产毒素B艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法技术

本发明专利技术涉及一种产毒素Ｂ艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法。其中的试剂包括环介导等温扩增反应液、Ｂｓｔ　ＤＮＡ聚合酶、显色剂；反应液含有反应缓冲液、ｄＮＴＰ、硫酸镁、上游内引物５－ＡＧＧＡＧＡＡＧＣＡＡＴＴＧＡＴＴＴＴＡＣＴＧＧＡ－ＴＡＣＡＧＣＴＣＣＴＣＴＡＴＡＡＴＴＡＴＣＴＴＣＡ－３、下游内引物５－ＡＡＧＴＧＴＡＴＴＡＧＣＴＧＧＧＧＣＡＡＡＡＴＡＴ－ＴＡＴＴＴＣＡＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＧＴＧＴ－３、上游外引物５－ＴＴＣＡＣＣＡＴＣＴＡＡＴＴＣＴＴＴＣＣＡＴＴＣ－３、下游外引物５－ＣＡＡＴＴＧＧＡＧＡＧＡＣＡＡＴＡＡＴＴＧＡＴＧ－３和甜菜碱；检测产毒素Ｂ艰难梭菌的方法包括细菌ＤＮＡ的提取、产毒素Ｂ　艰难梭菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术进行菌样的快速检测的方 法，具体是一种产毒素B艰难梭菌环介导等温扩增快速检测方法。技术背景艰难梭菌(Clostridium difficile)是梭菌属的一个成员，二十世纪九十年代以 来成为最重要的医院感染的病原之一。艰难梭菌属厌氧性细菌，就是指那些在无 氧条件下要比在有氧环境中生长好的细菌，而人的肠道正好是一个相对无氧的环 境。艰难梭菌广泛分布于自然生境中，如土壤、干草、沙、 一些大型动物(牛、 驴和马)的粪便，及狗、猫、啮齿动物和人的粪便，婴儿的粪便中常含有艰难梭 菌，大约50%12月龄婴儿的肠道中有艰难梭菌，2岁以上儿童的带菌率大约为3%， 但此菌在健康成人中出现频率较低，无症状带菌的成人在瑞典是1.9%，在日本为 15.4%。艰难梭菌芽孢菌的细菌平时寄生在人类肠道中，如果过量服用抗生素致 使菌群增长速度过快，就会引发严重的炎症。 一份报告以加拿大魁北克地区举例， 12家医院中1703名病人的病历都显示这种病菌具有高致命性。近期的研究表明，艰 难梭菌是肠道感染中第二位常见致病菌,仅次于弯曲菌属，易引起以发热、腹痛、 水样本文档来自技高网...

【技术保护点】
环介导等温扩增检测产毒素Ｂ艰难梭菌的试剂，其特征是该试剂包括（１）－（４）：　（１）环介导等温扩增反应液：　包括１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液、１．０－１．４ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ、４－８ｍｍｏｌ／Ｌ硫酸镁（ＭｇＳＯ４）、 ０．８－１．６μｍｏｌ／Ｌ上游引内物（ＦＩＰ）、０．８－１．６μｍｏｌ／Ｌ下游内引物（ＢＩＰ）、０．２－０．３μｍｏｌ／Ｌ上游外引物（Ｆ３）、０．２－０．３μｍｏｌ／Ｌ下游外引物（Ｂ３）和１－１．５ｍｏｌ／Ｌ甜菜碱；其中１０×Ｔｈｅｒｍｏｐｏｌ反应缓冲液含有２００ｍｍｏｌ／Ｌ　ｐＨ８．８的三羟基甲基氨基甲烷－盐酸、１００ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾、１０...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：雷质文，贺楠，马维兴，祝素珍，张健，姜英辉，李正义，房保海，唐静，贾俊涛，刘云国，赵丽青，
申请(专利权)人：山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，
类型：发明
国别省市：95[中国|青岛]