测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法技术

本发明专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法，所述方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC‑PACK ODS‑AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为294nm，柱温为35℃，流动相A相为10～50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为72:28，运行时间为10min。利用该方法，可简便、准确、灵敏地、专属性地测定利格列汀原料药中利格列汀的含量，从而有效控制利格列汀原料药的药效、质量和药用安全。

A method for the determination of the content of leglipine in Leigh Glenn Dean's raw materials

The invention provides a method for determination of linagliptin Leigh Glenn Dean in raw materials, the method includes: analysis methods to analyze the linagliptin API by HPLC, in order to obtain the chromatogram; and the chromatography based on graph, determine the content, the raw materials in Li Li Gletin sitagliptin wherein the HPLC using the following conditions: column YMC PACK ODS AM, 4.6 * 250mm, 5 micron, DAD as the detector, the detection wavelength was 294nm, the column temperature is 35 DEG C, the flow of A phase is 10 ~ 50mmol/L two potassium hydrogen phosphate buffer. The potassium dihydrogen phosphate buffer solution pH 3 ~ 5, the mobile phase B phase of acetonitrile, the flow rate was 1.0mL/min, elution by isocratic elution, the elution volume of A phase and B phase ratio is 72:28, the running time is 10min. This method can be used to determine the content of ligletine in Leigh Glenn Dean's raw material simply, accurately, sensitively and specifically, so as to control the efficacy, quality and safety of legletine.

【技术实现步骤摘要】
测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法
本专利技术涉及生物医药领域，具体的，本专利技术涉及测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法。
技术介绍
II型糖尿病是由于机体胰岛β细胞分泌胰岛素不足或靶细胞对胰岛素不敏感(胰岛素抵抗)所致，亦称非胰岛素依赖性糖尿病。II型糖尿病多在35～40岁之后发病，占糖尿病患者90％以上。利格列汀(Linagliptin)是一种二肽基肽酶-4(DPP-4)的抑制剂，是一种用于治疗II型糖尿病的有效药。其分子结构为：具有易溶于甲醇，微溶于乙腈，难溶于水的特性。利格列汀原料药中利格列汀的含量为影响利格列汀原料药药效的关键因素，也是评估利格列汀原料药药用安全的关键指标。然而，如何有效测定利格列汀原料药中利格列汀的含量仍有待进一步开发。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出了一种简便、准确、灵敏地检测利格列汀原料药中利格列汀含量的方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法，根据本专利技术的实施例，所述方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为294nm，柱温为35℃，流动相A相为10～50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为72：28，运行时间为10min。利用根据本专利技术实施例的检测方法，可简便、准确、灵敏地、专属性地测定利格列汀原料药中利格列汀的含量，从而有效控制利格列汀原料药的药效、质量和药用安全。根据本专利技术的实施例，上述测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0。专利技术人在实验中发现，磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0，利格列汀主峰与杂质峰存在形态单一，峰分离度好，主峰形尖锐并且可实现主峰保留时间重现的分离效果。根据本专利技术的实施例，所述流动相A相为50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液。专利技术人通过实验发现，流动相A相采用50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，利格列汀的主峰拖尾小、峰形好。根据本专利技术的实施例，所述利格列汀原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为利格列汀原料药的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述供试品溶液，利格列汀原料药的含量为0.2mg，其中，所述磷酸二氢钾-乙腈溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为72：28。利格列汀原料药的进样浓度在0.2mg/mL时，既可保证足够好的检测灵敏度，又可保证利格列汀主峰不因浓度过载而变形、不在UV的线性响应范围内，确保不因浓度过高而导致UV谱变形从而致使纯度因子不合格。根据本专利技术的实施例，所述供试品溶液的用量为10微升。根据本专利技术的实施例，供试品溶液的用量为10微升，可保证对利格列汀含量的测定更加真实、可靠、准确。根据本专利技术的实施例，所述高效液相色谱分析方法采用标准对照溶液，所述标准对照溶液是利格列汀标准品的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述标准对照溶液，利格列汀标准品的质量为0.2mg。依据供试品溶液配制标准对照溶液，从而可以以较高的专属性快速准确测定利格列汀原料药中利格列汀的含量。根据本专利技术的实施例，所述基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量是通过以下公式确定的：其中，WS1为标准对照溶液中利格列汀标准品的质量；AT为供试品溶液中利格列汀主峰峰面积；DT为供试品溶液的稀释倍数；AS1为标准对照溶液中利格列汀主峰峰面积；DS1为标准对照溶液的稀释倍数；WT为供试品溶液中利格列汀原料药的质量；P为利格列汀标准品的纯度；W为利格列汀原料药中水分的含量。根据本专利技术的实施例，采用上述方式确定利格列汀原料药中利格列汀的含量，准确率高，结果更加真实可靠。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法，根据本专利技术的实施例，所述方法包括：(1)色谱条件色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为294nm，柱温为35℃，流动相A相为50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为72:28，运行时间为10min，(2)配制空白溶液A相和B相的体积比为72：28的混合溶液作为所述空白溶液，(3)配制供试品溶液精密称定利格列汀原料药20mg，置100mL容量瓶中，用空白溶液溶解，并做超声处理，稀释至刻度，摇匀，即得所述供试品溶液，(4)配制标准对照溶液精密称定利格列汀标准品20mg，置100mL容量瓶中，用空白溶液溶解，并做超声处理，稀释至刻度，摇匀，即得所述标准对照溶液，(5)将10微升供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到供试品溶液中利格列汀的含量，其中，按以下公式计算供试品溶液中利格列汀的含量，取2次测定结果的平均值作为测定结果：式中，WS1为标准对照溶液中利格列汀标准品质量；AT为供试品溶液中利格列汀主峰峰面积的平均值；DT为供试品溶液的稀释倍数；AS1为供试品溶液前后各2针标准对照溶液中利格列汀主峰峰面积的平均值；DS1为标准对照溶液的稀释倍数；WT为供试品溶液中利格列汀原料药的质量；P为利格列汀标准品的纯度；W为利格列汀原料药中水分的含量；1针标准对照溶液的用量为10微升。利用根据本专利技术实施例的检测方法，可简便、准确、灵敏、专属性地测定利格列汀原料药中利格列汀的含量，从而有效控制利格列汀原料药的药效、质量和药用安全。附图说明图1是根据本专利技术实施例1的利格列汀的HPLC-DAD紫外光谱图；图2是根据本专利技术实施例1的利格列汀原料药在226nm和294nm下的色谱图；图3是根据本专利技术实施例1的利格列汀原料药在pH＝4.010mM磷酸二氢钾缓冲溶液作为流动相和等度洗脱条件下的色谱图；图4是根据本专利技术实施例1的利格列汀原料药在pH＝4.050mM磷酸二氢钾缓冲溶液作为流动相下的色谱图；图5是根据本专利技术实施例2的空白溶液色谱图；图6是根据本专利技术实施例2的标准对照溶液的色谱图；以及图7是根据本专利技术实施例2的供试品溶液色谱图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1在本专利技术实施例中，专利技术人详细介绍了测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法的开发过程。1.1检测波长的确定HPLC-DAD紫外光谱图显示，主峰利格列汀在226nm、294nm有特征吸收峰，结果如图1所示。但在226nm条件下，杂质峰的数量较多，结果如图2本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC‑PACK ODS‑AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为294nm，柱温为35℃，流动相A相为10～50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为72:28，运行时间为10min。

【技术特征摘要】
1.一种测定利格列汀原料药中利格列汀含量的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为294nm，柱温为35℃，流动相A相为10～50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱采用等度洗脱，所述等度洗脱中A相和B相的体积比为72:28，运行时间为10min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相A相为50mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利格列汀原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为利格列汀原料药的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述供试品溶液，利格列汀原料药的含量为0.2mg，其中，所述磷酸二氢钾-乙腈溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为72：28。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的用量为10微升。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱分析方法采用标准对照溶液，所述标准对照溶液是利格列汀标准品的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述标准对照溶液，利格列汀标准品的质量为0.2mg。7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中利格列汀的含量是通过以下公式确定的：其中，WS1为标准对照溶液中利格列汀标准品的质量；AT为供试品溶液中利格...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒伟虎，杨成，刘国柱，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44