甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，属于医药合成技术领域。所述的制备方法，具体步骤如下：(1)N‑Pht‑甘氨酸的制备；(2)N‑Pht‑甘氨酰氯的制备；(3)N‑Pht‑甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺的制备；(4)甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺的制备。本发明专利技术提供了一种甘氨酰谷氨酰胺原料药中杂质甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺的制备方法，该路线设计合理，操作简单，反应条件温和，原料易得，所得杂质纯度达99％以上，能够作为甘氨酰谷氨酰胺杂质研究的对照品使用，用于杂质的定性定量分析，对甘氨酰谷氨酰胺原料药质量研究有积极意义。

Preparation of glyamyl glutamine impurities

The invention relates to a preparation method of glyyl glutamine impurity, which belongs to the field of pharmaceutical synthesis technology. The preparation method, the specific steps are as follows: (1) N Pht glycine preparation; (2) N Pht Ian ammonia chloride preparation; (3) N Pht glycyl glycyl glutamine L preparation; (4) glycyl glycyl glutamine L preparation. The invention provides a preparation method of impurities in raw medicine of glycyl glutamine glycyl glycyl glutamine L, the route of reasonable design, simple operation, mild reaction conditions, easily obtained raw materials, the impurity purity was more than 99%, can be used as the reference of glycyl glutamine impurities for the study, qualitative and quantitative analysis of impurities, have a positive significance to the research on the quality of the API of glycyl glutamine.

【技术实现步骤摘要】
甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法
本专利技术涉及一种甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，属于医药合成

技术介绍
甘氨酰谷氨酰胺是一种人工合成的二肽类氨基酸，是复方氨基酸双肽注射液中的主要成分之一。甘氨酰谷氨酰胺主要用于提供谷氨酰胺，以促进蛋白质的合成，同时，甘氨酰谷氨酰胺对心血管系统、肠道系统及免疫系统均有一定的保护作用。甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物1)，是甘氨酰谷氨酰胺的工艺杂质，结构如下所示。目前尚无关于甘氨酰甘氨酰-L谷氨酰胺制备方法的报道。由于在甘氨酰谷氨酰胺的生产过程中，甘氨酸与甘氨酰谷氨酰胺发生缩合反应，从而不可避免地生产副产物甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺。对该杂质的研究可用于甘氨酰谷氨酰胺中杂质的定性定量分析，对提高甘氨酰谷氨酰胺的质量标准、进行药理毒理研究具有积极意义。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是提供一种反应温和、操作简单甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，产物纯度高，能够作为对照品用于甘氨酰谷氨酰胺成品的质量研究，完善质量控制。本专利技术所述的甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，反应路线如下本专利技术所述的甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，具体步骤如下：(1)将甘氨酸(化合物2)、苯酐与三乙胺加入到甲苯中，加热回流5～10h，然后降温，加入浓盐酸调节pH值至3～4，降至室温，抽滤，得N-Pht-甘氨酸(化合物3)；(2)将N-Pht-甘氨酸加入到甲苯中，加入二氯亚砜，加热回流反应，反应完毕，蒸除溶剂，采用甲苯重结晶，得N-Pht-甘氨酰氯(化合物4)；(3)向氢氧化钠溶液中加入甲苯，降温，加入甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物5)，滴加N-Pht-甘氨酰氯的甲苯溶液，同时滴加氢氧化钠溶液维持pH值在7～8；滴加完毕，室温搅拌0.5～2h，静置，分液，水相用浓盐酸调节pH值至2～3，继续搅拌析晶0.5～2h，抽滤，得N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物6)；(4)将N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物6)悬浮于甲醇中，在水合肼、三乙胺下反应，然后滴加有机酸的甲醇溶液，抽滤，滤饼用水洗涤，滤液中滴加甲醇，抽滤，得甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺粗品，粗品经水、甲醇精制，得甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物1)。其中：步骤(1)所述的甘氨酸、苯酐与三乙胺的摩尔比为1:1～1.2:0.05～0.2。步骤(2)所述的N-Pht-甘氨酸与二氯亚砜的摩尔比为1:1.2～2。步骤(2)所述的回流反应时间为3～7h。步骤(3)中，向氢氧化钠溶液中加入甲苯，降温，加入甘氨酰-L-谷氨酰胺，滴加N-Pht-甘氨酰氯的甲苯溶液；其中，甘氨酰-L-谷氨酰胺与氢氧化钠溶液中氢氧化钠的摩尔比为1:1～1.5，滴加N-Pht-甘氨酰氯的甲苯溶液过程中温度为-5～10℃。步骤(4)所述的N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺、水合肼、三乙胺的摩尔比为1:1.05～1.1:1.1～1.2。步骤(4)所述的在水合肼、三乙胺下反应，反应温度为40～50℃，反应时间为4～7h。步骤(4)滴加有机酸的甲醇溶液调节pH值至5～6，所述的有机酸为甲酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸、苹果酸、马来酸、富马酸、乳酸、琥珀酸或甲磺酸中的一种或几种。步骤(4)所述的滤饼用水洗涤，滤液中滴加甲醇，水的用量是N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺投料质量的1.5～3倍，水与甲醇的体积比为1:2～6。步骤(4)所述的粗品经水、甲醇精制具体为：将粗品悬浮于水中，升温溶解，经活性炭脱色后，滴加甲醇，抽滤；所述的水的质量是粗品质量的2～3倍，水与甲醇的体积比为1:2～6。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一种甘氨酰谷氨酰胺原料药中杂质甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的制备方法，该路线设计合理，操作简单，反应条件温和，原料易得，所得杂质纯度达99％以上，能够作为甘氨酰谷氨酰胺杂质研究的对照品使用，用于杂质的定性定量分析，对甘氨酰谷氨酰胺原料药质量研究有积极意义。附图说明图1为本专利技术实施例1中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的高分辨质谱图；图2为本专利技术实施例1中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的1H-NMR谱图；图3为本专利技术实施例1中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的高效液相色谱图；图4为本专利技术实施例2中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的高效液相色谱图；图5为本专利技术实施例3中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的高效液相色谱图；图6为本专利技术实施例4中甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明，但不限定本专利技术。实施例中用到的所有原料除特殊说明外，均为市购。实施例1(1)N-Pht-甘氨酸(化合物3)的制备：7.5g甘氨酸、14.8g苯酐和0.4mL的三乙胺加入到50mL的甲苯中，加热回流7h，降至室温，加入浓盐酸调节pH值至3～4，抽滤，水洗，干燥，得白色固体19.6g，即为N-Pht-甘氨酸，收率为96％。(2)N-Pht-甘氨酰氯(化合物4)的制备：12.0g化合物3加入到60mL的甲苯中，搅拌下加入9.0g二氯亚砜，加热回流3h后，减压浓缩至干，甲苯重结晶，真空干燥得11.1g浅黄色晶体，即为N-Pht-甘氨酰氯，收率为85％。(3)N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物6)的制备：1.7g的氢氧化钠溶于20mL的水中，加入10mL甲苯，降温至0℃，加入7.0g甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物5)，滴加8.6g化合物4的甲苯溶液，同时滴加25％的氢氧化钠溶液，滴加过程温度在0±5℃，保持pH值在7～8。滴毕，室温搅拌1h，静置，分液。水相用盐酸调pH值为2～3后，继续搅拌1h，抽滤，干燥，得9.6g白色固体，收率为71％。(4)甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物1)的制备：6.0gN-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物6)悬浮于18mL的甲醇中，升温至45℃，依次滴加1.0g水合肼，1.7g三乙胺，在42±2℃下反应4h，得白色悬浊液。向反应液中滴加琥珀酸的甲醇溶液，调pH值为至5～6，搅拌10min后降至室温，抽滤得滤饼。滤饼用9.0g水洗涤，抽滤，合并滤液，向滤液中缓慢滴加30mL甲醇，0℃搅拌1h，抽滤，干燥得白色固体3.3g，即为甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺粗品，收率83％。将3.0g粗品悬浮于9mL水中，升温至45℃溶解，加0.1g活性炭脱色0.5h，抽滤，向滤液中缓慢滴加27mL甲醇，5±5℃搅拌1h，抽滤，干燥得白色固体2.3g，即为甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰，收率76％，纯度99.3％。1H-NMR(600MHz,D2O,ppm)：4.20(1H,m),4.02(2H,m)，3.90(2H,m)，2.30(2H,m)，2.12,1.94(2H,eachm)。ESI-MS：[M+H]+261.1。实施例2(1)N-Pht-甘氨酸(化合物3)的制备同实施例1。(2)N-Pht-甘氨酰氯(化合物4)的制备：12.0g化合物(3)加入到75mL的甲苯中，搅拌下加入10.4g二氯亚砜，加热回流3h后，减压浓缩至干，甲苯重结晶，真空干燥得11.8g浅黄色晶体，收率为90％。(3)N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺(化合物6)的制备：2.0g的氢氧化钠溶于20mL的水中，加入10mL甲苯，降温至3℃，加入本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)将甘氨酸、苯酐与三乙胺加入到甲苯中，加热回流5～10h，然后降温，加入浓盐酸调节pH值至3～4，降至室温，抽滤，得N‑Pht‑甘氨酸；(2)将N‑Pht‑甘氨酸加入到甲苯中，加入二氯亚砜，加热回流反应，反应完毕，蒸除溶剂，采用甲苯重结晶，得N‑Pht‑甘氨酰氯；(3)向氢氧化钠溶液中加入甲苯，降温，加入甘氨酰‑L‑谷氨酰胺，滴加N‑Pht‑甘氨酰氯的甲苯溶液，同时滴加氢氧化钠溶液维持pH值在7～8；滴加完毕，室温搅拌0.5～2h，静置，分液，水相用浓盐酸调节pH值至2～3后，继续搅拌析晶0.5～2h，抽滤，得N‑Pht‑甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺；(4)将N‑Pht‑甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺悬浮于甲醇中，在水合肼、三乙胺下反应，然后滴加有机酸的甲醇溶液，抽滤，滤饼用水洗涤，滤液中滴加甲醇，抽滤，得甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺粗品，粗品经水、甲醇精制，得甘氨酰甘氨酰‑L‑谷氨酰胺。

【技术特征摘要】
1.一种甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，其特征在于：步骤如下：(1)将甘氨酸、苯酐与三乙胺加入到甲苯中，加热回流5～10h，然后降温，加入浓盐酸调节pH值至3～4，降至室温，抽滤，得N-Pht-甘氨酸；(2)将N-Pht-甘氨酸加入到甲苯中，加入二氯亚砜，加热回流反应，反应完毕，蒸除溶剂，采用甲苯重结晶，得N-Pht-甘氨酰氯；(3)向氢氧化钠溶液中加入甲苯，降温，加入甘氨酰-L-谷氨酰胺，滴加N-Pht-甘氨酰氯的甲苯溶液，同时滴加氢氧化钠溶液维持pH值在7～8；滴加完毕，室温搅拌0.5～2h，静置，分液，水相用浓盐酸调节pH值至2～3后，继续搅拌析晶0.5～2h，抽滤，得N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺；(4)将N-Pht-甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺悬浮于甲醇中，在水合肼、三乙胺下反应，然后滴加有机酸的甲醇溶液，抽滤，滤饼用水洗涤，滤液中滴加甲醇，抽滤，得甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺粗品，粗品经水、甲醇精制，得甘氨酰甘氨酰-L-谷氨酰胺。2.根据权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述的甘氨酸、苯酐与三乙胺的摩尔比为1:1～1.2:0.05～0.2。3.根据权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的N-Pht-甘氨酸与二氯亚砜的摩尔比为1:1.2～2。4.根据权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰胺杂质的制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的回流反应时间为3～7h。5.根据权利要求1所述的甘氨酰谷氨酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：翟民，孟凡领，黄翠苹，张涛，任继波，郑亮，林蒙，于长安，
申请(专利权)人：山东齐都药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37