一种生产大片吸虫组织蛋白酶L1的方法技术

本发明专利技术公开了一种生产大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１的方法，包括一个用ＰＣＲ从大片吸虫成虫ｃＤＮＡ文库中扩增出大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１基因的过程，一个构建含有组织蛋白酶Ｌ１全长基因的重组质粒的过程，一个将重组质粒转化入大肠杆菌中进行增殖的过程，一个诱导表达含有正确的重组质粒转化的大肠杆菌的过程，然后收集菌液，透析、过滤，最后将样品加入预先用水洗缓冲液处理好的蛋白纯化柱中，用水洗缓冲液冲洗，用洗脱缓冲液洗脱蛋白，得到大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１蛋白。本发明专利技术的方法是一种低廉且产量高的表达组织蛋白酶Ｌ１的方法。本发明专利技术中组织蛋白酶Ｌ１在大肠杆菌中的表达量可达７００ｍｇ／Ｌ，且易于纯化，便于投入实践应用中。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种生产大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１的方法，其特征在于：所述的方法包括如下步骤：　　　　步骤１，根据大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１基因全长ｍＲＮＡ序列去除信号肽序列，设计含ＢａｍＨ　　Ｉ和Ｓａｌ　　Ｉ酶切位点的特异性引物，用ＰＣＲ从大片吸虫成虫ｃＤＮＡ文库中扩增出如ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：１所示的大片吸虫组织蛋白酶Ｌ１基因；步骤２，将组织蛋白酶Ｌ１全长基因连接到一个载体上，形成重组载体，用ＢａｍＨ　　Ｉ和Ｓａｌ　　Ｉ分别酶切重组载体和表达载体，对酶切产物进行纯化，然后用连接酶进行连接，形成重组质粒，将重组质粒转化入大肠杆菌中进行增殖，ＰＣＲ鉴定正确后，测序确认；　　　　步骤３，取鉴定正确的重组质粒转化大肠杆...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何国声，郭敏，徐梅倩，高兴春，曹杰，朱顺海，黄燕，赵其平，李家诚，庞程，米荣升，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]