用于扩增人的葡糖激酶基因的多重PCR引物制造技术

本发明专利技术提供了一种引物集，尤其用于扩增人的葡糖激酶基因靶序列的引物集，它包括至少一组引物或其引物变体，每组引物通过起始于序列３而终止于序列２４的两种连续序列来鉴定。使用本发明专利技术的引物进行多重ＰＣＲ，可以以高特异性、高速、高灵敏度和低花费扩增出人的葡糖激酶基因的靶序列，所述基因是与青春晚期糖尿病（ＭＯＤＹ）２相关的基因。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于扩增人的葡糖激酶基因的引物集，更具体地，本专利技术涉及通过多重PCR扩增人类葡糖激酶基因中的靶DNA序列的引物集。
技术介绍
人类基因组由大约3×109个核苷酸组成，因此很难分离并分析特定的人类基因。PCR技术就是为扩增特定序列而开发的。通过利用一组引物，包括与靶序列的两个末端互补的引物，PCR能以较高的速度、特异性和敏感性扩增靶序列(Saiki等，Science 239487，1988)。PCR广泛用于分析疾病相关基因。特别是，通过PCR进行的基因扩增可用于分析医学领域中疾病相关基因的遗传变异。特定的疾病相关基因通过PCR扩增，并通过测序、杂交或单链构象多态性进行分析。当本文中提到基因的遗传变异时，是指核苷酸序列中的改变，包括核苷酸序列的缺失、加入或倒位。特别是，基因的遗传变异包括单核苷酸多态性。在分析基因的遗传变异时，如果靶基因较小，可能单次PCR就足以扩增整个基因。但是，如果靶基因较大，例如，为1kb或更大时，单次PCR可能就不足以扩增完整基因。因此，需要在完整基因的多个部位进行多次独立的PCR，以便扩增出完整基因。在分析疾病相关基因的遗传变异时，更经常使用的是多次PCR(multiple PCR)，而不是单次PCR，因为绝大多数疾病相关基因为1.5kb或更大。但是，多次PCR需要大量样品，例如，病人的DNA或血液。另外，多重PCR的成本较高，且耗费更多的时间和精力。目前已经开发出一种多重PCR(multiplex PCR)以解决上述问题。多重PCR在一次反应中就能同时扩增一个基因的多个靶序列。因此，利用能扩增每种靶序列的引物集，就可通过单次PCR扩增多个靶序列。用于多重PCR的一组引物应该能特异性结合靶序列，并且不应相互干扰，从而扩增足够量的靶序列。利用这样一组引物通过多重PCR扩增靶序列，比单次PCR节省时间、精力和成本。特别是，利用DNA芯片分析基因的遗传变异时，多重PCR可在一个反应中扩增一种以上的DNA样品。已知人类葡糖激酶基因的变异(包括点突变)，可以导致青春晚期糖尿病(MODY)2(Matschinsky & Magnuson，在‘Molecular Pathogenesis ofMODYs’中，Karger，1998；美国专利5,541,060；WO9321343)。MODY 2是MODY病(MODY 1，2，3，4和5)的一种，在所有类型的II型糖尿病中，占大约10-30％。因此，通过分析人类葡糖激酶基因的遗传变异，有可能预见患糖尿病的倾向。因此，为了利用诸如DNA芯片等快速分析人的葡糖激酶基因，需要开发一组用于通过多重PCR扩增人类葡糖激酶基因的引物。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是，提供一组能通过多重PCR扩增人类葡糖激酶基因的靶序列的引物。本专利技术另一目的是，提供一种利用引物组对人类葡糖激酶基因能进行测序的方法。本专利技术还有一个目的是，提供一种用于扩增靶序列的试剂盒。本专利技术提供了一种用于扩增人类葡糖激酶基因的靶序列的引物集(primer pool)，它包括至少一组由序列3(SEQ ID NO.3)至序列24(SEQ IDNO.24)鉴定的、用于扩增人类葡糖激酶基因的靶序列的引物，以及它们的变体，这些引物选自(a)一组选自可被序列3(SEQ ID NO.3)和4(SEQ ID NO.4)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(b)一组选自可被序列5(SEQ ID NO.5)和6(SEQ ID NO.6)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补； (c)一组选自可被序列7(SEQ ID NO.7)和8(SEQ ID NO.8)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(d)一组选自可被序列9(SEQ ID NO.9)和10(SEQ ID NO.10)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(e)一组选自可被序列11(SEQ ID NO.11)和12(SEQ ID NO.12)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(f)一组选自可被序列13(SEQ ID NO.13)和14(SEQ ID NO.14)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(g)一组选自可被序列15(SEQ ID NO.15)和16(SEQ ID NO.16)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(h)一组选自可被序列17(SEQ ID NO.17)和18(SEQ ID NO.18)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(i)一组选自可被序列19(SEQ ID NO.19)和20(SEQ ID NO.20)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；(j)一组选自可被序列21(SEQ ID NO.21)和22(SEQ ID NO.22)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补；以及(k)一组选自可被序列23(SEQ ID NO.23)和24(SEQ ID NO.24)鉴定的引物组的引物，或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达3个核苷酸与模板互补。本专利技术提供了一种扩增人的葡糖激酶基因的靶序列的方法，包括利用本专利技术所述的引物集对人的葡糖激酶基因的靶序列进行PCR。本专利技术还提供了一种用于扩增人类葡糖激酶基因的靶序列的试剂盒，其包含本专利技术所述的引物集。附图说明图1的照片显示，人类葡糖激酶基因的外显子1-10，经过单次PCR和多重PCR所得产物的电泳结果。图2显示，利用能扩增外显子9的一组引物，经过单次PCR获得的产物的核苷酸序列比较，其中所述外显子9具有人类葡糖激酶基因的已知核苷酸序列。图3a和3b的照片显示，用一组引物变体经过多重PCR获得的产物的电泳结果。图4的照片显示，利用用于扩增每种外显子的每组引物作为探针，经过单次PCR和多重PCR获得的产物的Southern印迹结果。图5a和5b显示多重PCR产物的核苷酸序列的比较，所述多重PCR产物具有相应区域的已知核苷酸序列。具体实施例方式在开发用于经多重PCR扩增人类葡糖激酶基因的引物集时，考虑以下因素引物集的引物应当能结合人类葡糖激酶基因的靶序列，并且应本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于扩增人类葡糖激酶基因的靶序列的引物集，其包括至少一组选自下组的引物：（ａ）一组选自可被序列３和４鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板 互补；（ｂ）一组选自可被序列５和６鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｃ）一组选自可被序列７和８鉴定的引物组的引物，和／或这组引 物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｄ）一组选自可被序列９和１０鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其 中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｅ）一组选自可被序列１１和１２鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｆ）一组选自可被序列１ ３和１４鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｇ）一组选自可被序列１５和１６鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引 物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｈ）一组选自可被序列１７和１８鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷 酸与模板互补；（ｉ）一组选自可被序列１９和２０鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；（ｊ）一组选自可被序列２１和２２鉴定的引物组的引 物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补；以及（ｋ）一组选自可被序列２３和２４鉴定的引物组的引物，和／或这组引物的变体，所述变体在所述引物的至少一个末端具有 加入部分或缺失部分，其中所述部分有多达３个核苷酸与模板互补。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：金美卿，李娟受，李贞男，
申请(专利权)人：三星电子株式会社，
类型：发明
国别省市：KR[韩国]