本发明专利技术公开了一种HLA‑A11限制性GPC3源性多肽及包含它的疫苗，属于生物制药技术领域。所述HLA‑A11限制性GPC3源性多肽，由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。本发明专利技术还公开了包含上述多肽的疫苗、一种上述多肽在制备GPC3阳性肿瘤或癌症的免疫诱导刺激剂中的应用、一种诱导肿瘤反应性T细胞的制剂、一种用于治疗和/或预防GPC3阳性肿瘤或癌症的药物组合物、一种抗体和一种抗原递呈细胞。本发明专利技术的多肽，能够诱导产生特异性免疫应答，可用于进行免疫预防和免疫治疗。
HLA-A11 restricted GPC3 derived peptide and vaccine containing it
The invention discloses a HLA A11 GPC3 restrictive polypeptide and a vaccine containing the same, which belongs to the field of biopharmaceutical technology. The HLA A11 restricted GPC3 derived polypeptide is composed of amino acid sequences of SEQ ID NO:1 or SEQ ID NO:2. The invention also discloses a vaccine containing the above polypeptide, an application of the aforementioned polypeptide in an immune inducer for preparing a GPC3 positive tumor or cancer, a preparation for inducing a tumor reactive T cell, a pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of a GPC3 positive tumor or cancer, an antibody and an antigen presentation. Cells. The polypeptide of the invention can induce specific immune response, and can be used for immune prevention and immunotherapy.
【技术实现步骤摘要】
一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽及包含它的疫苗
本专利技术涉及一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽及包含它的疫苗，属于生物制药
技术介绍
肝细胞癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，在我国发病率尤高，且呈逐年上升趋势。我国每年约有11万人死于肝癌，占全世界肝癌死亡人数的45％。绝大多数HCC源发于肝硬化，乙型肝炎是肝脏硬化结节形成的主要原因，结节恶性转化最终导致HCC。通常肝癌直到晚期才会出现明显症状，此时肿瘤已转移或者肝功能严重恶化，只有大约20％患者能够手术治疗。为此，包括免疫治疗在内的新方法,已逐渐成为晚期肝癌的辅助疗法。肝癌的临床诊断并不困难,但临床发现的大多数病例仍然属于中晚期,未能早期发现是肝癌治疗效果差的最主要的原因。针对恶性实体肿瘤的各种治疗手段包括外科治疗、肝动脉/门静脉化疗栓塞术、消融治疗及放射治疗等均有一定的效果,对小肝癌患者,通过外科切除,患者5年生存率仅到50％，复发率居高不下。免疫疗法因其靶向性好，副作用少而迅速发展；鉴定有效的分子靶点则是免疫治疗的关键。2006年中国乙型肝炎流行病学调查结果表明，中国1～59岁一般人群乙型肝炎病毒表面抗原(HBVsurfaceantigen，HBsAg)携带率为7.18％，5岁以下儿童的HBsAg携带率仅为0.96％。据此推算，目前，我国有乙型肝炎患者约9300万人，这些人都是潜在的肝癌患者。实际上，上述免疫疗法也可能用于预防这些感染者罹患肝癌。另一方面，随着近年来肿瘤免疫学和分子生物学的发展，效应性T细胞和辅助性T细胞识别肿瘤细胞源性抗原多肽，该多肽由肿瘤细胞高表达的特异性蛋白质分解而成，并经癌细胞或抗原呈递细胞表面的HLA分子递呈，T细胞识别该抗原多肽后，产生破坏癌细胞的免疫反应。目前，许多刺激产生攻击癌症性免疫反应的肿瘤抗原多肽和蛋白质已被确定，并开发了相关的抗原特异性肿瘤免疫治疗方法，应用于临床。HLAI类分子表达在所有有核细胞表面。细胞质蛋白和核蛋白降解产生的多肽与HLAI类分子结合，表达于细胞表面。通常在正常细胞的表面，来自正常自体蛋白的多肽结合HLAI类分子，免疫系统的T细胞既不识别也不对这些结合到HLAI类分子上的多肽产生免疫应答。另一方面，在正常细胞转化为癌症的过程中，这种癌症细胞可表达大量的蛋白质，而这些蛋白质在正常细胞几乎不表达或仅少量表达。如果这类蛋白在肿瘤细胞中高度特异表达，其降解产生的多肽与HLAI类分子结合并递呈在细胞表面，效应性T细胞识别此多肽，并特异性破坏癌细胞。这样，对个体施用此类肿瘤特异性抗原或多肽，将可能破坏癌细胞，抑制癌症的生长，而不影响正常细胞，这被称为肿瘤抗原特异性癌症免疫治疗。此外，HLAII类分子主要表达在抗原递呈细胞(APC)表面,HLAII类分子由抗原呈递细胞捕获的细胞外肿瘤特异性抗原，APC将其纳入细胞内分解产生多肽，与HLAII类分子结合并在细胞表面表达,辅助性T细胞识别与HLAII类分子结合的多肽后，活化并产生多种细胞因子，激活其他免疫细胞，从而诱导或增强抗肿瘤免疫反应。因此，如果能够开发一种靶向于高度特异性表达的肿瘤抗原的免疫治疗方法，就可以产生一种有效消除癌症的治疗方法，而不损害正常自体器官。预计这种免疫治疗可以成为一种适用于广大晚期癌症患者的治疗方法，因为对他们而言已经没有其它的治疗方法可以应用了。此外，如果一个癌症特异性的抗原多肽以疫苗形式，接种至具有癌症高危风险的个体，则可能预防癌症的发生。黑色素瘤是一种皮肤癌，通常被称为恶性黑色素瘤。皮肤癌有许多类型，其中黑色素瘤是恶性程度最高的，因此十分令人可怕。皮肤组织细胞中，有几种细胞可以产生黑色素，这些细胞被称为黑素细胞。如果这些黑素细胞变成癌细胞，则形成黑色素瘤。恶性黑色素瘤(黑色素瘤)是临床上较为常见的皮肤粘膜和色素膜恶性肿瘤，也是发病率增长最快的恶性肿瘤之一，年增长率为3％～5％。2010年全球黑色素瘤新发病例199627例，死亡例数为46372例。据统计，2008年发达地区黑色素瘤男性和女性发病率分别为9.5/10万和8.6/10万，死亡率分别为1.8/10万和1.1/10万；欠发达地区的男女发病率分别为0.7/10万和0.6/10万，死亡率均为0.3/10万。虽然黑色素瘤在中国发病率较低，但近年来成倍增长，每年新发病例约2万例。因此，黑色素瘤已经成为严重危及中国人民健康的疾病之一。磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3，也称为DGSX，GTR2-2，MXR7，OCI-5，SDYS，SGB，SGBS)是一种在HCC以及包括黑色素瘤在内的其他癌症中高度表达的膜蛋白。癌胚抗原GPC3，是一个由580个氨基酸组成的65kDa蛋白，属于糖基磷脂酰肌醇(GPI)-家族-锚定的硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HSPG),在肝癌组织中高表达(72-81％)，且与预后不良相关，而在胆管细胞癌和正常肝组织则无表达；表明GPC3是肝癌免疫治疗的理想靶抗原。在我国汉族人群中HLA-A位点共检测到14种基因型，最常见的基因型是A*02(基因型频率GF为33.0％)、A*11(GF为24.0％)、A*24(GF为15.5％)、A*33(GF为7.5％)，这四种基因的表达频率之和达到80％；其中HLA-A11基因位点在中国人群高居第二位，在北方人群中其表达率为17.9％,在南方则更高为31.7％；在南方的多民族聚居区，其表达率甚至高于HLA-A02位点，如湖南、云南和台湾,基因频率分别为34.4％,34.66％和33.2％。HLA-A11基因位点在我国人群中表达率高，然而，其相关的限制性抗原疫苗则鲜有报道，故此研究HLA-A11基因位点限制性抗原疫苗对于我国人群的个体化免疫治疗具有高度的必要性，其研究成果则具有重要而广泛的应用价值。而黑色素瘤常见于西方国家的高加索人群中，免疫治疗有效；而且，肝细胞癌近年来在西方国家迅速增多，可以推测，HLA-A11结合多肽将有广泛的应用市场。
技术实现思路
本专利技术的目的之一，是提供一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽。本专利技术的多肽，能够诱导产生特异性免疫应答，可用于进行免疫预防和免疫治疗。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽，由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列组成。获取或制造本专利技术的多肽的方法没有特别的限制。无论是化学合成的蛋白质还是通过原核表达载体如大肠杆菌表达系统，或真核表达系统如酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞重组蛋白产生，均可用。本专利技术所用的多肽是由上海强耀生物公司合成。本专利技术的多肽，可通过化学合成方法如Fmoc法合成(芴甲氧羰基法)或tBoc方法(叔丁氧羰基法)合成。此外，本专利技术的多肽，也可以由各种类型的市售多肽合成公司合成。如果本专利技术的多肽由重组蛋白形成，将编码具有上述多肽的DNA核苷酸序列，引入一个合适的表达载体：原核细胞如大肠杆菌、真核细胞如酵母、昆虫细胞以及CHO细胞等，可产生本专利技术的多肽。本专利技术的目的之二，是提供一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽疫苗。本专利技术的疫苗，可以用于特定基因型人群的精准治疗，即用于免疫治疗HLA-A11阳性基因型人群中高表达GPC3的癌症患者，例如肝细胞肝癌或恶性黑色素瘤。本专利技术解决上述技术问题本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种HLA‑A11限制性GPC3源性多肽，其特征在于，由SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。
【技术特征摘要】
2017.09.05 CN 20171079127171.一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽，其特征在于，由SEQIDNO:1或SEQIDNO:2的氨基酸序列组成。2.一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽疫苗，其特征在于，包括权利要求1所述的多肽。3.根据权利要求2所述的一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽疫苗，其特征在于，所述疫苗包含佐剂。4.根据权利要求3所述的一种HLA-A11限制性GPC3源性多肽疫苗，其特征在于，所述佐剂为不完全弗氏佐剂、卡介苗、海藻糖二霉菌酸酯、脂多...
【专利技术属性】
技术研发人员：王延军，孙斌，陈德喜，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京佑安医院，
类型：发明
国别省市：北京,11
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