含低糖‑甘氨酸的稳定因子VIII制剂制造技术

本发明专利技术提供新颖的无白蛋白因子VIII制剂，其具有高量的盐和低浓度的糖及甘氨酸。作为主要的晶体成分，高盐提供稳定性和优良的糕体结构。低量的糖和甘氨酸与一些无定形非结晶盐共同提供复合的无定形基质以稳定因子VIII。该制剂特别适于为了稳定而需要高离子强度环境的B结构域缺失的因子VIII。将低量的甘氨酸添加至蔗糖防止盐结晶。这样的结果是无定形基质包含甘氨酸、蔗糖以及盐。该无定形基质提供稳定的环境，其中因子VIII由以下三种稳定剂保护：氨基酸(甘氨酸)，糖(蔗糖或海藻糖)，以及盐(NaCl)。这样的无定形基质能够在经过冻干以及作为冻干物的储存过程中稳定因子VIII。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用该申请基于2014年4月1日提交的61/973,281，并要求其优先权。
该申请总体上涉及药学制剂，特别是涉及稳定化的因子VIII(FVIII)的冻干制剂，其在高离子强度基质中含有低量的作为蛋白稳定剂的糖和甘氨酸，但是不含白蛋白(无白蛋白)。
技术介绍
在市场上有很多无白蛋白的重组FVIII(rFVIII)制剂，其使用稳定和配制基质的赋形剂，例如氯化钠、甘氨酸、甘露醇、蔗糖、海藻糖、组氨酸、以及氯化钙。因子VIII的无白蛋白制剂被认为在大量结晶的赋形剂存在下需要用于蛋白的无定形基质以提供精致的糕体结构(cakestructure)。因此，已以高盐制剂、高甘氨酸、以及高甘露醇制剂配制因子VIII，其中在冻干的冷冻阶段中通过使冷冻的基质退火至结晶赋形剂的共晶结晶温度而对这些赋形剂刻意进行结晶。将少量的稳定剂，优选蔗糖或海藻糖添加至制剂以保护和稳定在冻干物的无定形基质中的因子VIII。
技术实现思路
在高盐、低蔗糖和低甘氨酸基质中的因子VIII的无白蛋白制剂为冻干制剂，所述冻干制剂为药学上可接受的适于治疗血友病的药物产品。将少量甘氨酸添加至制剂预料不到地引起良好的糕体结构、经过冻干FVIII活性的高回收率、以及与在高盐基质中仅含有蔗糖的制剂相似的稳定性曲线。少量甘氨酸(3至6mg/ml，40至80mM)的添加也预料不到地将冷冻的基质的初始玻璃化转变温度从-45℃增加至-38℃，从而使得制剂更易于冻干。因为因子VIII喜欢含高NaCl的环境，所以蔗糖/甘氨酸的冷冻基质似乎也比单独的蔗糖基质具有更高的NaCl含量。该预料不到的观察结果还可支持对于冻干的因子VIII制剂来说增强的稳定性。本专利技术提供稳定、无白蛋白的冻干FVIII制剂，当在水中进行重构时，其包含：至多约300至320mM的NaCl；至多约50mM的缓冲剂，优选组氨酸，其能够提供约6.5至约7.5的pH；至多约1至5mM的CaCl2；至多约10至25mM的二糖，优选蔗糖或海藻糖；至多约20至80mM的甘氨酸；以及至多每毫升约50至2000IU的因子VIII。此外，组合物还可包含非离子表面活性剂，优选Tween-20(聚山梨醇酯20)或Tween-80(聚山梨醇酯80)，其量为在临界胶束浓度以上，优选在50至150ppm之间的浓度。优选的FVIII为B-结构域缺失的rFVIII，其具有随显色测定所确定的每毫克在8000和15000IU之间的比活性(specificactivity)。优选的稳定、无白蛋白的冻干重组FVIII制剂，当在水中进行重构时，其包含：至多约308mM的NaCl；至多约50mM的组氨酸，其能够提供6.5至7.5的pH；至多约1至5mM的CaCl2；至多约10至25mM的蔗糖或海藻糖；至多约40至80mM的甘氨酸；以及至多约50至3000IU的B结构域缺失的重组因子VIII。附图说明图1示出用差示扫描量热法(DSC)所获得的FVIII制剂的升温热谱图，所述FVIII制剂包含18mg/mlNaCl和6mg/ml蔗糖，并且不含甘氨酸。Y轴是热流量(mW)；以及x轴是以摄氏度计的温度。两个主要的热事件标示为“A”和“B”。初始玻璃化转变(Tg′)标示为“A”，其具有Tg′为-45.5℃的中点。事件“B”示出在冷冻的基质中结晶的NaCl在-21.8℃下共晶熔化。NaCl熔化的热焓为12焦耳每克(J/g)。图2示出用差示扫描量热法(DSC)所获得的FVIII制剂的升温热谱图，所述FVIII制剂包含18mg/mlNaCl和6mg/ml蔗糖以及6mg/ml甘氨酸。Y轴是热流量(mW)；以及x轴是以摄氏度计的温度。两个主要的热事件标示为“A”和“B”。初始玻璃化转变(Tg′)标示为“A”，其具有Tg′为-38.3℃的中点。事件“B”示出在冷冻的基质中结晶的NaCl在-23.4℃下共晶熔化。NaCl熔化的热焓为6.4J/g。图3是关于经过冻干因子VIII活性的回收率的响应曲面图。响应曲面的曲线示出低量的蔗糖和甘氨酸在FVIII的高盐制剂中的相互作用，所述相互作用引起经过冷冻-干燥的高回收率，如由圆圈所示。以mM计的糖(蔗糖)浓度在x轴上；以mM计的甘氨酸浓度在y轴上；垂直的z轴为关于初始因子VIII活性量(IU/ml)的回收率的量。响应曲面表示包含208mMNaCl而不含甘露醇的所有制剂。阴影区域表示具有经过冷冻的高回收率的设计空间。图4是关于随着冻干的糕体外观的响应曲面图。以mM计的糖(蔗糖)浓度在x轴上；以mM计的甘氨酸浓度在y轴上。垂直的z轴为糕体结构的定性外观，其中5是优良的糕体外观，而1是不好/坍塌的糕体外观。响应曲面表示包含248mMNaCl而不含甘露醇的所有制剂。复合响应曲面示出低量的蔗糖和甘氨酸在FVIII的高盐制剂中的相互作用，所述相互作用引起经过冷冻-干燥的良好糕体结构，如由阴影圈所示。图5是示出低量的蔗糖和甘氨酸在FVIII的高盐制剂中的相互作用的轮廓曲面图，所述相互作用引起FVIII活性大于初始活性的90％的优良稳定性，如由阴影圈所示。响应曲面表示包含228mMNaCl而不含甘露醇的所有制剂。以mM计的甘氨酸浓度在x轴上；以mM计的糖(蔗糖)浓度在y轴上。轮廓线表示因子VIII活性(IU/ml)相对于初始值(在时间＝零时)的比值的量。例如，0.90轮廓线表示在40℃下储存8周之后初始效能的90％。在粗线内的区域表示所测试的制剂的实际设计空间，而外面的区域表示从实验设计尝试的统计学分析所预测的值。图6示出FVIII的制剂在25℃下储存12周的稳定性，所述FVIII的制剂包含308mMNaCl和低量的蔗糖(6mg/ml)(用实心菱形的线)以及和低量的蔗糖(6mg/ml)及甘氨酸(3mg/ml)(用实心方块的虚线)。在x轴上以周计示出在25℃下的储存时间；在y轴上示出初始FVIII活性的百分数。图7示出FVIII的制剂在40℃下储存12周的稳定性，所述FVIII的制剂包含308mMNaCl和低量的蔗糖(6mg/ml)(用实心菱形的线)以及和低量的蔗糖(6mg/ml)及甘氨酸(3mg/ml)(用实心方块的虚线)。在x轴上以周计示出在40℃下的储存时间；在y轴上示出初始FVIII活性的百分数。图8示出当为在5℃下的储存进行测试时，以两种不同剂量形式的冻干B结构域缺失的重组FVIII(BDDrFVIII)制剂中蔗糖配制和蔗糖/甘氨酸配制的稳定性。图A(顶部)示出2000IU剂量形式；图B示出250IU剂量形式。有点的条是包含308mMNaCl和低量的蔗糖(6mg/ml)的FVIII的制剂，而含水平线的条是包含308mMNaCl和低量的蔗糖(6mg/ml)及甘氨酸(3mg/ml)的FVIII的制剂。X轴示出在5℃下以周计的储存时间；y轴示出效能(初始的百分数)。误差棒是来自一式三份小瓶的标准差。图9示出当为在25℃下的储存进行测试时，以两种不同剂量形式的冻干B结构域缺失的rFVIII制剂中蔗糖配制和蔗糖/甘氨酸配制的稳定性。图A(顶部)示出2000IU剂量形式；图B示出250IU剂量形式。有点的条是包含308mMNaCl和低量的蔗糖(6mg/ml)的FVIII的制剂，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种稳定的无白蛋白冻干因子VIII制剂，其在水中重构时包含，至多约250至320mM的NaCl，至多约50mM的缓冲剂，其能够提供6.5至7.5的pH，至多约1至5mM的CaCl2，至多约10至25mM的二糖，至多约20至80mM的甘氨酸，至多每毫升约50至3000IU的因子VIII。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.04.01 US 61/973,2811.一种稳定的无白蛋白冻干因子VIII制剂，其在水中重构时包含，至多约250至320mM的NaCl，至多约50mM的缓冲剂，其能够提供6.5至7.5的pH，至多约1至5mM的CaCl2，至多约10至25mM的二糖，至多约20至80mM的甘氨酸，至多每毫升约50至3000IU的因子VIII。2.根据权利要求1所述的组合物，其中缓冲剂为组氨酸。3.根据权利要求2所述的组合物，其还包含在临界胶束浓度以上的量的非离子表面活性剂。4.根据权利要求3所述的组合物，其中非离子表面活性剂选自聚山梨醇酯80和聚山梨醇酯20。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：N·拉吉夫，
申请(专利权)人：爱德技术生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：巴西;BR