与水稻红褐色颖壳性状有关的sgRNA、CRISPR/Cas9载体、载体构建、应用制造技术

本发明专利技术公开与水稻红褐色颖壳性状有关的sgRNA、CRISPRCas9载体、载体构建、应用，克服需要在OsCHI两个等位基因都突变才得到褐壳水稻的缺陷。本发明专利技术：提供sgRNA片段，包含特异性靶向水稻肉桂醇脱氢酶CAD基因第五个外显子的gRNA。该sgRNA具体是T1、T2、T3。提供包含上述sgRNA片段的CRISPR/Cas9基因编辑载体及其构建方法，该载体可编辑水稻肉桂醇脱氢酶CAD基因。提供这些片段与载体在获得具有红褐色颖壳和茎结性状水稻材料中的应用。提供用于检测CRISPR/Cas9‑CAD基因重组的引物序列。本发明专利技术可降低传统育种成本，提高杂交水稻制种机械化水平，缩短育种周期。

SgRNA, CRISPR/Cas9 vector, vector construction and application related to brown and brown characters of rice

The invention discloses the construction and application of sgRNA, CRISPRCas9 carrier and carrier related to the red brown glume character of rice, so as to overcome the defect that the two alleles of OsCHI need to be mutated to get the brown shell rice. The invention provides a sgRNA fragment comprising a specific gRNA targeting the fifth exons of the rice cinnamyl alcohol dehydrogenase CAD gene. The sgRNA is specifically T1, T2, and T3. A CRISPR/Cas9 gene editing vector containing the above sgRNA fragments and a construction method thereof are provided, which can edit the rice cinnamyl alcohol dehydrogenase CAD gene. The application of these fragments and vectors in obtaining rice materials with red brown shell and stem knot characteristics is provided. A primer sequence for detecting CRISPR/Cas9 CAD gene recombination is provided. The invention can reduce the cost of traditional breeding, improve the mechanization level of hybrid rice seed production, and shorten the breeding cycle.

【技术实现步骤摘要】
与水稻红褐色颖壳性状有关的sgRNA、CRISPR/Cas9载体、载体构建、应用
本专利技术涉及与红褐色颖壳性状水稻有关的一种sgRNA片段、CRISPR/Cas9编辑载体、载体构建方法，及应用。属于基因工程领域。
技术介绍
利用自然突变和人工突变，水稻种质资源中能够获得少量不同颖壳颜色的育种材料。借助颖壳的不同颜色可以在水稻机械化制种中将不育系上结的杂种与一同用收割机收获的恢复系种子准确地分开，因而不同颖壳颜色在杂交水稻制种中具有很高的技术价值。但是如果利用传统常规杂交、回交的方法将壳色性状转育到恢复系、保持系且不改变原有材料的特性，需要近十年的时间才能实现。授权公告号为CN104017821B的中国专利技术专利公开了一种定向编辑颖壳颜色决定基因OsCHI创制褐壳水稻材料的方法。该方法主要内容包括在颖壳颜色决定基因OsCHI外显子区选取靶标片段并构建植物CRISPR/Cas9打靶重组载体，将该重组载体导入水稻细胞并再生成苗，在载体中的表达框的作用下对水稻细胞进行剪切，触发水稻细胞DNA的自我修复功能。再通过对再生株系基因组目标片段的测序，获取携带两个等位OsCHI基因同时发生功能缺本文档来自技高网...

【技术保护点】
sgRNA片段，其特征在于：包含特异性靶向水稻肉桂醇脱氢酶CAD基因的第五个外显子的gRNA。

【技术特征摘要】
2017.08.16 CN 20171070273901.sgRNA片段，其特征在于：包含特异性靶向水稻肉桂醇脱氢酶CAD基因的第五个外显子的gRNA。2.根据权利要求1所述的sgRNA片段，其特征在于：包括命名为T1、碱基序列如SEQIDNO.1的sgRNA，命名为T2、碱基序列如SEQIDNO.2的sgRNA，命名为T3、碱基序列如SEQIDNO.3的sgRNA。3.包含权利要求2所述的sgRNA片段的CRISPR/Cas9基因编辑载体。4.根据权利要求3所述的CRISPR/Cas9基因编辑载体，其特征在于：包括由OsU6a启动子调控T1sgRNA片段表达的表达框OsU6a::T1、由OsU6b启动子调控T2sgRNA片段表达的表达框OsU6b::T2、由OsU6c启动子调控T3sgRNA片段表达的表达框OsU6c::T3、由玉米泛素Ubiqutin启动子调控Cas9表达的表达框。5.权利要求3或4所述的CRISPR/Cas9基因编辑载体的构建方法，其特征在于：将分别连接OsU6a、OsU6b、OsU6c启动子与Ploy-T终止子的T1、T2、T3通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒲志刚，向小利，王平，
申请(专利权)人：四川省农业科学院生物技术核技术研究所，
类型：发明
国别省市：四川,51