凝结芽孢杆菌的检测方法及培养基技术

本发明专利技术涉及凝结芽孢杆菌的检测方法及培养基。该培养基包括：胰蛋白胨5.0～10.0重量份，酵母浸粉/膏2.0～3.0重量份，葡萄糖1.0～5.0重量份，聚山梨醇‑80 1.0～2.0重量份，L‑半光氨酸0.1～0.5重量份，溴甲酚紫0.04～0.06重量份，琼脂15.0～20.0重量份。该培养基使菌落生长良好，成本低，配制简单方便，并且利用该培养基对凝结芽孢杆菌进行检测时计数结果准确可信。

Detection method and culture medium of Bacillus coagulis

The invention relates to a detection method and a culture medium for Bacillus coagulis. The medium includes 5 ~ 10 weight portions of tryptone, yeast extract / paste 2 ~ 3 weight, glucose 1 ~ 5 weight, polysorbate 80, 1 to 2 weight, L semi - ammoniac 0.1 ~ 0.5 weight, brominocol violet 0.04 ~ 0.06 weight, agar 15 ~ heavy weight. The culture medium makes the colony grow well, the cost is low, the preparation is simple and convenient, and the result of counting the Bacillus coagulant by this medium is accurate and believable.

【技术实现步骤摘要】
凝结芽孢杆菌的检测方法及培养基
本专利技术涉及食品领域，具体地，本专利技术涉及培养基以及凝结芽孢杆菌的检测方法及培养基。
技术介绍
目前，凝结芽孢杆菌作为有益菌被广泛地加以利用，如被加入到食品或动物饲料中，因此，凝结芽孢杆菌的量化计数的重要性和必要性日益凸显。然而，目前既没有国标方法，也没有一个可行的检测方法。因此，有效可行的检测凝结芽孢杆菌的方法急需研究开发。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：凝结芽孢杆菌的量化计数的重要性和必要性日益凸显，然而，目前既没有凝结芽孢杆菌检测的国标方法，也没有准确度高的可行的其他检测凝结芽孢杆菌的方法，基于上述问题，专利技术人经过无数的实验探索，研究开发出了一种操作简单，准确度高的凝结芽孢杆菌检测方法以及培养基，实现了从无到有的突破，该方法可操作性强，计数结果准确可信。本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种培养基。根据本专利技术的实施例，所述培养基包括：胰蛋白胨5.0～10.0重量份，酵母浸粉/膏2.0～3.0重量份，葡萄糖1.0～5.0重量份，聚山梨醇-801.0～2.0重量份，L-半光氨酸0.1～0.5重量份，溴甲酚紫0.04～0.06重量份，琼脂15.0～20.0重量份。专利技术人发现，胰蛋白胨、酵母浸粉/膏、葡萄糖可以提供凝结芽孢杆菌生长所需的碳源、氮源、微生物和矿物质；L-半光氨酸是芽孢杆菌保护剂，同时也是营养增补剂，可以促进凝结芽孢杆菌的生长；聚山梨醇酯80提供凝结芽孢杆菌生长所需的辅酶，并中和微生物生长所产生的`细胞毒性物质，同时是培养基固水剂(即防止高温下培养基水分过快丢失)和蛋白质保护剂，为凝结芽孢杆菌的生长提供一个良好的生长环境；溴甲酚紫是培养基酸碱指示剂，有凝结芽孢杆菌生长的菌落周围的培养基变黄，易于计数；琼脂是培养基凝固剂。培养基中加入L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫，凝结芽孢杆菌生长良好，菌落大易计数，且结果准确；培养基中不加入L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫，凝结芽孢杆菌生长不好，菌落较小，无法准确计数；若培养基中的L-半光氨酸、聚山梨醇酯80、溴甲酚紫的加入量过多或过少，会影响芽孢杆菌的生长状况或计数的准确度。根据本专利技术实施例的培养基，菌落生长良好，成本低，配制简单方便，并且利用根据本专利技术实施例的培养基对凝结芽孢杆菌进行检测时计数结果准确可信。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包括上述培养基。根据本专利技术实施例的试剂盒用于检测凝结芽孢杆菌时，简单方便，计数结果准确可信。在本专利技术的第三方面，本专利技术提出了上述培养基或试剂盒在检测凝结芽孢杆菌中的用途。专利技术人发现，所述培养基或试剂盒用于检测凝结芽孢杆菌时，简单方便，计数结果准确可信。在本专利技术的第四方面，本专利技术提出了一种检测凝结芽孢杆菌的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：利用上述培养基对待测样品进行扩增培养；以及将经过扩增培养的待测样品进行计数。根据本专利技术实施例的检测方法，可操作性强，计数结果准确可信。根据本专利技术的实施例，上述方法还可进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述待测样品预先依次进行稀释处理和加热处理，所述稀释处理的稀释倍数为10倍，所述加热处理是在温度为78～82℃的水浴条件下进行29～31min。温度过高或时间过长，尤其温度超过82℃时凝结芽孢杆菌被损伤或杀灭，菌落数均为0，计数结果有显著性差异；温度过低(小于78℃)或时间过短(小于29min)，无法使多为革兰氏阴性杆菌或阳性球菌等非目标菌灭活，从而使所述检测方法的计数结果的准确度降低。专利技术人发现，在该条件下进行加热处理，可以激活凝结芽孢杆菌，灭活非目标菌，从而便于凝结芽孢杆菌的分离和计数，使所述检测方法的计数结果更加准确可信。根据本专利技术的实施例，所述扩增培养是在温度为45～55℃的条件下进行22～26h。温度过高(大于55℃)，则凝结芽孢杆菌停止生长，菌落数为0；温度过低，凝结芽孢杆菌生长缓慢、菌落太小、不易观察计数。培养时间过长，菌落计数结果偏低，原因有两方面，其一为培养时间过长，则凝结芽孢杆菌过度生长，本为单个独立菌落而相互连接、根据通用的计数原则两菌落无明显界限成链状可计为一个菌落，导致计数结果偏低，其二为培养时间过长，则培养基过度失水，出现干裂等情况，影响凝结芽孢杆菌的生长繁殖，导致计数结果偏低；培养时间过短，菌落太小、不易观察计数，从而使所述检测方法的计数结果的准确度降低。专利技术人发现，在该条件下进行扩增培养，菌落大，从而便于凝结芽孢杆菌的分离和计数，使所述检测方法的计数结果更加准确可信。根据本专利技术的实施例，所述加热处理后，扩增培养前，进一步包括：梯度稀释处理，所述梯度稀释处理的稀释倍数为10倍。根据本专利技术的实施例，所述稀释处理或梯度稀释处理是通过加入磷酸盐缓冲液或生理盐水进行的。根据本专利技术的实施例，所述扩增培养是通过如下方式进行的：从梯度稀释液中每次吸取1mL置于培养皿中，平行吸取m次，其中，m为不小于2的整数；向培养皿中加入所述培养基，以便进行扩增培养。根据本专利技术的实施例，所述计数是通过如下方式进行的：若只有一个稀释度的平板菌落数在10CFU～150CFU范围内，计算所述稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；若两个连续稀释度的平板菌落数在10CFU～150CFU范围内时，按公式(1)计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目，N＝ΣC/(n1+n2)d公式(1)其中，N表示待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；∑C表示平板菌落数在10CFU～150CFU范围内的平板菌落数之和，n1表示第一稀释度的平板个数，n1为不大于m的整数；n2表示第二稀释度的平板个数，n2为不大于m的整数；d表示第一稀释度；若所有稀释度的平板菌落数均大于150CFU，计算稀释度最高的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最高稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU，计算稀释度最低的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最低稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待检样品中凝结芽孢杆菌的数目；若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；若所有稀释度的平板菌落数均不在10CFU～150CFU范围内，其中一部分稀释度的平板菌落数小于10CFU或大于150CFU时，计算平板菌落数最接近10CFU或150CFU的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目。需要说明的是，所述“以小于1乘以最低稀释倍数计算”是指最低稀释倍数为0即原液，结果报告＜1；最低稀释倍数为10倍稀释、结果报告＜1×10；以此类推。根据本专利技术实施例的计数方法，不局限于只有一个梯度在计数范围时的计数，而是考虑了所有可能出现的情况，并作了详细的描述和说明，所述检测方法全面、具体，检测结果准确可信。在本专利技术的第五方面，本专利技术提出了一种检测凝结芽孢杆菌的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种培养基，其特征在于，包括：胰蛋白胨5.0～10.0重量份，酵母浸粉/膏2.0～3.0重量份，葡萄糖1.0～5.0重量份，聚山梨醇‑80 1.0～2.0重量份，L‑半光氨酸0.1～0.5重量份，溴甲酚紫0.04～0.06重量份，琼脂15.0～20.0重量份。

【技术特征摘要】
1.一种培养基，其特征在于，包括：胰蛋白胨5.0～10.0重量份，酵母浸粉/膏2.0～3.0重量份，葡萄糖1.0～5.0重量份，聚山梨醇-801.0～2.0重量份，L-半光氨酸0.1～0.5重量份，溴甲酚紫0.04～0.06重量份，琼脂15.0～20.0重量份。2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的培养基。3.权利要求1所述的培养基或权利要求2所述的试剂盒在检测凝结芽孢杆菌中的用途。4.一种检测凝结芽孢杆菌的方法，其特征在于，包括：利用权利要求1所述的培养基对待测样品进行扩增培养；以及将经过扩增培养的待测样品进行计数。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述待测样品预先依次进行稀释处理和加热处理，所述稀释处理的稀释倍数为10倍，所述加热处理是在温度为78～82℃的水浴条件下进行29～31min；任选地，所述扩增培养是在温度为45～55℃的条件下进行22～26h。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述加热处理后，扩增培养前，进一步包括：梯度稀释处理，所述梯度稀释处理的稀释倍数为10倍。7.根据权利要求5～6任一项所述的方法，其特征在于，所述稀释处理或梯度稀释处理是通过加入磷酸盐缓冲液或生理盐水进行的。8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述扩增培养是通过如下方式进行的：从梯度稀释液中每次吸取1mL置于培养皿中，平行吸取m次，其中，m为不小于2的整数；向培养皿中加入所述培养基，以便进行扩增培养。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述计数是通过如下方式进行的：若只有一个稀释度的平板菌落数在10CFU～150CFU范围内，计算所述稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以所述稀释液的稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；若两个连续稀释度的平板菌落数在10CFU～150CFU范围内时，按公式(1)计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目，N＝ΣC/(n1+n2)d公式(1)其中，N表示待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；∑C表示平板菌落数在10CFU～150CFU范围内的平板菌落数之和，n1表示第一稀释度的平板个数，n1为不大于m的整数；n2表示第二稀释度的平板个数，n2为不大于m的整数；d表示第一稀释度；若所有稀释度的平板菌落数均大于150CFU，计算稀释度最高的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最高稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待测样品中凝结芽孢杆菌的数目；若所有稀释度的平板菌落数均小于10CFU，计算稀释度最低的稀释液的m个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以最低稀释倍数，计算获得每g或每mL所述待检样品中凝结芽孢杆菌的数目；若所有稀释度的平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛志清，吴玉秋，李志国，许璐，袁凤琴，喻东威，常建军，宋晓东，
申请(专利权)人：内蒙古蒙牛乳业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙古,15