磁笔式单人份核酸提取试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术公开了提供一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒及其使用方法，包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。本试剂盒采取试剂以单人份预分装的方式，用户只需要加入样本就可以放入配套的磁笔式仪器进行核酸提取，整个过程操作简单，安全无毒，样本量范围大0.005～3mL、提取的核酸纯度高且浓度大，实验结果重复性好，可直接用于酶切、PCR、恒温扩增、分子杂交等各种分子生物学实验。

Magnetic pen type single human nucleic acid extraction kit and its use method

The invention discloses a magnetic pen type single person nucleic acid extraction kit and a usage method thereof, comprising seven connecting pipes, wherein the seven connecting pipes are separately equipped with nucleic acid extraction reagent with single person. The kit to take the form of a single pre - Packaged Reagents, magnetic pen type instrument users only need to sample can be placed in supporting the whole process of nucleic acid extraction, simple operation, safe and non-toxic, sample size range 0.005 ~ 3mL, the high purity of nucleic acid extraction and concentration, the experimental results with good reproducibility, can be directly for enzyme digestion, PCR, constant temperature amplification, molecular hybridization and other molecular biology experiments.

【技术实现步骤摘要】
磁笔式单人份核酸提取试剂盒及其使用方法
本专利技术涉及一种试剂盒，特别涉及一种单人份核酸提取试剂盒。
技术介绍
目前提取核酸的方式有手工提取和自动化提取；手工提取有煮沸法，酚-氯仿提取法，离心柱法和磁珠法；其中磁珠法较多用于自动化提取。其中手工提取：煮沸法虽然使用较为广泛，操作简单，但是提取核酸的纯度较低；酚-氯仿提取法虽然能够去除痰液中多糖以及色素成分，但操作复杂要求高，而且氯仿等化学试剂对有毒；离心柱法需要多次离心，手工操作步骤较多。目前的磁珠法自动化提取根据移液特点主要分为磁笔式和抽吸式两大类：抽吸式过程残留洗涤液中的盐和乙醇/异丙醇会直接影响后面的洗脱效率和扩增；磁铁设计在侧面的装置残留的液体相对较少，但其洗脱的效率不高，耗时长。另外该类仪器设备成本比较昂贵，所需耗材成本较高。磁棒式：每一步的液体不会残留，因为磁棒只带走磁珠，然后转移到下一个步骤相应的反应孔中，且其编程简单，易维护；不足之处是：需要提前手工加试剂；样本量受限，只能小于1mL。现有的磁笔试剂盒采用96孔板作为试剂的容器，受限于96孔板的孔大小(最大为2.2mL)，提取时使用的样本量需在0.005～0.5mL之间，无法操作大样本量的提取。使用此种磁笔试剂盒，待测样本需离心、去上清、洗涤等繁琐的前处理步骤。目前市面主要流行的磁珠法为手工提取法，已有的少量磁笔试剂盒也需要客户补加醇类试剂，操作繁琐。另外磁笔试剂盒需要一次一个96孔板，若没有凑齐16个样本，则存在试剂浪费的情况，不够灵活。现有磁笔产品配有蛋白酶K用于样本裂解，蛋白酶K对温度敏感需低温保存，因此现有磁笔产品需2～8℃储存。总之，截止目前，没有一种自动化、操作简单、用时短、安全无毒、样本量范围大、核酸纯度高且浓度大、无需在特定实验室进行操作的实验方法。
技术实现思路
本专利技术针对上述问题，提出了一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒，以解决了现有技术的缺陷，达到无需前处理，使用灵活，保存简单的目的。本专利技术采取的技术方案如下：本专利技术提供一种磁笔式单人份核酸提取试剂盒，包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。进一步，所述试剂盒中装有裂解液、清洗液、洗脱液和磁珠，其中裂解液成分不包括蛋白酶K，裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～5mol/L、盐酸胍0～5mol/L、氯化钠0.05～0.3mol/L、乙二胺四乙酸二钠10～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷10～30mmol/L、吐温-20，3～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～5wt％。优选的，所述裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～4mol/L、盐酸胍3～4mol/L、氯化钠0.1～0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠15～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷20～30mmol/L、吐温-20，4～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～3wt％。进一步，清洗液包括第一清洗液和第二清洗液，其中第一清洗液包括以下成分:盐酸胍3～5mol/L、三羟甲基氨基甲烷10～30mmol/L、50～70v/v％的乙醇溶液。优选的，第一清洗液包括以下成分:盐酸胍3～4mol/L、三羟甲基氨基甲烷10～20mmol/L、50～60v/v％的乙醇溶液。进一步，第二清洗液包括以下成分：60～85v/v％的乙醇溶液、吐温-20，0.5～2wt％。优选的，第二清洗液包括以下成分：70～80v/v％的乙醇溶液、吐温-200.5～1wt％；进一步，洗脱液为1～20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液，优选的，洗脱液为10～15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液。进一步，所述七连管为单条七连管，其中七连管的第一管的容量大于或等于3mL，优选的，为3-9mL。第二至第七管最大容积为2mL。其中第一个管放置裂解液；第二管放置磁珠；第3-5管放置清洗液，用于清洗杂质；第7管放置洗脱液，用于洗脱DNA。本专利技术还提供一种上述的磁笔式单人份核酸提取试剂盒的使用方法，按样本数取出相应的七连管，将每个待测样本分别滴入相应七连管的第一管内，然后放入核酸自动提取仪中，按设定程序运行后，第七管中洗脱后的产物为提取后的核酸。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本试剂盒每人份独立包装、试剂盒中预装好裂解液、清洗液、洗脱液和磁珠，通过胍盐和高温裂解样本中的细胞释放核酸后超顺磁性氧化硅纳米磁珠吸附核酸，再经过清洗和洗脱的步骤得到纯度高的核酸。进一步的，本专利技术采用了单条7连管，第一个管的容量远大于现有技术的孔容量受限于96孔板的大小，相比于现有技术中的96孔，受限于96孔的最大容量为2.2mL，因此最大样本量不能超过0.5mL，而本专利技术使用样本量可达0.005～3mL，解决痰液、尿液、血液等大样本量核酸提取的问题。本专利技术的裂解液可以直接裂解原液化样本，因此使用的样本无需离心、洗涤等前处理，直接加入即可实现检测。本专利技术操作方法简单，试剂预装，用户只需要一步加样即可，全自动提取，无需手工提取；优化裂解液且无需手工提取，进而无需添加醇剂等。本专利技术是单人份试剂，可用于少量样本的检测，有多少个样本放置多少条试剂，最多一次可以检测20个样本,不存在试剂浪费的问题。本专利技术通过反复实验研究，优化裂解液组分，得到合理的成分和配比，改善了样本的裂解效率，达到了无需蛋白酶K辅助裂解的需求，因此试剂盒可在常温下保存。本试剂盒采取试剂以单人份预分装的方式，用户只需要加入样本就可以放入配套的磁笔式仪器进行核酸提取，整个过程操作简单，安全无毒，样本量范围大0.005～3mL、提取的核酸纯度高且浓度大，实验结果重复性好，可直接用于酶切、PCR、恒温扩增、分子杂交等各种分子生物学实验。具体实施方式：下面结合具体实施例，对本专利技术做详细描述。实施例1试剂盒：预分装核酸提取试剂：在7连管试剂盒中分装提取过程需要的裂解液、清洗液、洗脱液和磁珠。裂解液包括：硫氰酸胍3mol/L、盐酸胍3mol/L、氯化钠0.05、mol/L、乙二胺四乙酸二钠10mmol/L、三羟甲基氨基甲烷10mmol/L、吐温-203wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1wt％；第一清洗液为盐酸胍3mol/L、三羟甲基氨基甲烷10mmol/L、50v/v％的乙醇溶液；第二清洗液为60v/v％的乙醇溶液、吐温-200.5wt％，洗脱液为10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液。实施例2裂解液包括：硫氰酸胍4mol/L、盐酸胍4mol/L、氯化钠0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷30mmol/L、吐温-206wt％、聚乙二醇辛基苯基醚3wt％；第一清洗液盐酸胍4mol/L、三羟甲基氨基甲烷20mmol/L、60v/v％的乙醇溶液；第二清洗液80v/v％的乙醇溶液、吐温-201wt％；洗脱液为15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液。实施例3裂解液包括：硫氰酸胍5mol/L、氯化钠0.3mol/L、乙二胺四乙酸二钠20mmol/L、三羟甲基氨基甲烷20mmol/L、吐温-204wt％、聚乙二醇辛基苯基醚5wt％；第一清洗液盐酸胍5mol/L、三羟甲基氨基甲烷30mmol/L、70v/v％的乙醇溶液；第二清洗液70v/v％的乙醇溶液、吐温-200.5wt％；洗脱液为20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液。应用实例1痰液样本的核酸提取1.痰液液化后加入1mL到预分装本文档来自技高网...

【技术保护点】
磁笔式单人份核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。

【技术特征摘要】
1.磁笔式单人份核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括七连管，所述七连管中预先分装有单人份的核酸提取试剂。2.根据权利要求1所述的磁笔式单人份核酸提取试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中装有裂解液、清洗液、洗脱液和磁珠，其中裂解液成分不包括蛋白酶K，裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～5mol/L、盐酸胍0～5mol/L、氯化钠0.05～0.3mol/L、乙二胺四乙酸二钠10～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷10～30mmol/L、吐温-20，3～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～5wt％。3.根据权利要求2所述的磁笔式单人份核酸提取试剂盒，其特征在于，所述裂解液包括以下成分：硫氰酸胍3～4mol/L、盐酸胍3～4mol/L、氯化钠0.1～0.2mol/L、乙二胺四乙酸二钠15～30mmol/L、三羟甲基氨基甲烷20～30mmol/L、吐温-20，4～6wt％、聚乙二醇辛基苯基醚1～3wt％。4.根据权利要求2所述的磁笔式单人份核酸提取试剂盒，其特征在于，清洗液包括第一清洗液和第二清洗液，其中第一清洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：金荣愉，王岱桑，陈思思，周艳琼，赵芯，尤其敏，
申请(专利权)人：杭州优思达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33