含艰难梭菌类毒素A和B的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及包括艰难梭菌毒素和/或类毒素的组合物及相应方法。本发明专利技术的组合物包括一种或多种增加所述毒素的稳定性和/或减少所述毒素聚集的赋形剂。

【技术实现步骤摘要】
本申请为分案申请，原申请的申请日为2008年9月15日，申请号为200880116603.0(PCT/US2008/010767)，专利技术名称为“艰难梭菌类毒素A和B的药物组合物”。专利
本专利技术涉及包括艰难梭菌(Clostridium difficile)类毒素的组合物及相应方法。专利技术背景艰难梭菌(C.difficile)类毒素A和B是造成艰难梭菌相关性疾病(CDAD)的原因，该疾病表现为院内感染腹泻和假膜性结肠炎(Kuijper et al.,Clinical Microbiology and Infection 12(Suppl.6):2-18,2006；Drudy et al.,International Journal of Infectious Diseases 11(1):5-10,2007；Warny et al.,Lancet 366(9491):1079-1084,2005；Dove et al.,Infection and Immunity 58(2):480-488,1990；Barroso et al.,Nucleic Acids Research 18(13):4004,1990)。用甲醛处理毒素得到相应的完全灭活并保留至少部分免疫原性的类毒素A和B(Torres et al.,Infection and Immunity 63(12):4619-4627,1995)。已经证实，采用两种类毒素接种疫苗对仓鼠、健康成人和复发CDAD患者是有效的(Torres et al.,Infection and Immunity 63(12):4619-4627,1995；Kotloff et al.,Infection and Immunity 69(2):988-995,2001；Sougioultzis et al.,Gastroenterology 128(3):764-770,2005；Torres et al.,Vaccine Research 5(3):149-162,1996)。此外，施用游离的和铝盐(佐剂)结合的类毒素引起适当的免疫应答(Torres et al.,Vaccine Research 5(3):149-162,1996；Giannasca et al.,Infection and Immunity 67(2):527-538,1999)。同时施用两种类毒素比仅施用单个蛋白更有效(Kim et al.,Infection and Immunity 55(12):2984-2992,1987)。因此所述A和B都是疫苗开发的候选物。其构象完整性的改善和/或其聚集倾向的减少对得到最佳保存稳定性是可取的。专利技术概述本专利技术提供组合物，例如药物组合物(如疫苗组合物)，其包括艰难梭菌的毒素或类毒素(例如艰难梭菌毒素A和/或B的类毒素；和类毒素A和B以如5:1至1:5，例如3:2(A:B)比率存在)，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂，相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述赋形剂减少或延迟所述毒素和/或类毒素聚集，和/或增加所述毒素或类毒素的热稳定性。在一个实施例中，相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂减少或延迟所述毒素和/或类毒素聚集50％或更多。在另一实施例中，相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂增加所述毒素和/或类毒素的热稳定性0.5℃或更多。任选地，本专利技术的组合物可包括佐剂(例如铝化合物，例如氢氧化铝、磷酸铝或磷酸羟铝化合物)。所述组合物可以是液体形式，冻干、喷雾干燥或泡沫干燥的干粉形式。所述一种或多种药学上可接受的赋形剂可以是，例如选自缓冲剂、张度剂、简单糖、糖、糖聚合物、氨基酸、寡肽、聚氨基酸、多元醇及其醚、洗涤剂、脂质、表面活性剂、抗氧化剂、盐、人血清白蛋白、明胶、甲醛或其组合。在各种实施例中，(i)所述缓冲剂选自浓度5-100mM的柠檬酸盐、磷酸盐、甘氨酸、组氨酸、碳酸盐和重碳酸盐；(ii)所述张度剂是浓度1-50mM的甘露醇；(iii)所述糖选自浓度1-30％的山梨醇、海藻糖和蔗糖；(iv)所述氨基酸、寡肽或聚氨基酸浓度最高达100mM；(v)所述多元醇选自甘油、聚乙二醇及其分子量200-10,000的醚，浓度最高达20％；(vi)所述洗涤剂和脂质选自浓度最高达0.5％的脱氧胆酸钠、吐温20、吐温80和普朗尼克；(vii)所述糖聚合物选自葡聚糖和纤维素；(viii)所述盐选自最高达150mM的氯化钠、氯化钾、氯化镁和醋酸镁；以及(ix)0.001-0.02％的甲醛。这样的赋形剂的具体例子包括列于表1、表2、表8或表9中的赋形剂。在其它实施例中，所述组合物包括柠檬酸钠或柠檬酸钾，和/或磷酸钠或磷酸钾，任选地和蔗糖和/或甲醛相组合。因此，在各种实施例中，所述组合物包括艰难梭菌类毒素A和B，5-100mM(例如10-30mM，或20mM)柠檬酸钠或柠檬酸钾(或磷酸盐)，2-20％(例如2-10％或5％)蔗糖，和≤0.020％(例如0.016％)甲醛，pH 5.5-8.5(例如6.5-8.0或7.5)。在其它实施例中，采用山梨醇、右旋糖和/或吐温80的组合。本专利技术还提供制备包括艰难梭菌毒素或类毒素，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物的方法，相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂减少或延迟所述毒素和/或类毒素的聚集，和/或增加所述毒素或类毒素的热稳定性。这些方法包括提供艰难梭菌的毒素或类毒素，并将所述艰难梭菌的毒素或类毒素与一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如本文所述的赋形剂相混合。如本文所述，所述组合物可以以液体形式或冻干保存。本专利技术进一步提供诱导受试者对艰难梭菌免疫应答的方法，其包括将本文所述的组合物施用于所述受试者。在一个实施例中，所述患者尚未患有，但有罹患艰难梭菌疾病的风险，在另一实施例中，所述患者患有艰难梭菌疾病。此外，本专利技术包括本专利技术的所述组合物在诱导受试者对艰难梭菌免疫应答，或在制备用于此目的的制剂中的用途。本专利技术有一些优势。例如本文所述赋形剂的使用可导致增加的艰难梭菌类毒素A和B的物理稳定性，和/或降低或延迟的聚集，这对包括所述类毒素的药物(例如疫苗)的制备是重要的。进一步地，使用本专利技术所述的比率(例如3:2,A:B)，并在施用前(而非在保存疫苗的配置中)加入佐剂，可导致增加的免疫原性。本专利技术的其它特点和优势由以下详细说明、附图和权利要求是显而易见的。附图简述图1.存在20％海藻糖(□)、20％蔗糖(■)、10％山梨醇(○)、10％右旋糖(●)、20％甘油(Δ)、0.05％吐温80(▲)、0.1％普朗尼克F68(◇)时，对类毒素A(x)结构稳定性的溶质效应研究。(a)208nm的CD信号；(c)ANS发射强度；(d)ANS发射峰位置；和(b)DSC热分析图。热示踪代表2次测量的均值，这里每个数据点有小于0.5的标准误差。图2.存在20％海藻糖(□)、20％蔗糖(■)、10％山梨醇(○)、10％右旋糖(●)、20％甘油(Δ)、0.05本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含艰难梭菌的毒素或类毒素，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，其中相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂增加所述毒素或类毒素的热稳定性，和/或减少或延迟所述毒素和/或类毒素的聚集。

【技术特征摘要】
2007.09.14 US 60/9724961.包含艰难梭菌的毒素或类毒素，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，其中相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂增加所述毒素或类毒素的热稳定性，和/或减少或延迟所述毒素和/或类毒素的聚集。2.权利要求1所述的方法，其中相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂减少或延迟所述毒素或类毒素的聚集50％或更多。3.权利要求1所述的方法，其中相对于没有所述一种或多种药学上可接受的赋形剂的组合物，所述一种或多种药学上可接受的赋形剂增加所述毒素或类毒素的所述热稳定性0.5℃或更多。4.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含艰难梭菌毒素A和B的类毒素。5.权利要求4所述的组合物，其中所述类毒素A和B在所述组合物中出现的比率为5:1(A:B)至1:5(A:B)。6.权利要求5所述的组合物，其中所述类毒素A和B在所述组合物中出现的比率为3:1至3:2，或1:1(A:B)。7.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是药物组合物。8.权利要求1所述的组合物，其进一步包含佐剂。9.权利要求8所述的组合物，其中所述佐剂包含铝化合物。10.权利要求9所述的组合物，其中所述铝化合物是氢氧化铝化合物。11.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是液体形式。12.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物是冻干、喷雾干燥或泡沫干燥的干粉形式。13.权利要求1所述的组合物，其中所述一种或多种药学上可接受的赋形剂选自缓冲剂、张度剂、简单糖、糖、糖聚合物、氨基酸、寡肽、聚氨基酸、多元醇及其醚、洗涤剂、脂质、表面活性剂、抗氧化剂、盐、白蛋白、明胶、甲醛或其组合。14.权利要求13所述的组合物，其中所述缓冲剂选自柠檬酸盐、磷酸盐、甘氨酸、组氨酸、碳酸盐和重碳酸盐，并且浓度为5-100mM。15.权利要求13所述的组合物，其中所述张度剂是甘露醇，浓度为1-50mM。16.权利要求13所述的组合物，其中所述糖选自山梨醇、海藻糖和蔗糖，浓度为1-30％。17.权利要求13所述的组合物，其中所述氨基酸、寡肽或聚氨基酸浓度最高达100mM。18.权利要求13所述的组合物，其中所述多元醇选自甘油、聚乙二醇及其醚，分子量200-10,000，浓度最高达20％。19.权利要求13所述的组合物，其中所述洗涤剂和脂质选自脱氧胆酸钠、吐温20、吐温80和普朗尼克，浓度最高达0.5％。20.权利要求13所述的组合物，其中所述糖聚合物选自右旋糖酐和纤维素。21.权利要求13所述的组合物，其中所述盐选自氯化钠、氯化钾、氯化镁和醋酸镁，最高达150mM。22.权利要求13所述的组合物，其中所述甲醛的存...

【专利技术属性】
技术研发人员：CR米道夫，R法尔纳，P恰拉梅塔罗，
申请(专利权)人：赛诺菲巴斯德生物制剂有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US