一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及细胞显色试剂技术领域，尤其是一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，包括即用型抗体工作液、试剂C液、试剂D液、试剂E液、试剂F液和试剂G液；即用型抗体工作液：包括抗体试剂、牛血清白蛋白、非还原性糖、鱼皮明胶、防腐剂proclin‑950、嫩叶绿色素、聚乙二醇、酪蛋白、表面活性剂、4‑氨基安替比林和氯化钠，抗体试剂包括试剂A液和试剂B液，本发明专利技术可用于宫颈脱细胞,也可用作组织的染色。本发明专利技术返蓝方式新创，返蓝效果较市面其他厂家试剂盒效果更好，封片方式更简单，且大大缩短了实验时间。

【技术实现步骤摘要】
一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒
本专利技术涉及细胞显色试剂
，具体领域为一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒。
技术介绍
目前有专利文件CN201510085334.8中提出了，对宫颈上皮组织标本，通过免疫组化双染的方法来判断宫颈上皮是否发生瘤样病变。该方法是对宫颈鳞状上皮组织样本的两种标记物磷蛋白(stathmin)和微小染色体维持蛋白(mini-chromosomemaintenanceproteins，MCM2)，通过使用免疫酶底物显色法来判断是否发生高度瘤样病变(CINIII)。但是该方法中样本为宫颈活检取材，属于有创性检测，一方面对个体带来创伤，另一方面以目前宫颈癌筛查标准需对病人进行二次取样，增加取样难度；还有该方法的两种标志物在癌前病变中的诊断研究还比较有限，临床应用更加有限。中国专利CN201210567622.3提出以宫颈脱落细胞，通过免疫细胞化学的方法检测P16INK4a蛋白表达来判断是否有宫颈癌前病变，但通过P16INK4a蛋白除了在宫颈异常增生细胞中过表达，也同时在输卵管化本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：包括即用型抗体工作液、试剂C液、试剂D液、试剂E液、试剂F液和试剂G液；/n即用型抗体工作液：包括试剂A液、B液。成分包括牛血清白蛋白、非还原性糖、鱼皮明胶、防腐剂proclin-950、嫩叶绿色素、聚乙二醇、酪蛋白、表面活性剂、4-氨基安替比林和氯化钠；/n试剂A液：P16INK4a抗体与Ki-67抗体组合成的混合一抗；/n试剂B液：HRP标记的羊抗鼠多聚物偶联二抗与AP标记的羊抗兔多聚物偶联二抗组合成的混合二抗；/n试剂C液：阻断剂；/n试剂D液：二氨基联苯胺；/n试剂E液：使试剂D液显色的缓冲液；/n试剂F液：核固红色原...

【技术特征摘要】
1.一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：包括即用型抗体工作液、试剂C液、试剂D液、试剂E液、试剂F液和试剂G液；
即用型抗体工作液：包括试剂A液、B液。成分包括牛血清白蛋白、非还原性糖、鱼皮明胶、防腐剂proclin-950、嫩叶绿色素、聚乙二醇、酪蛋白、表面活性剂、4-氨基安替比林和氯化钠；
试剂A液：P16INK4a抗体与Ki-67抗体组合成的混合一抗；
试剂B液：HRP标记的羊抗鼠多聚物偶联二抗与AP标记的羊抗兔多聚物偶联二抗组合成的混合二抗；
试剂C液：阻断剂；
试剂D液：二氨基联苯胺；
试剂E液：使试剂D液显色的缓冲液；
试剂F液：核固红色原；
试剂G液：使试剂F液显色的缓冲液。


2.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的试剂A液为p16INK4a单克隆抗体和Ki-67单克隆抗体的Tris缓冲溶液。


3.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的Tris缓冲溶液的pH值为7.19～7.81，其中，p16INK4a抗体浓度为0.09-1.5mg/L；Ki-67抗体浓度为0.09-1.5mg/L。


4.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的试剂B液中HRP标记的羊抗鼠多聚物偶联二抗为将多聚赖氨酸溶于磷酸盐缓冲溶液中加入适量高碘酸钠进行氧化，用多聚赖氨酸基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜，水溶辣根过氧化物酶加入适量高碘酸钠氧化，使用乙二醇终止反应透析过夜；将氧化多聚赖氨酸和羊抗鼠抗体和活化后辣根过氧化物酶混合反应后透析过夜，使用保存液稀释至工作液。


5.根据权利要求4所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的试剂B液中AP标记的羊抗兔多聚物偶联二抗为将多聚赖氨酸溶于磷酸盐缓冲溶液中加入适量高碘酸钠进行氧化，用多聚赖氨酸基质相同磷酸盐缓冲溶液进行透析过夜，水溶碱性磷酸酶加入适量高碘酸钠氧化，使用乙二醇终止反应透析过夜；将氧化多聚赖氨酸和羊抗兔ki67抗体和活化后辣根过氧化物酶混合反应后透析过夜，使用保存液稀释至工作液。


6.根据权利要求5所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的多聚赖氨酸基质相同磷酸盐缓冲溶液PH值均为5-9。


7.根据权利要求1所述的一种用于宫颈癌辅助诊断的免疫细胞化学标记显色试剂盒，其特征在于：所述的牛血清白蛋白浓度为0.10-2.65g/L；所述的非还原性糖浓度为10-20g/L；所述的鱼皮明胶浓度为1-4g/L；所述的防腐剂浓度为0.2-5ml/L；所述的嫩叶绿色素浓度为0.1-0.5g/L；所述的聚乙二醇浓度为10-50g/L；所述的酪蛋白浓度为0.1g-1g/L；所述的4-氨基安替比林浓度为0.1g-1.5g/L；所述的氯化钠浓度为10g-30g/L；...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡杰锋，李娟，汪鹏，刘恒生，
申请(专利权)人：杭州百殷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33