测定利格列汀原料药中杂质含量的方法技术

本发明专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中杂质含量的方法，该方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC‑PACK ODS‑AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为226nm，柱温为25℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，运行时间为65min，洗脱梯度为

Determination of the content of impurities in Leigh Glenn Dean's raw materials

The invention provides a method for determination of impurities in raw medicine Leigh Glenn Dean, the method includes: analysis methods to analyze the linagliptin API by HPLC, in order to obtain the chromatogram; and the chromatography based on graph, determine the content, the impurities in raw materials including Leigh Glenn Dean, the the high performance liquid chromatography with the following conditions: column YMC PACK ODS AM, 4.6 * 250mm, 5 micron, DAD as the detector, the detection wavelength was 226nm, the column temperature was 25 degrees Celsius, the mobile phase A phase 10mmol/L potassium dihydrogen phosphate buffer solution, the potassium dihydrogen phosphate buffer solution pH 3 ~ 5 the mobile phase, B phase of acetonitrile, the flow rate of 1.0mL/min, the operation time was 65min, elution gradient

【技术实现步骤摘要】
测定利格列汀原料药中杂质含量的方法
本专利技术涉及生物医药领域，具体的，本专利技术涉及测定利格列汀原料药中杂质含量的方法。
技术介绍
II型糖尿病是由于机体胰岛β细胞分泌胰岛素不足或靶细胞对胰岛素不敏感(胰岛素抵抗)所致，亦称非胰岛素依赖性糖尿病。II型糖尿病多在35～40岁之后发病，占糖尿病患者90％以上。利格列汀(Linagliptin)是一种二肽基肽酶-4(DPP-4)的抑制剂，是一种用于治疗II型糖尿病的有效药。其分子结构为：具有易溶于甲醇，微溶于乙腈，难溶于水的特性。然而，利格列汀原料药生产过程中，会引入合成起始物料、中间体等杂质，而影响利格列汀产品的质量和利格列汀的疗效。如何准确测定利格列汀原料药中杂质的含量，进而有效控制利格列汀产品的质量，成为拭待解决的关键问题。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出了一种简便、准确、灵敏地检测利格列汀原料药中起始物料、中间体等杂质含量的方法。在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中杂质含量的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法包括：通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为226nm，柱温为25℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液(采用0.1％磷酸调节pH)，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱梯度为时间(min)A相(％)B相(％)0802030752540653555257560257560.18020658020运行时间为65min。利用根据本专利技术实施例的检测方法，可简便、准确、灵敏地测定利格列汀原料药中杂质的含量，从而有效控制利格列汀原料药的质量。根据本专利技术的实施例，上述测定利格列汀原料药中杂质含量的方法还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0。专利技术人在实验中发现，磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0，待分离杂质化合物存在形态单一，峰单一、峰形尖锐及可实现杂质峰保留时间重现的分离效果。根据本专利技术的实施例，所述杂质为为合成利格列汀的起始物，为合成利格列汀的中间产物。利用本专利技术实施例的测定利格列汀原料药中杂质含量的方法，利格列汀主峰与上述两种杂质峰分离度好，上述两种杂质峰的分离度好，杂质峰的形态单一，可实现对上述两种杂质峰的有效分离和含量的准确测定。根据本专利技术的实施例，所述利格列汀原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为利格列汀原料药的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述供试溶液，利格列汀原料药的含量为0.2mg，其中，所述磷酸二氢钾-乙腈溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为4：1。专利技术人通过实验发现，利格列汀原料药在上述磷酸二氢钾-乙腈溶液中溶解能力较好，同时，利格列汀原料药的进样浓度在0.2mg/mL时，既可保证足够好的杂质检测灵敏度，又可保证主峰不因浓度过载而变形、不在UV的线性响应范围内，确保不因浓度过高而导致UV谱变形从而致使纯度因子不合格。根据本专利技术的实施例，所述供试品溶液的用量为10微升，对杂质含量的测定更加真实、可靠、准确。根据本专利技术的实施例，所述基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量是通过以下公式确定的：其中，AT表示杂质的峰面积；AS表示对照溶液中主峰峰面积；F表示杂质相对于利格列汀的校正因子；WT表示供试品溶液中利格列汀原料药的质量；WS表示用于配制对照溶液利格列汀原料药的质量；所述对照溶液是利格列汀原料药的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述对照溶液，利格列汀原料药的含量为0.4微克。根据本专利技术的实施例，采用上述方式确定利格列汀原料药中杂质的含量，准确率高，结果更加真实可靠。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种测定利格列汀原料药中杂质含量的方法。根据本专利技术的实施例，所述方法具体包括：(1)色谱条件色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为226nm，柱温为25℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸二氢钾缓冲溶液(采用0.1％磷酸调节pH)，所述磷酸二氢钾的pH为4.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱梯度为时间(min)A相(％)B相(％)0802030752540653555257560257560.18020658020运行时间为65min，(2)配制空白溶液乙腈和A相的体积比为1：4的混合溶液作为所述空白溶液，(3)配制供试品溶液精密称定利格列汀原料药20mg，置100mL容量瓶中，用空白溶液溶解，并做超声处理，稀释至刻度，摇匀，即得所述供试品溶液，(4)配制对照溶液精密移取1mL供试品溶液至50mL容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，得对照储备液；精密移取对照储备溶液5mL至50mL容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度，摇匀，得对照溶液；(5)将10微升供试品溶液注入色谱仪，得到色谱图，根据所述色谱图计算得到供试品溶液中杂质的含量，其中，按以下公式计算供试品溶液中各个单杂的含量，取2次测定结果的平均值作为测定结果：式中，AT表示供试品溶液中各杂质的峰面积；AS表示供试品溶液前后各1针对照溶液中主峰峰面积的平均值；F表示各杂质相对于利格列汀的校正因子；WT表示供试品溶液中利格列汀原料药的质量；WS表示用于配制对照溶液利格列汀原料药的质量；供试品总杂的含量等于所有单质含量的总和，所述1针对照溶液的用量为10微升。利用根据本专利技术实施例的检测方法，可简便、准确、灵敏地测定利格列汀原料药中杂质的含量，从而有效控制利格列汀原料药的质量。附图说明图1是根据本专利技术实施例1的不同pH(2.3～7.0)缓冲液条件下利格列汀原料药的色谱图；图2是根据本专利技术实施例1的不同pH(7.8～10.5)缓冲液条件下利格列汀原料药的色谱图；图3是根据本专利技术实施例2的空白溶液色图谱；图4是根据本专利技术实施例2的灵敏度溶液色谱图；图5是根据本专利技术实施例2的系统适用性溶液色谱图；图6是根据本专利技术实施例2的供试品溶液色谱图；图7是根据本专利技术实施例2的杂质B增敏溶液色图谱；以及图8是根据本专利技术实施例2的对照溶液色谱图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。实施例1在本实施例中，专利技术人详细介绍了测定利格列汀原料药中杂质含量的方法的开发过程。1.1缓冲盐种类及pH值的确定利格列汀含有一伯胺基团，CAD软件预测其共轭酸的pKa高达10.0，碱性较强；利格列汀另含有多个碱性基团，均连有较复杂的基团，酸碱性难以判断。需选择一个合适pH值的缓冲液以确保分离过程中待分离化合物存在形态单一，从而实现峰的单一、峰形的尖锐、及保留时本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定利格列汀原料药中杂质含量的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC‑PACK ODS‑AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为226nm，柱温为25℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱梯度为

【技术特征摘要】
1.一种测定利格列汀原料药中杂质含量的方法，其特征在于，通过高效液相色谱分析方法对所述利格列汀原料药进行分析，以便获得色谱图；以及基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量，其中，所述高效液相色谱采用以下条件：色谱柱为YMC-PACKODS-AM，4.6×250mm，5微米，检测器为DAD，检测波长为226nm，柱温为25℃，流动相A相为10mmol/L的磷酸二氢钾缓冲液，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为3.0～5.0，流动相B相为乙腈，流速为1.0mL/min，洗脱梯度为时间(min)A相(％)B相(％)0802030752540653555257560257560.18020658020运行时间为65min。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸二氢钾缓冲液的pH为4.0。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述杂质为4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利格列汀原料药是以供试品溶液的形式提供的，其中，所述供试品溶液为利格列汀原料药的磷酸二氢钾-乙腈溶液，并且基于每毫升所述供试品溶液，利格列汀原料药的含量为0.2mg，其中，所述磷酸二氢钾-乙腈溶液是所述A相和B相的混合溶液，所述A相和B相的体积比为4：1。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述供试品溶液的用量为10微升。6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述基于所述色谱图，确定所述利格列汀原料药中杂质的含量是通过以下公式确定的：其中，AT表示杂质的峰面积；AS表示对照溶液中主峰峰面积；F表示杂质相对于利格列汀的校正因子；WT表示供试品溶液中利格列汀原料药的质量；WS表示...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒伟虎，杨成，刘国柱，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44