核酸保存液及其制备方法、应用该保存液保存核酸的方法技术

本发明专利技术公开了一种核酸保存液及其制备方法、应用该保存液保存核酸的方法，属于核酸保存技术领域，以100mL保存液计，包括如下组分：柠檬酸三钠5.8‑5.95g；生物缓冲剂19.56‑20.21g；乙二胺四乙酸二钠0.173‑0.192g；酸度调节剂8.2‑9.0ml；防腐剂28‑33μL；余量为纯水；保存液的pH值为3.5‑4.0；缓冲液包括盐酸三乙醇胺、N,N‑双(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸中的至少一种；酸度调节剂包括冰乙酸、聚丙烯酸中的至少一种。本发明专利技术中的保存液具有在常温下保持核酸的组织结构稳定的优点。

Nucleic acid preservation solution and its preparation method and method for preserving nucleic acid using the preservation solution

The invention discloses a nucleic acid preservation solution and a preparation method and a method for using the preservation solution to preserve nucleic acid. It belongs to the field of nucleic acid preservation technology, and uses the 100mL preservation liquid meter, including the following components: three sodium citrate 5.8 sodium carbonate, 19.56 bio buffer 20.21g, ethylenediamine four acetic acid two sodium 0.173 0.192g; acidity regulator 8.2. 9.0ml; preservative 28, 33 mu L; the remainder is pure water; the pH value of the preservative is 3.5, 4; the buffer contains at least one of the triethanolamine hydrochloride, the N (2 hydroxyethyl) 2 (2 hydroxyethyl) 2 sulfonic acid; the acidity regulator includes at least one of the glacial acetic acid and polyacrylic acid. The preservation solution of the invention has the advantages of stable nucleic acid tissue structure at normal temperature.

【技术实现步骤摘要】
核酸保存液及其制备方法、应用该保存液保存核酸的方法
本专利技术涉及核酸保存
，更具体地说，它涉及一种核酸保存液及其制备方法、应用该保存液保存核酸的方法。
技术介绍
核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。核酸的性能不稳定，容易变性，因此，在研究过程中，通常将核酸置于超低温(-70℃)下进行长期保存，然而，该保存方式易对核酸的结构造成影响，且研究过程中进行检测的获得的结果不准确。授权公告号为CN105145545B、授权公告日为2017年11月03日的中国专利公开了一种核酸保护液，按照以下方法制备：将包括以下组分的配方溶于水中使每升所述核酸保护液含有：D-葡萄糖4100-4300mg，4-羟乙基哌嗪乙磺酸2400-2500mg；NaC13700-3900mg，NaHCO32000-2200mg，NaH2PO4110-125mg，KC1350-400mg，CaC12180-210mg，MgC1270-85mg；L-赖氨酸盐酸盐135-150mg，L-组氨酸盐酸盐75-85mg，L-异亮氨酸90-110mg，L-亮氨酸90-110mg，L-苏氨酸85-95mg，L-苯丙氨酸60-70mg，L-缬氨酸85-95mg，L-酪氨酸65-75mg；氯化胆碱3-5mg，叶酸3-5mg，烟酰胺3-5mg，肌醇3-5mg，维生素A0.15-0.2mg，维生素H0.15-0.2mg，维生素E0.15-0.2mg；Holo-人转铁蛋白90-110mg，牛血清蛋白90-110mg，丙谷二肽400-450mg，胰岛素15-20mg；肾上腺酮1.5-2.0mg，亚油酸3.5-4.0mg，亚麻酸2.5-3.0mg，黄体酮0.07-0.13mg；青霉素(0.9-1.0)×105单位，链霉素90-100mg，两性霉素B0.2-0.3mg。现有技术中采用了大量组分进行相互配合，最终获得的保存液可在室温下保存核酸。然而，现有技术中使用的组分的数量非常多，易造成保存液的生产成本过高；且在制备过程中，数量繁多的组分在配备时，易出现工作量大、操作繁琐等弊端。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的一在于提供一种核酸保存液，具有在常温下保持核酸的组织结构稳定的优点。为实现上述目的一，本专利技术提供了如下技术方案：一种核酸保存液，以100mL保存液计，包括如下组分：柠檬酸三钠5.8-5.95g；生物缓冲剂19.56-20.2lg；乙二胺四乙酸二钠0.173-0.192g；酸度调节剂8.2-9.0ml；防腐剂28-33μL；余量为纯水；所述保存液的pH值为3.5-4.0；所述缓冲液包括盐酸三乙醇胺、N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸中的至少一种；所述酸度调节剂包括冰乙酸、聚丙烯酸中的至少一种。通过上述技术方案，生物缓冲剂中，盐酸三乙醇胺、N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸易溶于纯水中并形成相应的缓冲液，当外界的温度、压强等因素发生变化时，盐酸三乙醇胺与纯水形成的缓冲液，当与碱性试剂反应时可以有效防止核酸析出，可保护被保存的核酸不易受外界因素的影响，进而保持核酸处于较好的状态。乙二胺四乙酸二钠作为一种金属螯合剂，能与Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二价金属离子结合，从而达到去除保存液中不可避免出现的二价金属离子，进而起到保护核酸免受金属离子影响的作用。当将保存液中的Mg2+螯合后，从而有助于抑制多数依靠Mg2+作用的核酸酶的生长，进而降低核酸酶对核酸降解的风险，使核酸维持原始的组织结构，在检测核酸的过程中，可使检测结果较为准确。核酸本身带有负电荷，柠檬酸三钠溶于纯水后，存在于溶液中的钠盐离子，包覆在核酸的外部，从而使核酸可在纯水中分散但不易溶解在纯水中。此外，柠檬酸三钠与酸度调节剂同时使用，可起到一定的酸度调节剂作用，使保存液的pH值保持在3.5-4.0的范围内。保存液的pH值保持在3.5-4.0的范围内，可有效减少核酸水解的可能，使核酸维持原有的组织结构，且对核酸的保存的时间较长，12个月后，对被保存的核酸进行检测时，被保存后的核酸仍然具有12个月之前的组织结构特征。且值得注意的是：本申请中的保存液对核酸的保存时间超过12个月。此外，本申请中的组分数量较少，且生产成本较低。进一步优选为：所述生物缓冲剂为盐酸三乙醇胺和N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸，所述盐酸三乙醇胺的浓度为400-600mmo1/L，所述盐酸三乙醇胺的使用量为9-9.5g；所述N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸的浓度为400-600mmo1/L，所述N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸的使用量为10.56-10.7lg。通过上述技术方案，盐酸三乙醇胺与N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸配合所形成的生物缓冲液，比单独使用盐酸三乙醇胺或N，N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸形成的缓冲液具有更好的稳定体系以及保护核酸不被降解的作用，使被保存的核酸具有更加稳定的作用。进一步优选为：所述酸度调节剂为冰乙酸和聚丙烯酸，所述冰乙酸的浓度为0.7-0.9mol/L，所述冰乙酸的使用量为4.4-4.7mL；所述聚丙烯酸的浓度为3-5wt％，所述聚丙烯酸的使用量为3.8-4.3mL。进一步优选为：所述防腐剂为Proclin-300。通过上述技术方案，Proclin-300具有优异的抑制微生物生长的作用，从而使本申请中的保存液的整体环境维持较为稳定，进而有助于减少微生物等对核酸的降解影响。本专利技术的目的二在于提供一种核酸保存液的制备方法，使获得的核酸保存液具有均匀、稳定的质地的效果。为实现上述目的二，本专利技术提供了如下技术方案：一种核酸保存液的制备方法，包括如下步骤：步骤一，将柠檬酸三钠、生物缓冲剂、乙二胺四乙酸二钠与30ml纯水充分混合直至完全溶解，形成第一混合物；步骤二，向步骤一中获得的第一混合物中加入酸碱调节剂，充分混合，调节pH值为3.5-4.0，再加入防腐剂，最后加入纯水定容至100ml，获得核酸保存液。通过上述技术方案，先将柠檬酸三钠、生物缓冲剂、乙二胺四乙酸二钠与纯水混合充分，再加入酸碱调节剂进行pH值调节，有助于提高形成的核酸保存液中的各组分混合的均匀性，进而使获得的pH值更为准确。进一步优选为：所述步骤二中，加入酸碱调节剂时，先加入冰乙酸，再加入聚丙烯酸，添加聚丙烯酸时，添加流速为25-30ml/min。通过上述技术方案，添加冰乙酸，可较为快速地将液相体系的pH值降低，再加入聚丙烯酸进行pH值的微调，从而有助于使pH值在3.5-4.0的范围内浮动，对被保存的核酸具有更好的稳定和保存的作用。针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的三在于提供一种应用保存液保存核酸的方法，具有长期有效保存核酸的优点。为实现上述目的三，本专利技术提供了如下技术方案：一种应用保存液保存核酸的方法，将核酸加入权1中所述的核酸保存液中，置于2-8℃的环境中保存。通过上述技术方案，现有技术中，通常将核酸置于超低温下进行保存，保存的要求较为苛刻，低温冷冻的成本较高。然而，无论是在冷冻过程中，还是在取出核酸进行后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸保存液，其特征在于，以100mL保存液计，包括如下组分：柠檬酸三钠5.8‑5.95g；生物缓冲剂19.56‑20.21g；乙二胺四乙酸二钠0.173‑0.192g；酸度调节剂8.2‑9.0ml；防腐剂28‑33μL；余量为纯水；所述保存液的pH值为3.5‑4.0；所述缓冲液包括盐酸三乙醇胺、N,N‑双(2‑羟乙基)‑2‑氨基乙磺酸中的至少一种；所述酸度调节剂包括冰乙酸、聚丙烯酸中的至少一种。

【技术特征摘要】
1.一种核酸保存液，其特征在于，以100mL保存液计，包括如下组分：柠檬酸三钠5.8-5.95g；生物缓冲剂19.56-20.21g；乙二胺四乙酸二钠0.173-0.192g；酸度调节剂8.2-9.0ml；防腐剂28-33μL；余量为纯水；所述保存液的pH值为3.5-4.0；所述缓冲液包括盐酸三乙醇胺、N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸中的至少一种；所述酸度调节剂包括冰乙酸、聚丙烯酸中的至少一种。2.根据权利要求1所述的核酸保存液，其特征在于，所述生物缓冲剂为盐酸三乙醇胺和N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸，所述盐酸三乙醇胺的浓度为400-600mmol/L，所述盐酸三乙醇胺的使用量为9-9.5g；所述N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸的浓度为400-600mmol/L，所述N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸的使用量为10.56-10.71g。3.根据权利要求1所述的核酸保存液，其特征在于，所述酸度调节剂为冰乙酸和聚丙烯酸，所述冰乙酸的浓度为0.7-0.9mol/L，所述冰乙酸的使用量为4.4-4.7mL；所述聚丙烯酸的浓度为3-5wt%，所述聚丙烯酸的使用量为3.8-4.3mL。4.根据权利要求1所述的核酸保存液，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：许安庆，汪鹏，刘恒生，
申请(专利权)人：杭州百殷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33