适用于治疗血友病的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及适用于治疗血友病的药物组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】适用于治疗血友病的药物组合物 技术背景 本专利技术涉及血友病的治疗和/或预防。 背景 经静脉内给予凝血因子的蛋白质替代疗法目前用于治疗血友病患者。对于患者的方便 性和依从性而言，血管外（例如，皮下（s.c.)或皮内）给药优于现有的静脉内（i.V.)注射。 血管外给予还具有潜在的安全性优势，因为许多患者能够避免静脉内端口手术以及这类导 管插入相关的感染和凝血风险。 在FVIII缺乏的小鼠中经皮下给予FVIII，公开于Shi等人，Haemophilia, 2012， DOI:10. 1111/j. 1365-2516. 2011. 02735.X。FVIII的生物利用度在此文中据报告为低（大 约 1%)。 经皮下给予FVIII和VWF另外公开于W008151817,但未公开FVIII剂量和所达到 的循环FVIII浓度间的剂量反应关系。在W0815817中，VWF与FVIII的（单位）比率大于 5:1，相当于VWF蛋白浓度比FVIII浓度有150-250倍摩尔过量。然而，从实践和经济上的 观点看，这种类型的比例并不理想。在W008151817中，进一步证明了当将FVIII与VWF共 同配制时，经皮下给予FVIII的小鼠的免疫原性明显降低。 在W010062768中，公开了FVIII的聚乙二醇化可以改进经皮下注射给小鼠的 FVIII的生物利用度，而与VWF共同配制却没有改进FVIII的生物利用度。 本领域需要这样的化合物和/或药物组合物：其适用于经血管外给予，以在有或 无抑制剂时治疗和/或预防患有凝血疾病例如A型血友病的患者，和/或治疗和/或预防 患有冯维勒布兰德氏病的患者，因为这样的给予形式将会减轻经静脉内治疗的负担，这两 者的静脉内治疗都同样涉及到输注并且也涉及到因植入便携式导管所致的感染风险。这样 的化合物和组合物优选是安全的（即具有低的免疫原性风险）和/或具有高生物利用度和 /或优选是在生产和配制过程中容易处理的。 概述 本专利技术涉及包含FVIII分子的药物组合物在治疗血友病中的用途，其中所述FVIII分 子包含长度为100-700个氨基酸的截短的B结构域，其中所述截短的B结构域的氨基酸序 列源自wtFVIIIB结构域氨基酸序列，和其中所述FVIII分子经血管外给予的生物利用度 为至少20%。 描述 本专利技术人惊奇地发现了以下观察结果：与例如具有整个B结构域完整的FVIII以及没 有或仅有少数氨基酸（例如，15-30个氨基酸）的B结构域截短/缺失的FVIII分子相比， 本专利技术的FVIII分子在经皮下给予时具有令人惊奇的高FVIII生物利用度。 本专利技术的专利技术人还惊奇地发现了以下观察结果：当与VWF或VWF片段共同给予时 可以改善本专利技术的FVIII分子经皮下的生物利用度。优选地，VWF应当呈VWF片段的形式， 其包含TIL'结构域和任选地包含C1099和/或Cl142半胱氨酸的氨基酸取代，以减少多聚 体的形成。 附图简述 图1 :在有或无共同给予相对于N8-GP而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' /D3/A1 时，在皮下给予10000U/kgN8-GP后，血浆中的FVIII活性。数据是在每一时间点来自 n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。N8-GP是如W02009108806的实施例1+2 所述而制备的糖-聚乙二醇化FVIII分子。 图2 :在有或无共同给予相对于N8-GP而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL'/E'/D3/ Al时，在皮下给予10000U/kgN8-GP后，血浆中的FVIII抗原。数据是在每一时间点来自 n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图3 :在有或无共同给予相对于N8-GP而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' / D3/A1时，在皮下给予2500U/kgN8-GP后，血浆中的FVIII活性。数据是在每一时间点来 自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图4 :在有或无共同给予相对于N8-GP而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' / D3/A1时，在皮下给予2500U/kgN8-GP后，血浆中的FVIII抗原。数据是在每一时间点来 自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图5 :在有或无共同给予相对于FVIII而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' / D3/A1 时，在皮下分别给予 5000 或 20000IU/kgwtFVIII(N8,turoctocogalfa)后，血 浆中的FVIII活性。数据是在每一时间点来自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准 差。N8/turocotogalfa是如W02009108806的实施例1中所述而制备的B结构域截 短的FVIII分子。 图6 :在有或无共同给予相对于FVIII而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' / D3/A1 时，在皮下给予 5000 或 20000IU/kgwtFVIII(N8,turoctocogalfa)后，血浆中 的FVIII抗原。数据是在每一时间点来自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图7 :在有或无共同给予相对于FVIII而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E' / D3/A1 时，在皮下给予 5000IU/kgFVIII(N8,turoctocogalfa)后，血浆中的FVIII抗 原。数据是在每一时间点来自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图8:在有或无共同给予相对于FVIII而言的7. 7倍摩尔剂量的VWFTIL' /E'/ D3/A1 时，在皮下给予 5000IU/kgFVIII(N8,turoctocogalfa)后，血浆中的FVIII活 性。数据是在每一时间点来自n=2FVIIIKO小鼠的测量的平均值和标准差。 图 9 :在 20T与FVIII(N8,turoctocogalfa)结合的VWF片段（764-865SEQ IDNO5)。上图面显示每次滴定后释放热量的原始数据。下图面显示得自积分原始数据的 结合等温线。数据分析表明VWF片段（SEQIDNO5)在放热反应中与FVIII结合，其化学 计量学为 1. 14,ΛH为-5. 82kcal/mole，ΛS为 9. 8cal/mol/deg和Kd 为 0· 33μΜ。F8/ N8/turoctocogalfa是如W02009108806的实施例1中所公开而制备的B结构域截短的 FVIII分子。 图10 :经皮下给予的N8-GP在体内能有效止血。左图面显示在尾巴横切前24小 时经皮下N8-GP或溶媒治疗，或在尾巴横切前5分钟经静脉内治疗的FVIIIK0小鼠中的血 液损失。N8-GP是如W02009108806的实施例1+2中所述而制备的糖-聚乙二醇化FVIII 分子。右图面显示在来自小鼠离体全血中的凝血时间，使用R0TEM。 图 11 :在 25°C，FVIII、TIL，/E，/D3/A1III、以及FVIII和TIL，/E，/D3/A1III 的混合物在155mMNaCl、10mM乙酸钙、10 %异丙醇中的SEC-UV(280nm)色谱图。 图 12 :在 25°C，FVIII、TIL'本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含FVIII分子的药物组合物在治疗血友病中的用途，其中所述FVIII分子包含长度为100‑400个氨基酸的截短的B结构域，其中所述截短的B结构域的氨基酸序列源自wt FVIII B结构域氨基酸序列，和其中所述FVIII分子经皮下给予的生物利用度为至少10%。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.04.24 EP 12165296.0;2013.01.09 EP 13150575.2;1. 包含FVIII分子的药物组合物在治疗血友病中的用途，其中所述FVIII分子包含长 度为100-400个氨基酸的截短的B结构域，其中所述截短的B结构域的氨基酸序列源自wt FVIII B结构域氨基酸序列，和其中所述FVIII分子经皮下给予的生物利用度为至少10%。2. 权利要求1的FVIII分子，其中所述B结构域包含连接到SEQ ID NO 1中的Ser 750 氨基酸残基的〇-聚糖。3. 前述权利要求中任一项的FVIII分子，其中所述FVIII分子的氨基酸序列如SEQ ID NO 3所示。4. 权利要求1的FVIII分子，其中所述FVIII B结构域的氨基酸序列选自：氨基酸 741-857 + 1637-1648;氨基酸 741-914 + 1637-1648;氨基酸 741-954 + 1637-1648;氨基 酸 741-965 + 1637-1648;氨基酸 741-965 + 1637-1648;氨基酸 741-1003 + 1637-1648; 氨基酸 741-1003 + 1637-1648;氨基酸 741-1020 + 1637-1648;氨基酸 741-1079 + 1637-1648;氨基酸 741-1206 + 1637-1648;氨基酸 741-1261 + 1637-1648;氨基酸 741-1309 + 1637-1648;氨基酸 741-914 + 1637-1648;氨基酸 741-954 + 1637-1648; 氨基酸 741-968 + 1637-1648;氨基酸 741-1003 + 1637-1648;氨基酸 741-1018 + 1637-1648;氨基酸 741-1070 + 1637-1648;氨基酸 741-1230 + 1637-1648;氨基酸 741-1301 + 1637-1648 ;氨基酸 741-965 + 1637-1648 ;氨基酸 741-965 + 1637-1648...

【专利技术属性】
技术研发人员：G博特，DM卡普特，F罗德，J哈亚宁，K罗伊普斯托夫，L蒂姆，M佩特森，M克贾科，O维斯特奧森，P里斯拜诺拜，JJ汉森，
申请(专利权)人：诺和诺德AS股份有限公司，
类型：发明
国别省市：丹麦;DK