单臂I型和II型受体融合蛋白和其用途制造技术

在某些方面，本公开内容提供了可溶性单臂异聚多肽复合物，其包含TGF‑β家族的I型丝氨酸/苏氨酸激酶受体的细胞外结构域或TGF‑β家族的II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体的细胞外结构域。在一些实施方案中，本公开内容提供了可溶性单臂多肽复合物，其包含选自ActRIIA、ActRIIB、TGFBRII、BMPRII和MISRII的II型受体的细胞外结构域。在一些实施方案中，本公开内容提供了可溶性单臂多肽复合物，其包含选自ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、ALK5、ALK6和ALK7的I型受体的细胞外结构域。任选地，可溶性复合物是异二聚体。在某些方面，这样的可溶性多肽复合物可用于治疗或预防各种TGF‑β相关的病况，包括而不限于与例如，癌症、肌肉、骨、脂肪、红细胞、代谢、纤维化和受TGF‑β超家族的一种或多种配体影响的其它组织有关的疾病和病症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】单臂I型和II型受体融合蛋白和其用途相关申请的交叉引用本申请要求2015年4月6日提交的美国临时申请系列号62/143,579和2015年11月24日提交的62/259,422的优先权。前述申请的公开内容通过引用以其整体结合到本文中。专利技术背景转化生长因子-β(TGF-β)超家族包含各种生长因子，其享有共同的序列元件和结构基序。这些蛋白已知在脊椎动物和无脊椎动物二者中对多种细胞类型发挥生物学作用。超家族的成员在胚胎发育期间在模式形成和组织特化中执行重要的功能，和可影响各种分化过程，包括脂肪生成、肌生成、软骨发生、心脏发生、血细胞生成、神经发生和上皮细胞分化。超家族分成两个概括的系统发生进化枝：更近进化的超家族成员，其包括TGF-β、活化素和nodal，和更远相关的超家族蛋白的进化枝，其包括许多BMP和GDF。Hinck(2012)FEBSLetters586：1860-1870。TGF-β超家族成员具有多样的，通常互补的生物学作用。通过操纵TGF-β超家族的成员的活性，通常有可能引起生物体的显著生理学变化。例如，Piedmontese和BelgianBlue牛品种带有GDF8(亦称为肌抑素)基因的功能丢失突变，其导致肌肉质量显著增加。Grobet等(1997)NatGenet.，17(1)：71-4。此外，在人中，GDF8的失活的等位基因与肌肉质量增加有关，并据报道，与异常的力量有关。Schuelke等(2004)NEnglJMed，350：2682-8。肌肉、骨、脂肪、红细胞和其它组织的变化可通过增强或抑制由TGF-β超家族的配体介导的信号传导(例如，SMAD1、2、3、5和/或8)来实现。因此，对调节TGF-β超家族的各种配体的活性的试剂存在需要。专利技术简述部分地，本公开内容提供了异多聚体复合物，其包含单一TGF-β超家族I型或II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽(例如，ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、ALK5、ALK6、ALK7、ActRIIA、ActRIIB、TGFBRII、BMPRII或MISRII多肽)，包括其片段和变体。这些构建体在本文可被称为“单臂”多肽复合物。任选地，与相应的同二聚体复合物(例如，ActRIIB同二聚体，例如ActRIIB-Fc：ActRIIB-Fc)相比，本文公开的单臂多肽复合物(例如，单臂ActRIIB多肽复合物，例如ActRIIB-Fc：Fc异二聚体)具有不同的配体-结合特异性/特征。包含TGF-β超家族I型或II型丝氨酸/苏氨酸激酶受体多肽的单一结构域的异多聚体多肽复合物显示了新的性质，如本文的实施例所示。异多聚体结构包括例如，异二聚体、异三聚体和更高级的复合物。优选地，本文所述的TGF-β超家族I型和II型受体多肽包含受体的配体-结合结构域，例如TGF-β超家族I型或II型受体的细胞外结构域。因此，在某些方面，本文所述的蛋白复合物包含选自ActRIIA、ActRIIB、TGFBRII、BMPRII和MISRII的II型TGF-β超家族受体的细胞外结构域，以及其截短和变体，或选自ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、ALK5、ALK6和ALK7的I型TGF-β超家族受体的细胞外结构域，以及其截短和变体。优选地，本文所述的TGF-β超家族I型和II型多肽，以及包含其的蛋白复合物，是可溶性的。在某些方面，本公开内容的异多聚体复合物结合一种或多种TGF-β超家族配体(例如，BMP2、BMP2/7、BMP3、BMP4、BMP4/7、BMP5、BMP6、BMP7、BMP8a、BMP8b、BMP9、BMP10、GDF3、GDF5、GDF6/BMP13、GDF7、GDF8、GDF9b/BMP15、GDF11/BMP11、GDF15/MIC1、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、活化素A、活化素B、活化素C、活化素E、活化素AB、活化素AC、活化素AE、活化素BC、活化素BE、nodal、神经胶质细胞衍生的神经营养因子(GDNF)、neurturin、artemin、persephin、Müllerian-抑制物质(MIS)和Lefty)。任选地，本公开内容的蛋白复合物以小于或等于10-8、10-9、10-10、10-11或10-12的KD结合一种或多种这些配体。一般而言，本公开内容的异多聚体复合物拮抗(抑制)至少一种TGF-β超家族配体的一种或多种活性，和这样的活性改变可使用本领域已知的各种测定法测量，包括例如，本文所述的基于细胞的测定法。优选地，本公开内容的蛋白复合物在哺乳动物(例如，小鼠或人)中显示至少4、6、12、24、36、48或72小时的血清半寿期。任选地，本公开内容的蛋白复合物在哺乳动物(例如，小鼠或人)中可显示至少6、8、10、12、14、20、25或30天的血清半寿期。在某些方面，本文所述的蛋白复合物包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽，其中第一多肽包含TGF-β超家族I型或II型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列，和第二多肽包含相互作用对的第二成员和不包含TGF-β超家族I型或II型受体多肽的氨基酸序列。任选地，除了相互作用对的第二成员之外，第二多肽包含另外的多肽序列，其不是TGF-β超家族I型或II型受体多肽和可任选地包含不超过5、10、15、20、30、40、50、100、200、300、400或500个氨基酸。任选地，TGF-β超家族I型或II型受体多肽直接连接至相互作用对的第一成员，或者间插序列，例如接头，可位于TGF-β超家族I型或II型受体多肽的氨基酸序列和相互作用对的第一成员的氨基酸序列之间。接头的实例包括但不限于序列TGGG、TGGGG、SGGGG、GGGGS和GGG。本文所述的相互作用对经设计以促进二聚化或形成更高级多聚体。在一些实施方案中，相互作用对可以是相互作用以形成复合物、特别是异二聚体复合物的任何两个多肽序列，但有效的实施方案也可使用形成同二聚体复合物的相互作用对。相互作用对的第一和第二成员可以是不对称的对，意思是该对的成员优先彼此缔合，而非自缔合。因此，不对称的相互作用对的第一和第二成员可缔合形成异二聚体复合物。或者，相互作用对可以是非引导的，意思是该对的成员可彼此缔合或自缔合，没有实质的偏好，因此可具有相同或不同的氨基酸序列。因此，非引导的相互作用对的第一和第二成员可缔合形成同二聚体复合物或异二聚体复合物。任选地，相互作用对的第一成员(例如，不对称的对或非引导的相互作用对)与相互作用对的第二成员共价缔合。任选地，相互作用对的第一成员(例如，不对称的对或非引导的相互作用对)与相互作用对的第二成员非共价缔合。传统的Fc融合蛋白和抗体是非引导的相互作用对的实例，而各种工程改造的Fc结构域经设计作为不对称的相互作用对。因此，本文所述的相互作用对的第一成员和/或第二成员可包含免疫球蛋白的恒定结构域，包括例如免疫球蛋白的Fc部分。任选地，相互作用对的第一成员可包含源自IgG1、IgG2、IgG3或IgG4免疫球蛋白的Fc结构域的氨基酸序列。例如，相互作用对的第一成员可包含与SEQIDNO：200-214中任一个具有至少80％，85％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，9本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽的蛋白复合物，其中：a. 第一多肽包含相互作用对的第一成员的氨基酸序列和TGFβ超家族I型或II型受体多肽的氨基酸序列，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽选自：ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、ALK5、ALK6、ALK7、ActRIIA、ActRIIB、TGFBRII、BMPRII和MISRII多肽；和b. 第二多肽包含相互作用对的第二成员的氨基酸序列，和其中第二多肽不包含TGFβ超家族I型或II型受体多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.06 US 62/143579;2015.11.24 US 62/2594221.包含与第二多肽共价或非共价缔合的第一多肽的蛋白复合物，其中：a.第一多肽包含相互作用对的第一成员的氨基酸序列和TGFβ超家族I型或II型受体多肽的氨基酸序列，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽选自：ALK1、ALK2、ALK3、ALK4、ALK5、ALK6、ALK7、ActRIIA、ActRIIB、TGFBRII、BMPRII和MISRII多肽；和b.第二多肽包含相互作用对的第二成员的氨基酸序列，和其中第二多肽不包含TGFβ超家族I型或II型受体多肽。2.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ActRIIA多肽。3.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ActRIIB多肽。4.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是BMPRII多肽。5.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是TGFBRII多肽。6.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是MISRII多肽。7.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK1多肽。8.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK2多肽。9.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK3多肽。10.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK4多肽。11.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK5多肽。12.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK6多肽。13.权利要求1的蛋白复合物，其中TGFβ超家族I型或II型受体多肽是ALK7多肽。14.权利要求2的蛋白复合物，其中ActRIIA多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:9,10和11中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:9的氨基酸21,22,23,24,25,26,27,28,29或30的任一个开始和以SEQIDNO:9的氨基酸110,111,112,113,114,115,116,117,118,119,120,121,122,123,124,125,126,127,128,129,130,131,132,133,134或135的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。15.权利要求3的蛋白复合物，其中ActRIIB多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:1,2,3,4,5和6中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:1的氨基酸20,21,22,23,24,25,26,27,28,或29的任一个开始和以SEQIDNO:1的氨基酸109,110,111,112,113,114,115,116,117,118,119,120,121,122,123,124,125,126,127,128,129,130,131,132,133,或134的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。16.权利要求4的蛋白复合物，其中BMPRII多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:46,47,71,和72中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNo:46或71的任一个的氨基酸27,28,29,30,31,32,33,和34的任一个开始和以SEQIDNo:46或71的任一个的氨基酸123,124,125,126,127,128,129,130,131,132,133,134,135,136,137,138,139,140,141,142,143,144,145,146,147,148,149,和150的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。17.权利要求5的蛋白复合物，其中TGFBRII多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:42,43,67,和68中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:42的氨基酸23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50或51的任一个开始和以SEQIDNO:42的氨基酸143,144,145,146,147,148,149,150,151,152,153,154,155,156,157,158,159,160,161,162,163,164,165或166的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或c.与以SEQIDNO:67的氨基酸23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43或44的任一个开始和以SEQIDNO:67的氨基酸163,164,165,166,167,168,169,170,171,172,173,174,175,176,177,178,179,180,181,182,183,184,185,186,187,188,189,190或191的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。18.权利要求6的蛋白复合物，其中MISRII多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:50,51,75,76,79,和80中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以下多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性：a)以SEQIDNo:50,75,或79的任一个的氨基酸17,18,19,20,21,22,23,和24的任一个开始和以SEQIDNo:50,75,或79的任一个的氨基酸116,117,118,119,120,121,122123,124,125,126,127,128,129,130,131,132,133,134,135,136,137,138,139,140,141,142,143,144,145,146,147,148,和149的任一个结束。19.权利要求7的蛋白复合物，其中ALK1多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:14和15中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:14的氨基酸22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,和34的任一个开始和以SEQIDNO:14的氨基酸95,96,97,98,99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,111,112,113,114,115,116,117,和118的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。20.权利要求8的蛋白复合物，其中ALK2多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:18和19中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:18的氨基酸21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,和35的任一个开始和以SEQIDNO:18的氨基酸99,100,101,102,103,104,105,106,107,108,109,110,111,112,113,114,115,116,117,118,119,120,121,122,和123的任一个结束的多肽具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性。21.权利要求9的蛋白复合物，其中ALK3多肽包含以下氨基酸序列，由其组成，或基本上由其组成：a.与SEQIDNo:22和23中任一个的序列具有至少70%,80%,85%,90%,95%,97%,98%,99%或100%同一性；或b.与以SEQIDNO:22的氨基酸24,25,26,27,28,29,30,31,32,33,34,35,36,37,38,39,40,41,42,43,44,45,46,47,48,49,50,51,52,53,5...

【专利技术属性】
技术研发人员：R库马，A格林伯格，DS萨科，
申请(专利权)人：阿塞勒隆制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US