一种利用低糖组培技术培育矾根的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用低糖组培技术培育矾根的方法，包括如下步骤：将经增殖培养获得的矾根的丛芽修剪成单株，接种到生根培养基上进行生根培养；所述生根培养基的包括：1/2MS基础培养基，0.1～0.3mg/L萘乙酸，1～2mg/L赤霉素，8～12g/L蔗糖，4～8g/L琼脂，0.1～0.3mg/L活性炭。本发明专利技术提供的方法通过组培技术培育矾根，不仅可保持优良植物品种的遗传稳定性，而且能有效提高其繁殖系数，为进一步开展品种改良奠定基础。

A method of cultivating alum root by using low sugar tissue culture technology

The present invention relates to a method for cultivating alum root with a low sugar tissue culture technique, including the following steps: pruning the bushes from the root of the proliferation culture into a single plant and inoculated on the rooting medium for rooting culture. The rooting medium includes the base medium of 1/2MS, 0.1 ~ 0.3mg/L naphtha acetic acid, and 1 to 2mg/L gibberellin. 8 to 12g/L sucrose, 4 to 8g/L agar and 0.1 to 0.3mg/L activated carbon. The method provided by the invention can not only maintain the genetic stability of the fine plant varieties, but also effectively improve the reproduction coefficient and lay the foundation for further improvement of the variety.

【技术实现步骤摘要】
一种利用低糖组培技术培育矾根的方法
本专利技术涉及植物组织培养领域，具体涉及一种利用低糖组培技术培育矾根的方法。
技术介绍
矾根(Heucheramicrantha)又名珊瑚铃，虎耳草科矾根属，多年生耐寒草本花卉，浅根性。叶基生，阔心型，长20-25cm，深紫色，在温暖地区常绿，花小，钟状，花径0.6-1.2cm，红色，两侧对称,花期4-10月。喜半荫，耐全光；园林中多用于林下花境、花坛、花带、地被、庭院绿化等。矾根是国外引入的多年生宿根花卉，自然生长在湿润多石的高山或悬崖旁。性耐寒，喜阳耐阴。在肥沃、排水良好，富含腐殖质的土壤上生长良好。喜中性偏酸、疏松肥沃的壤土，适宜生长在湿润但排水良好、半遮阴的土壤中，忌强光直射。幼苗长势较慢，成苗后生长旺盛，是少有的彩叶阴生地被植物，耐-34℃低温。植物无糖组织培养技术经过近20年的发展，基础理论的建立和研究已经成熟，但商业化的应用还处于起步阶段。与有糖培养相比，无糖组织培养技术显示出其特有的优势,无糖组织培养技术能显著改善根的质量，提高生根率，消除了小植株生理和形态方面的紊乱，种苗质量显著提高，且大小比较均匀，便于工厂化生产。同时，无糖试验能在一定程度上节约成本，还能大幅度降低污染率，是组培工厂化育苗的发展趋势。随着材料科学、物理农业的发展，以及植物无糖组织培养技术理论体系的成熟，这一技术将以低成本生产高质量种苗的优势，应用于植物种苗工厂化生产。
技术实现思路
本专利技术克服现有技术的缺陷，提供一种利用低糖组培技术培育矾根的方法。具体而言，本专利技术提供的利用低糖组培技术培育矾根的方法，包括如下步骤：将经增殖培养获得的矾根的丛芽修剪成单株，接种到生根培养基上进行生根培养。其中，所述生根培养基的包括：1/2MS基础培养基，0.1～0.3mg/L萘乙酸(简称NAA)，1～2mg/L赤霉素(简称GA3)，8～12g/L蔗糖，4～8g/L琼脂，0.1～0.3mg/L活性炭；优选地，所述生根培养基灭菌前的pH值为5.8～6.2。本专利技术所述1/2MS基础培养基是指将常规MS基础培养中大量元素量减半使用的培养基。本专利技术通过大量实践发现，当对生根培养基的组成以及各组分的用量进行优化控制，尤其是将蔗糖的用量控制在8～12g/L的范围内，可以确保矾根组培苗的生根率达到98％以上，在实际培养时，10天左右即可开始生根，每株平均根数在3-5根，根长在3cm左右；将所述组培苗移栽到室外后，成活率可到85％以上。本专利技术所述生根培养的条件包括：温度23～27℃，光照强度2450～2550Lx，光照时间10～14h/d。上述方法中作为原料的矾根的丛芽可以采用本领域常规的组培方法培育而成。作为本专利技术的一种优选方案，所述矾根的丛芽由包括如下步骤的方法培育而成：(1)取矾根幼嫩的叶片，灭菌清洗后，接种到初代培养培养基上进行初代培养；(2)将所述初代培养分化出的丛生芽切取下来，接种到增殖培养基上进行增殖培养，得到长到3～5cm且增殖系数在8以上的丛芽。本专利技术步骤(1)所述的灭菌清洗可采用本领域的常规操作。作为本专利技术的一种优选方案，可以为：在无菌的操作台上，先用75％的酒精处理8～12s，用无菌水清洗多次后，再用0.1％的氯化汞处理2-4min(具体处理时间可依据材料的老嫩程度确定)，无菌水清洗多次，晾干。优选地，所述矾根幼嫩的叶片可先用少量洗涤剂溶液浸泡，用毛刷轻轻刷洗干净后放在流水下冲洗过夜，再在无菌操作台上进行处理。本专利技术采用的初代培养基以及增殖培养基均可以采用本领域常规的培养基。为了提高矾根丛芽的性能，尤其是实现长3～5cm且增殖系数在8以上，从而确保生根培养过程的顺利进行，本专利技术进一步对所述初代培养基和增殖培养基的组成进行优选。其中：所述初代培养基优选包括：MS基础培养基，0.1～0.3mg/L萘乙酸(简称NAA)，28～32g/L蔗糖，4～8g/L琼脂；优选地，该培养基灭菌前的pH值为5.8～6.2。所述增殖培养基优选包括：MS基础培养基，0.4～0.8mg/L苯基噻二唑基脲(简称TDZ)，萘乙酸(简称NAA)，28～32g/L蔗糖，4～8g/L琼脂；优选地，所述增殖培养基灭菌前的pH值为5.8～6.2。采用上述培养基进行培养，15天左右生长点开始萌发新芽，28天左右芽基本长到3～5cm，芽比较粗壮且增殖系数在8以上。本专利技术所述初代培养、增殖培养的条件可以与生根培养不同，也可以相同。作为本专利技术的一种优选方案，所述初代培养、增殖培养的条件均为：温度23～27℃，光照强度2450～2550Lx，光照时间10～14h/d。经本专利技术所述生根培养后，可以获得健康、茁壮的矾根组培苗。在此基础上，本专利技术所述方法还可以包括：将经所述生根培养获得的矾根组培苗移栽到室外，进行室外培养。所述移栽优选为：先将所述矾根组培苗在室外放置进行炼苗，洗掉培养基后移栽于由珍珠岩和腐殖土组成的基质中。为了进一步满足矾根组培苗的生存条件，本专利技术优选，所述基质是由由珍珠岩和腐殖土以质量比4：5～7混合而成。所述进行室外培养可以在湿度65～75％、温度为22～26℃的条件下进行。本专利技术提供的方法采用特定、优选的培养基，通过组培技术培育矾根，不仅可保持优良植物品种的遗传稳定性，而且能有效提高其繁殖系数，为进一步开展品种改良奠定基础。附图说明图1为矾根生根培养阶段接种3周时的照片；图2为矾根炼苗移栽阶段炼苗4周后的穴盘苗照片。具体实施方式以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1本实施例提供了一种培育矾根的方法，具体为：(1)切取矾根幼嫩的叶片，先用少量洗涤剂溶液浸泡20min，用毛刷轻轻刷洗叶片，刷洗干净后放在流水下冲洗过夜；在无菌的操作台上，先用75％酒精处理10s，用无菌水清洗3次，再用0.1％的升汞处理3min，无菌水清洗6次，晾干；将其接种到初代培养基上，放在温度为25±2℃、光照2500Lx、光照时间12h/d的条件下进行初代培养；所述初代培养基的组成为：MS基础培养基，0.2mg/LNAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂；所述培养基在灭菌前调节pH值至6.0；(2)将所述初代培养分化出的丛生芽在无菌操作台上切取下来，接种到增殖培养基上，在温度为25±2℃、光照2500Lx、光照时间12h/d的条件下进行增殖培养，15天左右生长点开始萌发新芽，28天左右芽基本长到3-5cm，芽比较粗壮且增殖系数在8以上；所述增殖培养基的组成为：MS基础培养基，0.6mg/LTDZ，0.2mg/LNAA，30g/L蔗糖，6g/L琼脂；所述培养基在灭菌前调节pH值至6.0；(3)将经步骤(2)所述增殖培养获得的2cm以上的丛芽修剪成单株，接种到生根培养基上，在温度为25±2℃、光照2500Lx、光照时间12h/d的条件下进行生根培养，10天左右开始生根，每株平均根数在3-5根，根长在3cm左右(接种3周时组培苗的照片如图1所示)；所述生根培养基的组成为：1/2MS基础培养基，0.2mg/LNAA，1.5mg/LGA3，10g/L蔗糖，6g/L琼脂，0.2mg/L活性炭；所述培养基在灭菌前调节pH值至6.0。对比例1与实施例1相比，区别仅在于：所述生根培养基中不含有蔗糖。对比例2与实施例1相比，区别仅在于：所述生根培养基中蔗糖的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用低糖组培技术培育矾根的方法，其特征在于，包括如下步骤：将经增殖培养获得的矾根的丛芽修剪成单株，接种到生根培养基上进行生根培养；所述生根培养基的包括：1/2MS基础培养基，0.1～0.3mg/L萘乙酸，1～2mg/L赤霉素，8～12g/L蔗糖，4～8g/L琼脂，0.1～0.3mg/L活性炭。

【技术特征摘要】
1.一种利用低糖组培技术培育矾根的方法，其特征在于，包括如下步骤：将经增殖培养获得的矾根的丛芽修剪成单株，接种到生根培养基上进行生根培养；所述生根培养基的包括：1/2MS基础培养基，0.1～0.3mg/L萘乙酸，1～2mg/L赤霉素，8～12g/L蔗糖，4～8g/L琼脂，0.1～0.3mg/L活性炭。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养基灭菌前的pH值为5.8～6.2。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述生根培养的条件包括：温度23～27℃，光照强度2450～2550Lx，光照时间10～14h/d。4.根据权利要求1～3任意一项所述的方法，其特征在于，所述矾根的丛芽由包括如下步骤的方法培育而成：(1)取矾根幼嫩的叶片，灭菌清洗后，接种到初代培养培养基上进行初代培养；(2)将所述初代培养分化出的丛生芽切取下来，接种到增殖培养基上进行增殖培养，得到长到3～5cm且增殖系数在8以上的丛芽。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的灭菌清洗具体为：在无菌的操作台上，先用75％的酒精处理8～12s，用无菌水清洗多次后，再用0.1％的氯化汞处理2-4min，无菌水清洗多次，晾干；优选地，所述矾根幼嫩的叶片先用少量洗涤剂溶液浸泡，用毛刷轻轻刷洗干净...

【专利技术属性】
技术研发人员：王小辉，马建华，沈香兰，程帅，朱晓菲，赵玲，曹亚琼，高尚，
申请(专利权)人：四川七彩林业开发有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51