一种结合α亚基的F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂及应用制造技术

本发明专利技术涉及一种抗F1F0‑ATP合成酶活性药物。目的是提供一种结合α亚基的F1F0‑ATP合成酶RNA抑制剂，该抑制剂通过结合F1F0‑ATP合成酶α亚基，使α亚基从线粒体膜释放入胞浆，导致F1F0‑ATP合成酶解聚，从而降低ATP合成酶活性，抑制细胞内ATP合成，具有抑制效率高、合成方便、成本低等特点。技术方案是：同轴线缆疲劳检测设备，其特征在于：一种F1F0‑ATP合成酶RNA抑制剂(命名为dsRNA‑184‑U)，其特征在于该抑制剂的序列如下：5’‑UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU‑3’。

【技术实现步骤摘要】
一种结合α亚基的F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂及应用
本专利技术涉及一种抗F1F0-ATP合成酶活性药物，具体是通过结合F1F0-ATP合成酶α亚基从而抑制ATP合成酶活性的RNA抑制剂。
技术介绍
F1F0-ATP合成酶是一个含多亚基的跨膜蛋白复合物。F1位于细胞质中，包含3α、3β、ε、γ和δ亚基。F1F0-ATP合成酶能合成及水解ATP(三磷酸腺苷)，调节生物体能量供给。ATP的异常表达是多种疾病发生的基础，如ATP的异常表达与眼底血管异常增生、心肌缺血、肿瘤的恶性程度、侵袭性和不良预后密切相关；肿瘤细胞的转移及增生需要更多的ATP，因此，通过抑制细胞内ATP水平可以选择性杀死肿瘤细胞及抑制肿瘤血管的生成。F1F0-ATP合成酶是线粒体中合成ATP的关键酶，抑制该合成酶能够抑制ATP的过量异常表达。心肌细胞中，F1F0-ATP合成酶对ATP的过量消耗导致严重心肌缺血的发生，降低F1F0-ATP合成酶活性能调节心肌缺血的发生。F1F0-ATP合成酶抑制剂可用于肿瘤的治疗。研究发现，药物耐受性肿瘤细胞在ATP耗尽的情况下化疗敏感性升高，而药物敏感性肿瘤细胞在外源ATP补给的情况下化疗耐药性升高。因此破坏肿瘤细胞的ATP代谢对于肿瘤治疗具有非常重要的作用。肿瘤分子靶向治疗将比目前的化疗更为有效、副作用更小，是非常有希望的一种肿瘤治疗方法。如表皮生长因子受体酪氨酸激酶(EGFR－TK)抑制剂吉非替尼主要治疗肺癌，利妥昔单抗主要用于治疗非霍奇金淋巴瘤，曲妥珠单抗是信号转导抑制剂，用于治疗乳腺癌。治疗慢性粒细胞性白血病和胃肠道基质细胞瘤的是甲磺酸伊马替尼。但是随着靶向治疗的临床应用，越来越多的患者也出现了耐药，靶向治疗药物的临床效果并不令人满意。因此放化疗以及靶向治疗的患者，如果联合应用ATP抑制剂，能够产生最有效治疗效果，如GLUT-1(葡萄糖转运蛋白1)抑制剂，包括不可逆抑制剂WZB117和Phloretin根皮素、diclofenac(双氯芬酸)、apigegnin、fasentin、STF-31、以及临床获批药物ritonavir(利托那韦)。WZB117和Phloretin是GLUT1的不可逆性抑制剂，可以显著降低葡萄糖的摄入量和细胞内的ATP水平，从而抑制糖酵解和细胞生长。补给外源性ATP可以缓解肿瘤细胞的WZB117诱导性细胞毒性，这表明WZB117等GLUT抑制剂通过降低细胞内ATP水平抑制肿瘤细胞生长。F1F0-ATP合成酶抑制剂还可用于结核、自身免疫缺陷、心肌缺血等多种疾病，而且在农药中也有所应用。如抗结核类ATP合酶抑制剂二芳基喹啉类抗结合药物TMC207，该化合物作用与ATP合酶C亚基，能快速有效地杀死结核杆菌；抗自身免疫性疾病ATP合成酶抑制剂Bz-423，用于治疗I型红斑狼疮免疫性疾病；抗肿瘤合成酶抑制剂，如多烯α-吡喃酮类；还有一种ATP抑制剂以抑制GLUT1为主，不同细胞具有多种GLUT异构体，行使相同或不同功能，比如单糖运输、己糖运输、双向运输等；且每种细胞上分布着多种类型的GLUT，这就使得即使GLUT1的功能被抑制后，其他GLUT将代偿其功能。以GLUT3为例，它主要分布在神经元和胎盘组织，当脑瘤患者神经元上的GLUT1被抑制后，仍然可以依赖GLUT3摄取葡萄糖，因此癌细胞还能继续生长。同时，GLUT1还容易被诱导，即葡萄糖水平低，它就高表达，葡萄糖水平高，它就低表达，这就使得GLUT1抑制剂的活性很难抑制或易诱发耐(抗)药性。GLUT1抑制剂长期应用，使脑组织长期缺乏能量供给，脑发育出现障碍。以上这些ATP合成酶抑制剂均为化学合成物，具有细胞毒性大及特异性不高等缺点。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服上述
技术介绍
的不足，提供一种结合α亚基的F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂，该抑制剂通过结合F1F0-ATP合成酶α亚基，使α亚基从线粒体膜释放入胞浆，导致F1F0-ATP合成酶解聚，从而降低ATP合成酶活性，抑制细胞内ATP合成，具有抑制效率高、合成方便、成本低等特点。本专利技术提供的技术方案是：一种F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂(命名为dsRNA-184-U)，其特征在于该抑制剂的序列如下：5’-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3’。该抑制剂的互补序列为：5’-ACCCUUAUCAGUUCUCCAUCCA-3’。制备方法如下：1)合成单链：通过ABI394RNA自动合成仪，获得F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂序列如下：5’-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3’，以及互补序列5’-ACCCUUAUCAGUUCUCCAUCCA-3’，并分别进行纯化分离；2)合成双链：在每个相同摩尔数的单链RNA样品中加入相同量的DEPC水，然后1比1比例加入退火缓冲液中，90℃变性1分钟后，自然降温至室温，得到的产物即为所需双链RNA。所述步骤1)合成单链包括：a、脱保护基；b、活化；c、亲核反应；d、除去保护基团；e、纯化分离；f、离心干燥、冻存。所述的F1F0-ATP合成酶RNA抑制剂，应用于ATP异常高表达的疾病，如血管增生性疾病及肿瘤治疗。本专利技术的有益效果是：本专利技术合成的小片段RNA序列(命名为dsRNA-184-U)，能结合细胞内F1F0-ATP合成酶α亚基(ATP5A)，使F1F0-ATP合成酶的α亚基从胞膜释放到胞浆，导致F1F0-ATP合成酶解聚，从而抑制细胞内ATP合成，具有专一性强，抑制效率高的特点；可用于治疗多种疾病，如眼底血管增生、结核、自身免疫缺陷、肿瘤、心肌缺血等多种疾病，而且在农药中也可以应用；并且该RNA序列片段小，只有22个核苷酸序列，制作工艺简单。由于RNA作为一种存在于生物细胞中的遗传信息载体，是细胞本来就具有的一种生物大分子，因此本专利技术合成的RNA作为药物具有副作用小，合成方便，成本低等特点。附图说明图1是RNA双链的2.0％PAGE胶跑电泳图。图2是dsRNA-184-U处理组，线粒体膜中F1F0-ATP合成酶的α亚基向胞浆释放的示意图，lip处理组为转染试剂对照组。图3是dsRNA-184-U处理组与lip处理组细胞中F1F0-ATP合成酶含量对比图。具体实施方式以下结合附图所示的实施例进一步说明。一种F1F0-ATP合成酶α亚基的RNA抑制剂，该抑制剂的序列为：5‘-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3‘；互补序列为：5’-ACCCUUAUCAGUUCUCCAUCCA-3’。该抑制剂的制备方法如下：4、合成单链：应用ABI394RNA自动合成仪合成RNA序列，固相合成单链RNA：首先将要合成的RNA序列5’-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3’输入合成仪，RNA化学合成时由3’端向5’进行。按以下步骤合成：1)脱保护基；用三氯乙酸脱去预先连接在CPG上的核苷酸的保护基团DMT(二甲氧基三苯甲基)，获得游离的5’-羟基端；2)活化；将质子化的核苷3’-亚磷酰胺单体与四氮唑活化剂混合进入合成柱，形成亚磷酸酰胺四唑活性中间体(其5’端仍受DMT保护，3’端被活化)；3)将步骤2)中活化得到的亚磷酸酰胺四唑活性中间体与步骤1)中脱保护基后的核苷酸混合，使亚磷酸酰胺四唑活性中间体与核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种F1F0‑ATP合成酶α亚基的RNA抑制剂，其特征在于该抑制剂的序列如下：5’‑UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种F1F0-ATP合成酶α亚基的RNA抑制剂，其特征在于该抑制剂的序列如下：5’-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3’。2.根据权利要求1所述的F1F0-ATP合成酶α亚基的RNA抑制剂，其特征在于：该抑制剂的互补序列为：5’-ACCCUUAUCAGUUCUCCAUCCA-3’。3.一种F1F0-ATP合成酶α亚基的RNA抑制剂的制备方法，按如下步骤进行：1)合成单链：通过ABI394RNA自动合成仪，获得RNA抑制剂序列5’-UGGAUGGAGAACUGAUAAGGGU-3’，以及互补序列5’-ACCCUUAUCAGUUCUCCAUCCA-3’，并分别...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗月球，姚克，刘思雨，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33