抗蜂王浆主蛋白3的单克隆抗体及检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了抗蜂王浆主蛋白3的单克隆抗体及检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒。本发明专利技术以SEQ ID No.1所示序列为抗原采用细胞融合得到阳性细胞株112株，通过交叉反应检测获得14株融合细胞株，经过三轮亚克隆挑选其中亲和力更高的7株进行抗体表位检测和配对实验，标曲绘制及样本测定结果发现，其中的3G4与2D2这两株有较好的线性关系且灵敏度高；本发明专利技术进一步将其构建双抗体夹心ELISA法检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒。本发明专利技术酶联免疫试剂盒特异性检测MRJP3且与其他相关蛋白无交叉反应，检测范围为0.78ng/mL‑50ng/mL，检测灵敏度为194pg/mL，精密度高，批间差小。

A monoclonal antibody against the main protein 3 of royal jelly and an ELISA kit for the detection of the main protein 3 of royal jelly

The invention discloses a monoclonal antibody against the main protein 3 of the royal jelly and an ELISA kit for the detection of the main protein 3 of the royal jelly. The present invention uses SEQ ID No.1 sequences shown by cell fusion antigen positive 112 cell strains, 14 strains were obtained by fusion cell line cross reaction test, after three rounds of subcloning selected higher affinity antibody epitopes of 7 strains were detected and paired experiments, standard curved drawing and sample determination results 3G4 and 2D2, the two strains have good linearity and high sensitivity; the invention further construct the double antibody sandwich ELISA assay and royal jelly protein 3 ELISA kit. The ELISA kit for specific detection of MRJP3 and other related proteins with no cross reaction, detection range of 0.78ng/mL 50ng/mL, the detection sensitivity is 194pg/mL, high precision, small difference between batches.

【技术实现步骤摘要】
抗蜂王浆主蛋白3的单克隆抗体及检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒
本专利技术涉及蜂王浆主蛋白单克隆抗体的制备及其应用，尤其涉及蜂王浆主蛋白3单克隆抗体的制备，本专利技术进一步涉及用所制备的蜂王浆主蛋白3单克隆抗体构建的双抗体夹心ELISA法检测蜂王浆主蛋白3(MRJP3)的酶联免疫试剂盒及其应用，属于蜂王浆主蛋白3的检测领域。
技术介绍
蜂王浆是一种具有滋补保健和延年益寿功能的天然功能性蜂产品。蜂王浆成分复杂，营养丰富，其中蛋白质含量为12.0％～15.0％。由于蜂王浆不易保存，极易变质。因而，蜂王浆的品质和其新鲜度紧密相关。目前，国际上缺少一个公认的，可以广泛推广、能如实反映蜂王浆新鲜度的方法，着也是现行蜂王浆质量标准的一个缺陷。中国是世界蜂王浆的第一生产国和第一出口国。因此，探求和建立蜂王浆新鲜度评价方法势在必行。研究表明，王浆主蛋白与蜂王浆的新鲜度呈正相关，即蜂王浆越新鲜其王浆主蛋白含量越高。如果利用MRJP3单克隆抗体筛选出特异性好、灵敏度高的抗体对，进而开发双夹心ELISA试剂盒实现对MRJP3的绝对定量，将能够为蜂王浆新鲜度检测提供可靠和可实际应用的检测方法。
技术实现思路
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【技术保护点】
用于制备抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体的抗原序列，其特征在于，其氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。

【技术特征摘要】
1.用于制备抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体的抗原序列，其特征在于，其氨基酸序列为SEQIDNo.1所示。2.一株稳定分泌抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体的杂交瘤细胞株2D2，其特征在于，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.13847。3.由权利要求2所述杂交瘤细胞株2D2分泌的抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体。4.一株稳定分泌抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体的杂交瘤细胞株3G4，其特征在于，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.13848。5.由权利要求4所述杂交瘤细胞株3G4分泌的抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体。6.权利要求3或5所述的抗蜂王浆主蛋白3单克隆抗体在检测蜂王浆主蛋白3或其含量中的用途。7.一种双抗体夹心ELISA法检测蜂王浆主蛋白3的酶联免疫试剂盒，包括：抗蜂王浆主蛋白3的一抗，生物素标记的抗蜂王浆主蛋白3的二抗，标准品，辣根过氧化物酶标记亲和素，生...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡菡，李建科，冯毛，房宇，韩宾，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11