切口酶扩增靶核酸序列的方法及用于扩增靶核酸序列的试剂盒及其应用技术

本发明专利技术公开了利用切口酶恒温扩增靶核酸序列的方法，其包括以下步骤：ａ）使扩增引物与核酸靶分子杂交；ｂ）用ＤＮＡ聚合酶合成双链核酸；ｃ）所述切口酶识别特异性核酸序列，在其中一条核酸链上切割形成一个切口；ｄ）ＤＮＡ聚合酶以切口为起点，以未被切断的另一条核酸链为模板，合成新的双链核酸，并将旧链剥离以作为下一轮核酸合成的模板，同时在新合成的双链核酸上恢复切口酶识别位点；和ｅ）重复进行切割、延伸和剥离的步骤，以扩增出靶核酸序列。本发明专利技术还公开了利用海藻糖提高切口酶反应温度使其能够与热稳定ＤＮＡ聚合酶配合使用的方法。本发明专利技术还公开了用于扩增靶核酸序列的试剂盒及试剂盒在检测传染病病原体中的用途。利用本发明专利技术可制成操作简单，低成本，便携式的仪器，从而普及核酸诊断试剂。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
利用切口酶扩增靶核酸序列的方法，其包括以下步骤：ａ）使扩增引物与核酸靶分子杂交，其中所述引物的尾部带有一段特异性切口酶的识别序列；ｂ）用ＤＮＡ聚合酶合成双链核酸；ｃ）所述切口酶识别特异性核酸序列，在其中一条核酸链上切 割形成一个切口，暴露其３’末端；ｄ）ＤＮＡ聚合酶以切口为起点，以未被切断的另一条核酸链为模板，合成新的双链核酸，并将旧链剥离以作为下一轮核酸合成的模板，同时在新合成的双链核酸上恢复切口酶识别位点；ｅ）重复进行切割、延伸和剥离 的步骤，以扩增出靶核酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：尤其敏，胡林，汪净，钟华燕，
申请(专利权)人：杭州优思达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]