本发明专利技术涉及一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法。该试剂盒包括：分别容纳变性试剂、多种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液，其中所述多种HPV分型包括选自HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82中的一种或多种。本发明专利技术还涉及该试剂盒的操作方法。利用本发明专利技术所述的试剂盒，能够快速、全面、准确地对18种HPV人乳头状瘤病毒分型进行检测。另外，在本发明专利技术的操作方法中，无需将变性后的样本进行纯化处理，步骤减少，缩短了检测时杂交步骤所需时间，提高了操作的效率。提高了操作的效率。提高了操作的效率。
【技术实现步骤摘要】
一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法
[0001]本专利技术涉及病毒核酸检测领域，更具体而言，其涉及一种用于检测多种人乳头状瘤病毒(HPV)分型的试剂盒及操作方法。
技术介绍
[0002]宫颈癌是全球女性第二大恶性肿瘤。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年约有50多万宫颈癌新发病例，约27万妇女死于宫颈癌，其中85％以上发生在缺乏有效宫颈癌筛查及治疗规划的低收入和中等收入国家。目前世界已公认，高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染是引发宫颈癌变的首要因素，这使得高危型HPV检测可作为宫颈疾病辅助诊断及处理后定性监测的主要手段之一。
[0003]Qiagen公司(收购digene公司)的产品HC2于2009年通过了美国FDA的认证，其能一次性检测13种高危型HPV，具体包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59和68型。其检测原理及反应条件为：样本中的HPV双链DNA在65℃条件下45分钟变性分解成单链，单链DNA与13种RNA探针混合物在65℃条件下60分钟结合为DNA-RNA杂合体，DNA-RNA杂合体与捕获微孔板上的抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体在20-25℃条件下1100rpm的速度振荡60分钟结合固定在捕获微孔板上，再与偶联有碱性磷酸酶的抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体在20-25℃条件下反应30-45分钟结合，洗板后加入碱性磷酸酶底物20-25℃条件下反应15-30分钟酶促发光，在化学发光免疫分析仪上测量出来并用相对光单位(RLU)表示来确定碱性磷酸酶的含量，从而确定DNA-RNA杂合体含量，最终判定样本中的HPV DNA含量。
[0004]然而，在这些检测技术中，操作步骤较多，容易导致检测所花费的时间较长，难以快速定量判断样本中的所携带的细菌或者病毒的DNA含量，且其他检测HPV的方法主要以PCR技术为主，其检测过程中涉及到靶标DNA的扩增，容易导致靶标DNA量受到影响，最终导致检测结果不够准确。另外，这些目前公知的技术不能高效且准确地检测其中的一些分型，例如HPV16或HPV18。因此，本领域中仍然需要一种能够快速且准确定量检测出靶标DNA的手段，尤其是一种能够快速、准确地检测多种人乳头状瘤病毒分型的手段。
技术实现思路
[0005]针对现有技术存在的不足，本专利技术的目的在于提供一种能够检测多种(例如18种)人乳头状瘤病毒分型的试剂盒及操作方法。利用该试剂盒，能够快速、全面、准确地检测18种人乳头状瘤病毒分型，从而为该病毒的检查和确认提供有力的支持。
[0006]上述目的通过以下方案来实现：在第一方面，提供了一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒，其包括：分别容纳变性试剂、多种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液，其中所述多种HPV分型包括选自HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82中的一种或多种。
[0007]利用该试剂盒，能够一次性检测样本中是否携带多种HPV分型中的一种或多种，具
有检测全面、快速、准确的优点。
[0008]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述变性试剂为氢氧化钠溶液。
[0009]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述检测试剂为偶联有标记物的抗DNA-RNA杂合体的高特异性抗体。在一个优选方案中，标记物为荧光标记物、金标记物或酶标记物。在一个进一步优选的方案中，所述酶标记物为辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶。
[0010]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述底物试剂为碱性磷酸酶化学发光底物。
[0011]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述捕获板为包被有抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体的化学发光板。
[0012]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述阴性对照品为含有载体DNA的溶液。在一个优选方案中，所述载体DNA为动物基因组DNA，优选人类基因组DNA。在一个实施方案中，所述载体DNA的浓度为10-200mg/ml，优选为30、50、70、90、100、120、140、160或180mg/ml。
[0013]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述阳性对照品为含有1pg/ml HPV16 DNA和载体DNA的溶液。
[0014]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述洗涤液为Tris-HCl缓冲盐水液。
[0015]在第二方面，提供了一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒，其包括：分别容纳变性试剂、16种HPV分型特异性探针的混合物、2种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液。
[0016]利用该试剂盒，不仅能够一次性检测样本中是否携带18种HPV分型，而且能够检测其是否携带HPV16或18，具有检测全面、快速、准确的优点。
[0017]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述16种HPV分型包括HPV26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82，所述2种HPV分型包括HPV16和HPV18。
[0018]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述变性试剂为氢氧化钠溶液。
[0019]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述检测试剂为偶联有标记物的抗DNA-RNA杂合体的高特异性抗体。在一个优选方案中，标记物为荧光标记物、金标记物或酶标记物。在一个进一步优选的方案中，所述酶标记物为辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶。
[0020]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述底物试剂为碱性磷酸酶化学发光底物。
[0021]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述捕获板为包被有抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体的化学发光板。
[0022]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述阴性对照品为含有载体DNA的溶液。
[0023]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述阳性对照品为含有1pg/ml HPV16 DNA和载体DNA的溶液。
[0024]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述洗涤液为Tris-HCl缓冲盐溶液。
[0025]在第三方面，提供了一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒，其包括：分
别容纳变性试剂、16种HPV分型特异性探针的混合物、HPV16特异性探针、HPV18特异性探针、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液。
[0026]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述16种HPV分型包括HPV26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82。
[0027]进一步地，根据前述第一方面所述的试剂盒，所述变性试剂为氢氧化钠溶液。本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种用于检测多种人乳头状瘤病毒分型的试剂盒，其特征在于包括：分别容纳变性试剂、多种HPV分型特异性探针的混合物、检测试剂、底物试剂、阴性对照品和阳性对照品的试剂瓶、捕获板和洗涤液，其中所述多种HPV分型包括选自HPV16、18、26、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73和82中的一种或多种。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述变性试剂为氢氧化钠溶液，所述检测试剂为偶联有标记物的抗DNA-RNA杂合体的高特异性抗体，所述标记物为荧光标记物、金标记物或酶标记物，所述底物试剂为碱性磷酸酶化学发光底物，所述捕获板为包被有抗DNA-RNA杂合体的特异性抗体的化学发光板，所述阴性对照品为含有载体DNA的溶液，所述阳性对照品为含有HPV16 DNA和载体DNA的溶液，所述洗涤液为Tris-HCl缓冲盐水液。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标记物为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的保质期为15个月以上。5.一种操作根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒的方法，其特在于包括以下步骤：1）采集多个细胞样本；2）变性：将对照品及各细胞样本中加入变性试剂并混匀，然后在水浴中孵育；3）杂交：在独立准备的杂交板中加入探针试剂，将从步骤2）中获得的变性后的对照品和各样本转移至对应的所述杂交板中并在加热振荡的条件下进行杂交；4）捕获：将在步骤3）获得的杂交液体完全转移至对应的捕获板中并在40-45℃的条件下振荡40-80分钟；5）检测：移除捕获板中的液体并加入检测试剂，并在40-45℃的条件下振荡20-40分钟；6）化学发光：移除捕获板中的检测试剂，然后加入底物试剂，室温避光孵育5-20分钟，然后读取相对光量子数，计算阴性对照品和阳性对照品的变系数CV值。6.一种操作根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒的方法，包括如下步骤：步骤一，变性：将待检测样本的细胞破碎，使蛋白质变性、RNA降解，且使DNA变性分解为单链DNA，获得变性后的样...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡杰锋，姚尚华，李德强，许安庆，
申请(专利权)人：杭州百殷生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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