一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体制造技术
A PvEH3 mutant with enhanced catalytic activity and enantiomeric normalization
The invention discloses a PvEH3 mutant with enhanced catalytic activity and enantiomeric normalization, belonging to the field of gene engineering and protein expression. On the basis of the epoxide hydrolase with certain enantiomeric catalytic properties, the molecular structure of epoxide hydrolase was reconstructed by combination site directed mutagenesis, and an epoxide hydrolase mutant PvEH3 with enhanced catalytic activity and enantiomer normalization was obtained.
【技术实现步骤摘要】
一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体
本专利技术涉及一种催化活性和对映归一性提高的PvEH3突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。
技术介绍
R-对氯苯乙二醇是一类高附加值的药物中间体，可用于神经类药物Eliprodil的合成。菜豆环氧化物水解酶PvEH3能催化外消旋对氯苯乙烷环氧化物对映归一性水解，将底物完全转化为相应的单一构型的R-对氯苯乙二醇，具有绿色、经济等优点。外消旋环氧化物的对映归一性水解可以通过一种具有互补的对映选择性和区域选择性的环氧化物水解酶实现。目前已报道的具有单一对映归一性催化特性的环氧化物水解酶有三种，分别来源于土豆、绿豆和新月柄杆菌。随着基因工程技术和高通量筛选技术的发展，对已知的环氧化物水解酶进行定向改造是丰富此类酶的重要途径。近年来，分子生物学技术，如定点突变、饱和突变、错易PCR和DNAshuffling等也用于改造EH的催化活性、稳定性、对映选择性等性质，并通过高通量筛选获得性质提高的突变酶。如来源于菜豆的环氧化物水解酶PvEH1对映归一性水解获得(R)-苯基乙二醇的e.e.p仅为33.6％，叶慧华等对其进行组合点突变后...
【技术保护点】
一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于，含有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.一种环氧化物水解酶突变体，其特征在于，含有SEQIDNO.1所示的氨基酸序列。2.编码权利要求1所述环氧化物水解酶突变体的基因。3.含有权利要求2所述基因的载体。4.表达权利要求1所述环氧化物水解酶突变体的细胞。5.根据权利要求4所述的细胞，其特征在于，包括真菌细胞和细菌细胞。6.一种基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主，表达SEQIDNO.1所示的环氧化物水解酶突变体。7.一种提高环氧化物水解酶催化活性和对映归一性的方法，其特征在于，所述方法是对phaseolu...
【专利技术属性】
技术研发人员：邬敏辰，胡博淳，王瑞，胡蝶，徐雄峰，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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