The invention belongs to the preparation of enzyme preparation, in particular to a preparation method of hexokinase freeze dried powder. The pure enzyme solution of hexokinase was prepared according to the method in CN106479992A, and sucrose, lactose and sorbitol were added to the pure enzyme solution of hexokinase as a freeze-drying agent. The protectant was fully dissolved and distributed evenly in the enzyme solution. The white hexokinase freeze-dried powder was prepared by freezing and drying in a vacuum freeze drying agent. The present invention solves the problem of high deactivation rate caused by direct freeze drying of hexose kinase, high survival rate of hexokinase freeze-dried powder enzyme, relatively stable property of liquid hexokinase enzyme, suitable for the use of kits in national standard and more favorable for preservation.
【技术实现步骤摘要】
一种己糖激酶冻干粉的制备方法
本专利技术属于酶制剂的制备，特别是指一种己糖激酶冻干粉的制备方法。
技术介绍
在糖尿病的诊断、疗效观察和一般的临床诊断中血清葡萄糖(GLU)检测的应用非常广泛。己糖激酶法因其干扰因素少，作用于α-D-葡萄糖能力很强，Km值很小，对底物亲和力很强，配成成品试剂盒测定时间短，尤其适用于全自动分析仪，特别适用于急诊检验使用，被认定是测定血清葡萄糖的参考方法。己糖激酶在生产和使用的过程中，需要长期保存，液体状态下4℃保存时间短，-20℃冻存会因反复冻融导致聚集、修饰、降解、污染等不良后果。己糖激酶冷冻干燥是将样品在低温下冷冻，然后在真空条件下，利用升华去除水分从而使样品处于干燥状态的单元操作。加入的冻干保护剂能够取代水与蛋白结合，使蛋白的结构免遭破坏，保证了己糖激酶的稳定性。己糖激酶冻干粉在生物医药领域具有非常广泛的应用前景，但目前国内己糖激酶的真空冷冻干燥技术尚不够完善，己糖激酶直接进行冷冻干燥，失活率达99％以上，因此选择合适的己糖激酶冻干保护剂至关重要。己糖激酶作为诊断试剂盒配制中的关键酶，其酶性质决定了试剂盒品质的好坏，特别是己糖激酶...
【技术保护点】
一种己糖激酶冻干粉的制备方法，其特征在于由如下工艺步骤组成：A、按照公开号为CN106479992A中的方法制备酶活为200‑300U/ml的己糖激酶纯酶液；B、在步骤A中制备的己糖激酶纯酶液中加入3％‑5％(m/v)蔗糖、1％‑2％(m/v)乳糖、6％‑8％(m/v)山梨醇作为冻干保护剂，置于4℃保存4‑5h，使保护剂充分溶解并在酶液中分布均匀；C、在预冻温度为‑20℃的条件下预冻12‑14h，预冻后置于真空冷冻干燥剂内冷冻干燥16‑20h，得到白色己糖激酶冻干粉，在‑20℃保存。
【技术特征摘要】
1.一种己糖激酶冻干粉的制备方法，其特征在于由如下工艺步骤组成：A、按照公开号为CN106479992A中的方法制备酶活为200-300U/ml的己糖激酶纯酶液；B、在步骤A中制备的己糖激酶纯酶液中加入3％-5％(m/v)蔗糖、1％-2％(m/v...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘春卯，曹倩荣，郑翔，秦艳梅，马清河，
申请(专利权)人：河北省微生物研究所，
类型：发明
国别省市：河北,13
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