一种低成本合成GHK醋酸盐的方法技术

本发明专利技术公开了一种低成本合成GHK醋酸盐的方法，该方法先将Trt‑Gly‑OH与N‑羟基琥珀酰亚胺反应生成Trt‑Gly‑OSu，再与H‑His(Trt)‑OH反应生成Trt‑Gly‑His(Trt)‑OH，然后与N‑羟基琥珀酰亚胺反应生成Trt‑Gly‑His(Trt)‑OSu，最后与Lys(Trt)‑OH反应生成Trt‑Gly‑His(Trt)‑Lys(Trt)‑OH，将Trt‑Gly‑His(Trt)‑Lys(Trt)‑OH在醋酸中脱掉保护基团即可生成GHK醋酸盐。本发明专利技术合成方法的保护基团都为三苯甲基，很好的保证了光学纯度，且在醋酸中可以直接脱除保护，避免了三氟乙酸脱保护所产生的副产物，最终制得的GHK醋酸盐无需反向色谱纯化、离子交换色谱除三氟乙酸，极大的降低生产成本，可用于大规模生产。

A low cost method for synthesis of GHK acetate

【技术实现步骤摘要】
一种低成本合成GHK醋酸盐的方法
本专利技术属于多肽合成
，具体涉及一种GHK醋酸盐的合成方法。
技术介绍
GHK三肽为一种含有三个氨基酸的活性多肽，氨基酸序列为H-Gly-His-Lys-OH，经过多年的皮肤抗皱研究，GHK三肽具有组织修复、抗老、除皱等作用，其与铜形成的络合物GHK-Cu在医学上最早用于伤口愈合及增加肌肤弹性。因此被皮肤科及整形外科医师推荐为21世纪最无刺激的抗老除皱产品。申请号为201310751827.1的中国专利技术专利申请公开了一种制备GHK的方法，该方法具体是用Boc保护的甘氨酸、咪唑基团由Boc保护的组氨酸以及乙酰基保护侧链氨基的赖氨酸为原料，合成Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Ac)-OH，然后用三氟乙酸脱掉保护，得到GHK的三氟乙酸盐，最后经反相色谱、离子交换色谱最终生成GHK的醋酸盐。该方法有如下几个缺陷：(1)组氨酸是最容易消旋的氨基酸，在保持光学纯度方面，用Boc保护咪唑基团，不如用三苯甲基保护；(2)用乙酰基保护赖氨酸的侧链氨基，生成的产物Boc-Gly-His(Boc)-Lys(Ac)-OH在用三氟乙酸脱保护时，Boc很容易脱掉，而乙酰基不容易在三氟乙酸中脱掉，需要适当升温以及延长反应时间，导致副产物增多；(3)由于Boc和乙酰基团没有紫外吸收，每步中间体都无法薄层色谱检测，需要液相跟踪检测，导致操作繁琐；(4)最后脱保护后是GHK的三氟乙酸盐，需要经反向色谱纯化，在进一步除三氟乙酸，经过离子交换色谱才能变为醋酸盐，成本太高，无法大量生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的缺陷，提供一种无需反向色谱以及离子交换色谱就可以低成本、大量合成GHK醋酸盐的方法。为达到上述目的，本专利技术所采用的技术方案由下述步骤组成：1、合成Trt-Gly-OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt-Gly-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，生成Trt-Gly-OSu。2、合成Trt-Gly-His(Trt)-OH以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，将Trt-Gly-OSu与His(Trt)-OH、N,N-二异丙基乙胺在室温条件下反应，生成Trt-Gly-His(Trt)-OH。3、合成Trt-Gly-His(Trt)-OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt-Gly-His(Trt)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，得到Trt-Gly-His(Trt)-OSu。4、合成Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH将Trt-Gly-His(Trt)-OSu与Lys(Trt)-OH、碳酸氢钠在四氢呋喃和水中室温反应5～12小时，生成Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH。5、合成GHK醋酸盐将Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH在醋酸和三异丙基硅烷中脱保护，生成GHK醋酸盐。上述步骤1中，优选Trt-Gly-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5，室温反应时间优选3～5小时。上述步骤2中，优选Trt-Gly-OSu与His(Trt)-OH、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为1:1～1.3:1～1.3，室温反应时间优选1～1.5小时。上述步骤3中，优选Trt-Gly-His(Trt)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5，室温反应时间优选3～5小时。上述步骤4中，优选Trt-Gly-His(Trt)-OSu与Lys(Trt)-OH、碳酸氢钠的摩尔比为1:1.1～1.3:2～2.5，室温反应时间优选10～12小时。上述步骤5中，优选Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH、三异丙基硅烷的摩尔比为1:2.5～4，Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH与醋酸的质量体积比为1g:5～10mL，所述脱保护的条件为：室温反应10～15小时。相对于现有技术，本专利技术合成方法具有如下优点：(1)氨基保护基团和咪唑保护基团都用三苯甲基保护，很好的保证了光学纯度，且都是同一基团，因此脱保护时，所用的条件一致。(2)由于三苯甲基基团的存在，所以有很强的紫外吸收，每步反应都可以薄层色谱监控，避免了HPLC监控反应的繁琐性。(3)由于所有基团都用三苯甲基保护，最后在醋酸中可以直接脱除保护，避免了三氟乙酸脱保护所产生的副产物。(4)用醋酸脱三苯甲基保护，最终制得的GHK醋酸盐无需反向色谱纯化、离子交换色谱除三氟乙酸等，极大的降低生产成本，可用于大规模生产。附图说明图1是实施例1合成的GHK醋酸盐的质谱图。图2是实施例1合成的GHK醋酸盐的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合附图和实例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不仅限于这些实例。实施例11、合成Trt-Gly-OSu将31.7g(0.1mol)Trt-Gly-OH与300mL四氢呋喃加入到反应瓶中，室温搅拌溶解清澈，加入13.8g(0.12mol)N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌溶解清澈，再加入30.9g(0.15mol)N,N'-二环己基碳酰亚胺，室温搅拌30分钟后，有大量白色固体析出，继续搅拌3小时，TLC显示原料反应完全，过滤，将滤液在35℃下减压浓缩，得到41.4gTrt-Gly-OSu，产率100％。2、合成Trt-Gly-His(Trt)-OH将41.4g(0.1mol)Trt-Gly-OSu溶解于300mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入39.7g(0.1mol)His(Trt)-OH、12.9g(0.1mol)N,N-二异丙基乙胺，室温搅拌1小时后，TLC显示原料完全反应，将反应液倒入1.5L水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，有大量白色固体析出，搅拌半小时后，过滤，滤饼用1L水反复冲洗后，30～35℃晾干，得到70gTrt-Gly-His(Trt)-OH，产率100％。3、合成Trt-Gly-His(Trt)-OSu将70g(0.1mol)Trt-Gly-His(Trt)-OH加入700mL四氢呋喃中，室温搅拌溶解，加入13.8g(0.12mol)N-羟基琥珀酰亚胺，搅拌溶解清澈，再加入30.9g(0.15mol)N,N'-二环己基碳酰亚胺，室温搅拌30分钟后，有大量白色固体析出，继续搅拌5小时，TLC显示原料完全反应，过滤掉不溶物，得到700mL含0.1molTrt-Gly-His(Trt)-OSu的四氢呋喃溶液。4、合成Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH向700mL含0.1molTrt-Gly-His(Trt)-OSu的四氢呋喃溶液加入38.8g(0.1mol)Lys(Trt)-OH、18.5g(0.22mol)碳酸氢钠、230mL水，室温搅拌12小时后，TLC显示原料完全反应，35℃减压浓缩除去四氢呋喃后，将浓缩液倒入1L水中，用柠檬酸调节pH＝3～4，出现大量白色固体，搅拌30分钟后，过滤，滤饼用1L水反复冲洗后，30～35℃晾干，然后用乙酯重结晶，得到68gTrt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH纯品，产率64％。5、合成GHK醋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种低成本合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)合成Trt‑Gly‑OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt‑Gly‑OH与N‑羟基琥珀酰亚胺、N,N'‑二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，生成Trt‑Gly‑OSu；(2)合成Trt‑Gly‑His(Trt)‑OH以N,N‑二甲基甲酰胺为溶剂，将Trt‑Gly‑OSu与His(Trt)‑OH、N,N‑二异丙基乙胺在室温条件下反应，生成Trt‑Gly‑His(Trt)‑OH；(3)合成Trt‑Gly‑His(Trt)‑OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt‑Gly‑His(Trt)‑OH与N‑羟基琥珀酰亚胺、N,N'‑二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，得到Trt‑Gly‑His(Trt)‑OSu；(4)合成Trt‑Gly‑His(Trt)‑Lys(Trt)‑OH将Trt‑Gly‑His(Trt)‑OSu与Lys(Trt)‑OH、碳酸氢钠在四氢呋喃和水中室温反应5～12小时，生成Trt‑Gly‑His(Trt)‑Lys(Trt)‑OH；(5)合成GHK醋酸盐将Trt‑Gly‑His(Trt)‑Lys(Trt)‑OH在醋酸和三异丙基硅烷中脱保护，生成GHK醋酸盐。...

【技术特征摘要】
1.一种低成本合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于由以下步骤组成：(1)合成Trt-Gly-OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt-Gly-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，生成Trt-Gly-OSu；(2)合成Trt-Gly-His(Trt)-OH以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂，将Trt-Gly-OSu与His(Trt)-OH、N,N-二异丙基乙胺在室温条件下反应，生成Trt-Gly-His(Trt)-OH；(3)合成Trt-Gly-His(Trt)-OSu以四氢呋喃为溶剂，将Trt-Gly-His(Trt)-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺在室温条件下反应，得到Trt-Gly-His(Trt)-OSu；(4)合成Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH将Trt-Gly-His(Trt)-OSu与Lys(Trt)-OH、碳酸氢钠在四氢呋喃和水中室温反应5～12小时，生成Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH；(5)合成GHK醋酸盐将Trt-Gly-His(Trt)-Lys(Trt)-OH在醋酸和三异丙基硅烷中脱保护，生成GHK醋酸盐。2.根据权利要求1所述的低成本合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述Trt-Gly-OH与N-羟基琥珀酰亚胺、N,N'-二环己基碳酰亚胺的摩尔比为1:1.1～1.3:1.3～1.5。3.根据权利要求2所述的低成本合成GHK醋酸盐的方法，其特征在于，在步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：王惠嘉，李晨，陈科，张忠旗，郭添，王慧，杨小琳，赵金礼，
申请(专利权)人：陕西慧康生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：陕西,61