一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；本发明专利技术的优点在于：简便易行、提取的RNA质量高、可同时适用于于玉米根部及叶片的RNA提取。

Extraction of total RNA from leaves and roots of a maize seedling

The invention discloses a method for extracting total RNA from the leaves of maize seedlings and root, after pretreatment, equipment selection, seedling seedling pretreatment, nuclear protein complexes, RNA RNA dissociation precipitation, washing, the dissolution of RNA and storage procedures, completed a total RNA extraction method of maize seedling leaves the leaf and root; the invention has the advantages of simple, high quality RNA extraction, can be applied in the roots and leaves of maize RNA extraction.

【技术实现步骤摘要】
一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法
本专利技术属于一种RNA的提取方法，具体涉及一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法。
技术介绍
玉米作为C4植物的代表，光合作用效率高，在常见农作物中单产最高，被称为谷物之王，是世界和我国播种面积第一的作物。随着我国经济的迅速发展，人民生活水平大幅提高，人们的膳食结构发生了很大变化。我国的人均年肉类消费从三十年前的25公斤提高到50公斤，但相对于美国目前的110公斤仍有较大差距。近年来，玉米的生产和消费一直呈现快速增长的态势。尽管目前中国玉米种殖面积已经扩大到3182.5万hm2，成为仅次于美国的第二大生产国，玉米种植面积和总产量紧随美国之后。然而，近年来，中国已经从玉米出口国变成玉米进口国，从而彻底改变了世界粮食的供需情况，使国际玉米价格在短短五年内上升了六倍。与此同时，我国的耕地在减少，气候有进一步恶化的趋势；而全球人口以每年一亿人的速度爆炸式增长，能新开发的耕地极其有限，玉米供需关系很可能进一步趋紧。我国是世界盐碱地面积较大的国家之一，约为3460万hm2盐渍土面积，盐碱化耕地760万hm2，其中海涂土壤近241万hm2，占海岸带土壤总面积的17.35％若其中一部分能种植耐盐、高产、优质的玉米，我国粮食安全势态将极大改善。盐土在中国类型多、分布广，严重影响着农业的生产发展，如何提高玉米的抗盐性，增加在盐胁迫下玉米的产量也一直是人们关注的课题。玉米耐盐构机制及相关性状是受多基因控制的数量性状，受环境影响比较大。在玉米自交系耐盐性状的研究中需要使用到到玉米RNA的提取和转录，现有技术对玉米RNA的提取资料较少，并且，提取效果不佳，极大的影响了后期的转录，与整体对玉米自交系耐盐性状的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，现提供一种提取效果佳，使用方法简单的玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，其创新点在于：经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：(1)设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用；(2)幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗；(3)幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行；(4)核蛋白复合物的解离：取1mlTrizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25-35s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1-0.3ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10-20s，然后室温下放置2-4min；(5)RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10-20min，将离心后的上层水相转移到新的灭菌过的1.5ml离心管中，加入0.5ml的异丙醇，轻轻上下颠倒摇晃若干次，然后在室温环境下静置8-12min，然后在4℃、12000rpm转速下离心8-12min；(6)RNA的洗涤：将离心后的液体的上清液去除，然后加入1ml75％浓度的乙醇，涡旋混匀，进行离心处理；(7)RNA的溶解和存储：将离心后的液体中的乙醇倾倒出去，然后放置于室温下干燥8-12min，然后加入40μL无RNA酶双蒸水，用移液器吸打10-20次，瞬时离心，然后得到RNA，放于-80℃环境下保存。进一步的，所述步骤(1)中的高压灭菌的条件为：压力升至103.4kPa(1.05kg/cm2)，温度达121.3℃，维持18-20分钟。进一步的，所述步骤(4)中的涡旋震荡后在室温下静置时间为3-7min。进一步的，所述步骤(5)中的离心转速为10000-14000rpm，所述上下颠倒摇晃次数为8-12次。进一步的，所述步骤(6)中的离心处理的条件为：4℃下，7500转下离心处理5min。本专利技术的有益效果如下：本专利技术简便易行、提取的RNA质量高、可同时适用于于玉米根部及叶片的RNA提取。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效。实施例1一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：(1)设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用，高压灭菌的条件为：压力升至103.4kPa(1.05kg/cm2)，温度达121.3℃，维持18-20分钟。(2)幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗。(3)幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行。(4)核蛋白复合物的解离：取1mlTrizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10s，然后室温下放置2min，涡旋震荡后在室温下静置时间为3min。(5)RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10min，将离心后的上层水相转移到新的灭菌过的1.5ml离心管中，加入0.5ml的异丙醇，轻轻上下颠倒摇晃若干次，然后在室温环境下静置8min，然后在4℃、12000rpm转速下离心8min，离心转速为10000rpm，上下颠倒摇晃次数为8次。(6)RNA的洗涤：将离心后的液体的上清液去除，然后加入1ml75％浓度的乙醇，涡旋混匀，进行离心处理；离心处理的条件为：4℃下，7500转下离心处理5min。(7)RNA的溶解和存储：将离心后的液体中的乙醇倾倒出去，然后放置于室温下干燥8min，然后加入40μL无RNA酶双蒸水，用移液器吸打10次，瞬时离心，然后得到RNA，放于-80℃环境下保存。实施例2一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：(1)设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，其特征在于：经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：（1）设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用；（2）幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗；（3）幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行；（4）核蛋白复合物的解离：取1ml Trizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25‑35s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1‑0.3ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10‑20s，然后室温下放置2‑4min；（5）RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10‑20min，将离心后的上层水相转移到新的灭菌过的1.5ml离心管中，加入0.5ml的异丙醇，轻轻上下颠倒摇晃若干次，然后在室温环境下静置8‑12min，然后在4℃、12000rpm转速下离心8‑12min；（6）RNA的洗涤：将离心后的液体的上清液去除，然后加入1ml75%浓度的乙醇，涡旋混匀，进行离心处理；（7）RNA的溶解和存储：将离心后的液体中的乙醇倾倒出去，然后放置于室温下干燥8‑12min，然后加入40µL无RNA酶双蒸水，用移液器吸打10‑20次，瞬时离心，然后得到RNA，放于‑80℃环境下保存。...

【技术特征摘要】
1.一种玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法，其特征在于：经过设备的预处理、幼苗的选择、幼苗的预处理、核蛋白复合物的解离、RNA的沉淀、RNA的洗涤、RNA的溶解和存储步骤，完成了玉米幼苗叶片及根的总RNA的提取方法；具体步骤如下：（1）设备的预处理：用锡箔纸将研钵、研杵、无污染小勺和玻璃器进行包裹起来，然后将无RNA酶1.5ml及2ml的离心管装入烧杯中，用锡箔纸进行封口处理，将超纯水装入蓝盖玻璃试剂瓶中，无RNA酶移液枪头装入枪头盒中，然后将之前的所有设备高压灭菌，保存灭完菌的超纯水，和灭菌后的设备放于烘箱中烘干，室温保存备用；（2）幼苗的选择：选择生长到三叶期的玉米幼苗；（3）幼苗的预处理：将选择的玉米幼苗放入液氮中，同时，将灭菌后的研钵、研杵和小勺在液氮中进行预处理，将液氮中的玉米幼苗转入研钵中，加入液氮进行充分研磨，直到研磨成粉末状，然后使用小勺将粉末状幼苗装入2ml离心管中，整个操作过程在超净台中进行；（4）核蛋白复合物的解离：取1mlTrizol试剂加入到上述2ml离心管内，涡旋震荡25-35s，然后在室温下静置一段时间，使核蛋白复合物完全解离，再加入0.1-0.3ml的三氯甲烷，盖紧管盖，用手剧烈摇动10-20s，然后室温下放置2-4min；（5）RNA的沉淀：将放置后的2ml离心管在4℃环境下离心10-20min，将离心后...

【专利技术属性】
技术研发人员：李平，汪保华，谢永宏，周水娟，冯艳，段超，薛康康，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32