【技术实现步骤摘要】
基于液相芯片法的NRAS突变检测试剂盒和延伸引物
本专利技术属于分子生物学领域,涉及医学和生物技术,具体的是涉及一种NRAS基因突变检测试剂盒和延伸引物,可利用液相芯片技术检测与癌症相关的NRAS基因突变。
技术介绍
Ras基因是一种原癌基因,在细胞的讯息传递路径上,主要为活化控制基因转录的激酶,调节细胞的增殖与分化,是EGFR信号转导通路中一个重要的下游调控基因。在正常细胞中,RAS以非活化状态(GDP结合型)存在,当受到外源信号刺激,RAS发生磷酸化,构象改变而成为活化的GTP结合型,活化的GTP-RAS激活下游RAF信号转导蛋白,直到被降解。RAS基因致瘤性点突变会降低RAS蛋白水解GTP为GDP的能力,导致RAS蛋白与GTP持续性结合,引起下游通路持续性激活,使细胞产生不依赖于生长因子的恶性增殖,导致癌症的发生。神经细胞瘤鼠肉瘤癌基因(Neuroblastomarasviraloncogenehomolog,NRAS)是Ras基因家族成员之一。NRAS基因的突变主要位于第2、3、4外显子上,导致多种恶性肿瘤,在结直肠癌(colorectalcancer,CRC)患者中的突变率为1-6%,在恶性黑素瘤(malignantmelanoma)中的突变概率是20%,是人体肿瘤中常见的致癌基因。临床研究发现NRAS突变的结直肠癌患者在对以西妥昔单抗为主的EGFR单抗药物敏感性显著降低,故NRAS基因突变是抗表皮生长因子受体单抗治疗疗效的独立预测因素。NRAS基因检测已被欧美地区列为大肠癌患者内科治疗前必做的常规检查、美国癌症综合网络(NCCN)的《NCCN结 ...
【技术保护点】
一种NRAS基因突变检测液相芯片试剂盒,其特征是,包括有:(A).针对NRAS基因的2号外显子上的12号密码子、13号密码子,3号外显子上的第61位密码子、4号外显子上的146号密码子中的18个突变基因类型及野生基因型分别设计ASPE延伸引物,每种ASPE延伸引物由5’端的tag序列和3’端针对突变位点的特异性引物序列组成,突变基因类型的所述特异性引物序列选自以下至少一种:针对G34A位点的SEQ ID NO.22,针对G34T位点的SEQ ID NO.23,针对G34C位点的SEQ ID NO.24,针对G35A位点的SEQ ID NO.25,针对G35C位点的SEQ ID NO.26,针对G35T位点的SEQ ID NO.27,针对G37C位点的SEQ ID NO.28,针对G37T位点的SEQ ID NO.29,针对G38A位点的SEQ ID NO.30,针对G38T位点的SEQ ID NO.31,针对G38C位点的SEQ ID NO.32,针对C181A位点的SEQ ID NO.33,针对A182C位点的SEQ ID NO.34,针对A182T位点的SEQ ID NO.35,针 ...
【技术特征摘要】
1.一种NRAS基因突变检测液相芯片试剂盒,其特征是,包括有:(A).针对NRAS基因的2号外显子上的12号密码子、13号密码子,3号外显子上的第61位密码子、4号外显子上的146号密码子中的18个突变基因类型及野生基因型分别设计ASPE延伸引物,每种ASPE延伸引物由5’端的tag序列和3’端针对突变位点的特异性引物序列组成,突变基因类型的所述特异性引物序列选自以下至少一种:针对G34A位点的SEQIDNO.22,针对G34T位点的SEQIDNO.23,针对G34C位点的SEQIDNO.24,针对G35A位点的SEQIDNO.25,针对G35C位点的SEQIDNO.26,针对G35T位点的SEQIDNO.27,针对G37C位点的SEQIDNO.28,针对G37T位点的SEQIDNO.29,针对G38A位点的SEQIDNO.30,针对G38T位点的SEQIDNO.31,针对G38C位点的SEQIDNO.32,针对C181A位点的SEQIDNO.33,针对A182C位点的SEQIDNO.34,针对A182T位点的SEQIDNO.35,针对A182G位点的SEQIDNO.36,针对A183T位点的SEQIDNO.37,针对G436A位点的SEQIDNO.38,针对G437T位点的SEQIDNO.39;野生基因型的ASPE延伸引物选自相应的以下至少一种:针对2号外显子的SEQIDNO.40,针对3号外显子SEQIDNO.41、针对4号外显子SEQIDNO.73;(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的磁珠,所述anti-tag序列与磁珠连接中间还设有间隔臂序列;所述anti-tag序列选自SEQIDNO.42~SEQIDNO.62,且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列完全互补配对;(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。2.根据权利要求1所述的NRAS基因突变检测液相芯片试剂盒,其特征是,所述扩增引物为选自以下至少一对:针对2号外显子的SEQIDNO.63和SEQIDNO.64,针对3号外显子SEQIDNO.65和SEQIDNO.66、针对4号外显子SEQIDNO.67和SEQIDNO.68。3.根据权利要求1所述的NRAS基因突变检测液相芯片试剂盒,其特征是,突变基因类型的所述ASPE延伸引物选自以下中的至少一种:针对G34A位点的由SEQIDNO.1和SEQIDNO.22组成的序列,针对G34T位点的由SEQIDNO.2和SEQIDNO.23组成的序列,针对G34C位点的由SEQIDNO.3和SEQIDNO.24组成的序列,针对G35A位点的由SEQIDNO.4和SEQIDNO.25组成的序列,针对G35C位点的由SEQIDNO.5和SEQIDNO.26组成的序列,针对G35T位点的由SEQIDNO.6和SEQIDNO.27组成的序列,针对G37C位点的由SEQIDNO.7和SEQIDNO.28组成的序列,针对G37T位点的由SEQIDNO.8和SEQIDNO.29组成的序列,针对G38A位点的由SEQIDNO.9和SEQIDNO.30组成的序列,针对G38T位点的由SEQIDNO.10和SEQIDNO.31组成的序列,针对G38C位点的由SEQIDNO.11和SEQIDNO.32组成的序列,针对C181A位点的由SEQIDNO.12和SEQIDNO.33组成的序列,针对A182C位点的由SEQIDNO.13和SEQIDNO.34组成的序列,针对A182T位点的由SEQIDNO.14和SEQIDNO.35组成的序列,针对A182G位点的由SEQIDNO.15和SEQIDNO.36组成的序列,针对A183T位点的由SEQIDNO.16和SEQIDNO.37组成的序列,针对G436A位点的由SEQIDNO.17和SEQIDNO.38组成的序列,针对G437T位点的由SEQIDNO.18和SEQIDNO.39组成的序列;野生基因型所述ASPE延伸引物选自以下中的相应的至少一种:针对2号外显子的由SEQIDNO.19和SEQIDNO.40组成的序列,针对3号...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘真真,许嘉森,吴诗扬,刘志明,刘苏燕,
申请(专利权)人:益善生物技术股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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