权利要求3所述的一种RNA提取液的制备方法，其特征在于：加入的醋酸钠为摩尔浓度为3mol/L的醋酸钠溶液。5.一种油棕果RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取研磨的油棕果加入权利要求1-4任一项中制得的RNA提取液，充分混匀，然后在15-35℃下放置5-15分钟；(2)加入氯仿，充分震荡，然后在15-35℃下放置5-10分钟；(3)离心，然后将上清液吸到新的离心管中；在上清液中加入异丙醇和无水乙醇，充分混匀，静置之后离心，离心后将上清液倒掉；(4)再加入体积浓度为7...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖勇，夏薇，周丽霞，杨耀东，李静，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院椰子研究所，
类型：发明
国别省市：海南,46