一种重组人透明质酸及其生产方法技术
A recombinant human hyaluronic acid and its production method
The invention provides a recombinant human hyaluronic acid homologous to the human body.
【技术实现步骤摘要】
一种重组人透明质酸及其生产方法
本专利技术涉及日用化工领域，特别涉及一种重组人透明质酸及其生产方法。
技术介绍
透明质酸，又名玻璃酸，是一种高分子的聚合物，由单位D-葡萄糖醛酸及N-乙酰葡糖胺组成的高级酸性粘多糖，它是肌肤水嫩的重要基础物质，本身也是人体的一种成分，它具有特殊的保水作用，份量更高达其本身重量的100倍，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，它还可以改善皮肤营养代谢，使皮肤柔嫩、光滑、去皱、增加弹性、防止衰老，在保湿的同时又是良好的透皮吸收促进剂，与其他营养成分配合使用，可以起到促进营养吸收的更理想效果。现有的透明质酸的来源中，动物提取的方法由于原料有限，且原料中透明质酸含量低，导致收率低、提纯难、成本高、产品质量较差，难以规模化生产；生物发酵提取的方法优点是产量大、成本低，占据全球市场的70％，但采用的工艺发酵周期往往较长、产品蛋白质含量高、葡萄糖醛酸含量低、产品透光率差，有的甚至是呈现纤维状的形态，不易溶解，同时得到的透明质酸分子量较大，一般在80-120万之间，主要功能是保水保湿和形成组织保护膜及填充物，并不能被人体皮肤吸收；目前以大分子透明质...
【技术保护点】
一种与人体同源的重组人透明质酸，其特征在于，该重组人透明质酸结构式如下：
【技术特征摘要】
1.一种与人体同源的重组人透明质酸，其特征在于，该重组人透明质酸结构式如下：其中n＝3-10，结构式两端是与人体同源性酶切末端。2.如权利要求1所述的使用与人体同源的重组人透明质酸酶制备重组人透明质酸，其特征在于，本发明使用的重组人透明质酸酶为人透明质酸酶PH20细胞外部分与人源蛋白(人白蛋白或免疫球蛋白)片段的融合蛋白，其氨基酸序列含有644个氨基酸残基，具有人体同源性高、半衰期长的优点。3.如权利要求2所述的与人体同源的重组人透明质酸酶，其特征在于，制备方法包括如下步骤：1)通过PCR方法将融合蛋白重组人透明质酸酶的目的基因构建到富含GC的动物细胞表达载体pMH3、pMH4或pMH5中；2)制备表达质粒后，稳定转染到无血清悬浮培养的CHO细胞中；通过G418筛选，用枪头手动挑取稳定克隆到96孔板中；3)当细胞汇合度大于50％时，更换无血清新鲜培养基；4)3-6小时后，收集培养基样品，通过抗体点杂交或ELISA方法检测表达量，选出表达量最高的多个克隆子，继续在尖底小摇瓶内进行无血清培养和做传代稳定性研究；5)选出传代稳定的克隆子在5-8L激流式反应器内进行扩增培养，在各批次丰收液中选取透明质酸酶活性浓度达到600-1000U/L的培养液。4.如权利要求3所述的与人体同源的重组人透明质酸酶制备方法，其特征在于，在步骤5)之后还包括如下步骤：1)对步骤5)中获得的培养液进行离心并过滤，制得融合蛋白重组人透明质酸酶粗品；2)用人源蛋白特异性纯化方法对融合蛋白重组人透明质酸酶粗品进行纯化。5.如权利要求3所述的与人体同源的重组人透明质酸酶制备方法，其特征在于，离心采用的转速为...
【专利技术属性】
技术研发人员：贺晓军，
申请(专利权)人：杭州惠博士生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33
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