本发明专利技术涉及重组艰难梭菌毒素A(TcdA)和毒素B(TcdB)以及二元毒素A(CDTa)蛋白，其包含相对于天然毒素序列的特别限定的大幅减少或消除毒性的突变。本发明专利技术还涉及包含这些重组毒素，以及这些毒素与二元毒素B(CDTb)的组合的疫苗和免疫原性组合物，其能够提供针对艰难梭菌感染和/或其效应的保护。本发明专利技术还涉及诱导针对艰难梭菌的免疫应答的方法，其包括给患者施用本文描述的疫苗和免疫原性组合物。本发明专利技术还包含在重组表达系统中表达重组艰难梭菌毒素A和毒素B以及CDTa突变体和CDTb的方法。在示例性实施方案中，在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中表达TcdA、TcdB和CDTa突变型毒素，其包含足够突变以大幅减少或消除毒性。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含重组毒素的针对艰难梭菌的疫苗专利
本专利技术涉及使用选自来自艰难梭菌(Clostridiumdifficile)的毒素A(TcdA)、毒素B(TcdB)和二元毒素(CDTa和CDTb)蛋白的至少一种重组毒素蛋白以及与另外免疫原的组合，诱导针对艰难梭菌的免疫应答的方法。本专利技术还涉及包含单独或与一种或多种另外的免疫原例如TcdA和TcdB组合的CDTa和/或CDTb蛋白的免疫原性组合物，特别是艰难梭菌疫苗，其能够诱导保护性免疫应答。相关申请的交叉引用本申请要求于2012年1月27日提交的美国临时申请号61/591,631、于2012年2月8日提交的美国临时申请号61/596,419、和于2012年9月20日提交的美国临时申请号61/703,754的权益，所述美国专利申请的内容在此整体通过引用并入本文。对电子提交的序列表的提及本申请的序列表经作为具有文件名“23192-PCT-SEQLIST-25JAN2013.TXT”的ASCII格式的序列表由EFS-Web电子提交，所述序列表具有2013年1月25日的创建日期和632KB的大小。EFS-Web提交的这个序列表是说明书的部分并整体通过引用并入本文。专利技术背景梭菌属(Clostridium)是厌氧革兰氏阳性产孢子细菌属，其牵涉土壤和哺乳动物胃肠道的厌氧区室中的有机物质的分解和降解。为了影响其功能，许多梭菌属物种编码并表达靶向活物质的多种组分的降解酶。这些酶中的一些已进化出高度有效的毒素和细胞毒素。这些毒素的表达可以将一些梭菌属物种变成机会致病菌，包括破伤风梭菌(Clostridiumtetani)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)和艰难梭菌，其分别引起破伤风、肉毒中毒、气性坏疽和抗生素相关性结肠炎。艰难梭菌感染(CDI)是在工业化国家中最常见的医院内感染之一，由于由一种或多种抗菌剂引起的正常结肠菌群的破坏，通常在经历抗生素治疗的住院患者中流行。在美国每年估计有500,000个CDI病例(Campbell等人，InfectControlHospEpidemiol，30(6):526-33(2009)；Rupnik等人，NatureReviews，7:527-36(2009))。在美国报道的艰难梭菌病例数目已上升，如从2001年到2005年具有CDI出院诊断的住院治疗率增加92%所指出的。几乎所有抗生素包括克林霉素、头孢菌素、青霉素和氟喹诺酮均已与由产毒艰难梭菌引起的症状性病相关(Bartlett，J.G.，ClinInfectDis.46(10):1489-92(2008)；Gorbach，S.L.，NEnglJMed，341(22):1690-1(1999)；Kelly等人，NEnglJMed330(4):257-62(1994))。艰难梭菌相关疾病(CDAD)包括抗生素相关性腹泻、结肠炎和假膜性结肠炎，并且在一些情况下，可以进展至中毒性巨结肠、败血症和死亡。为此，CDI是重大健康护理事件。尽管患有CDAD的一些患者响应抗生素治疗的停止，但大多数需要用进一步试剂例如甲硝唑或万古霉素的治疗(在DuPont等人，CurrentOpinioninInfectiousDiseases21:500-507(2008)中综述)。现有治疗通常未能消除CDAD或导致复发性疾病，因此需要新的预防或治疗性处理的方法。经过过去十年，严重或致命性感染的增加、护理标准治疗失败、毒力更高的流行株(NAP1/027/BI)的出现、增加的社区获得性感染和复发性感染的发病率(估计为~15-25%)已促成关于CDI的治疗和/或预防性处理的增加必要性(Aslam等人，Lancet,365(9469):1464(2005)；Loo等人，NEnglJMed,365(18):1693-703(2006)；McDonald等人，NEnglJMed,353(23):2433-41(2005)；Muto，C.A.,InfectControlHospEpidemiol,26(1):10-2(2005)；Pépin等人，Cmaj,.171(5):466-72(2004)；Zar等人，ClinInfectDis，45(3):302-7.(2007))。几项研究近期已提出社区获得性CDI的发病率已增加(MMWRMorbMortalWklyRep,57(13):340-3(2008)；Hirschhorn等人，JInfectDis,.169(1):127-33(1994)；Karlstrom等人，ClinInfectDis,26(1):141-5(1998)；Kyne等人，JInfect,36(3):287-8(1998)；Lambert等人，InfectControlHospEpidemiol,30(10):945-51(2009)；Noren等人，JClinMicrobiol,42(8):第3635-43页(2004)；Paltansing等人，ClinMicrobiolInfect，13(11):1058-64(2007)。产毒的艰难梭菌分离物通常编码称为毒素A和毒素B(“TcdA”和“TcdB”)的两种大的梭菌毒素，由于其罕见的大分子量(>250kDa)和作用机制，它们是称为大梭菌毒素(LCT)的较大毒素家族的部分(Schirmer和Aktories，BiochimicaetBiophysicaActa1673:66-74(2004))。另外的产毒株仅表达毒素B且不表达毒素A。TcdA和TcdB已证实是CDI的唯一致病因子。艰难梭菌株亚组还产生肌动蛋白-ADP-核糖基化毒素，称为艰难梭菌转移酶或CDT。通常称为二元毒素的这种毒素特别与毒力高的流行株例如NAP1/027/BI相关，并且由两种蛋白CDTa和CDTb组成。CDTb亚单位形成七聚环状结构，其允许酶促活性的CDTa蛋白进入细胞质内。CDTa蛋白催化G-肌动蛋白在精氨酸177处的ADP-核糖基化，并且阻止肌动蛋白聚合(Barth，H.,等人，Binarybacterialtoxins:biochemistry,biology,andapplicationsofcommonClostridiumandBacillusproteins.MicrobiolMolBiolRev，68(3):373-402(2004))。二元毒素在艰难梭菌疾病的发病机制中的精确作用定义不明；然而，这些毒素已显示作为肠毒素发挥作用(Geric，B.,等人，JournalofInfectiousDiseases193(8):1143-1150(2006))，以诱导微管形成并从而增加艰难梭菌定殖(Schwan，C.等人，PLoSPathog,5(10):e1000626(2009))，并且最近已将其与和含非二元毒素的毒株相比较增加的死亡率相关联(Bacci等人，Emerg.Infect.Dis.,17(6):976-82(2011)；GoldenbergSD,JournalofInfection,62:355-62(2011))。艰难梭菌疫苗开发的几种方法在文献中描述，包括用本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种重组艰难梭菌毒素A (TcdA)蛋白，其包含选自下述的至少4个突变：W101A、D287A、E514Q、D285A、S517A、W519A和C700A。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.27 US 61/591,631;2012.02.08 US 61/596,419;1.一种重组CDTa蛋白，其是重组二元毒素蛋白A，其通过引入选自下组的突变从SEQIDNO:59的氨基酸序列所示的野生型CDTa蛋白获得：(a)S345F、E385Q和E387Q；(b)R302A、E385A和E387D；(c)C2A、S345F、E385Q和E387Q；(d)R302A、S345F、E385Q和E387Q；(e)Y67A、Y69A和R255A；(f)R359A、Y67A和Q307E；(g)Y258A、F356A、S345F；以及(h)N342A、Y253A和Y382A。2.权利要求1的CDTa蛋白，其中所述CDTa蛋白如SEQIDNO:40、SEQIDNO:42或SEQIDNO:67的氨基酸序列所示。3.一种免疫原性组合物，其包含权利要求1-2中任一项...
【专利技术属性】
技术研发人员：JH海恩里希斯，JL博默，SL塞科尔，AR格尔克，I卡罗亚圭拉，MP金泰尔，MS霍尔顿，MR米翟夫斯基，JM斯金纳，PJA森德梅耶，S苏布拉马尼安，KHAvd海登利夫肯斯，S王，J谢，RF埃克索科诺斯特尔，JK佐尔曼，
申请(专利权)人：默沙东公司，英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。