微生物数测定方法及微生物实验用培养基技术

本发明专利技术涉及微生物数测定方法及供给于该测定方法的微生物实验用培养基。其目的是，即使检体中含有影响测定的成分也可以减小该影响。为了实现上述目的采用如下的步骤。准备含有钴酞菁四羧酸的稀释液（步骤１０１）。使用稀释液对检体进行消化处理，同时稀释至规定的浓度，从而调制检体液（步骤１０２）。借此，虽然包含在检体中的硫化物向稀释液扩散，但会被钴酞菁四羧酸吸附，丧失其静菌作用。接着，通过氧电极法进行细菌数的测定：首先，向生理盐水等液体培养基中添加检体液（步骤１０３），再将其注入到在内侧具有氧电极的测定用单元中（步骤１０４）。将该测定用单元安装在测定装置上后，开始测定细菌数（步骤１０５）。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及微生物数测定方法及供该测定方法的微生物实验用培养基。
技术介绍
为了实现例如食品的卫生管理，要求测定食品中含有的微生物数。作为测定食品等检体中所含有的微生物数的方法，已知有氧电极法(DOX溶解氧电极法)(例如专利文献1、2)。通过氧电极法进行的微生物数的测定，按照以下步骤实施。首先，将食品材料等检体添加到稀释液中(例如生理盐水等)，稀释至规定的浓度，从而调制检体液。此时，也可以进行所谓的消化(stomaching)处理，即将检体与稀释液一起粉碎、混合。这样，包含在检体中的微生物被萃取到检体液中。将调制的检体液添加到规定的液体培养基中，并注入到测定用单元内。该测定用单元安装在测定装置上。测定用单元在内侧具有氧电极。氧电极将液体培养基中的溶解氧浓度转换成电信号。测定装置测定由氧电极输出的电信号，并基于该电信号求出包含在液体培养基中的溶解氧浓度。该电信号通常采用氧电极输出的电流。并且，溶解氧浓度越高，该电流值越大。液体培养基中的溶解氧浓度因微生物的代谢例如呼吸而发生变化。因而，来自氧电极的输出电流由于微生物的代谢而发生变化。例如，图10中表示了采用细菌作为微生物针对不同液体培养基对应于测定时间的流失而测定的来自氧电极的输出电流的结果，所述液体培养基中添加有初期菌数105、104、103、102、101CFU/ml及“没有初期细菌”的检体液。测定开始时的电流值与初期细菌数没有关系，均相等。随着的时间的流失，由于液体培养基中细菌的代谢而消耗氧，电流值会降低。此时，电流值减少至接近零的规定阈值Ith或Ith以下所需的时间根据初期菌数而不同。即，初期菌数越多，所需时间越短。这是由于，液体培养基中的细菌数多，相应地氧的消耗量也多，从而溶解氧浓度会迅速地降低。因此，对应于测定时间的流失测定氧电极输出的电流并求出输出电流减少至规定阈值Ith或Ith以下所需的时间，从而基于例如标准曲线，可以算出包含在液体培养基中的细菌等微生物的个体数。标准曲线由例如图10中所示的结果，即已知的初期菌数及与之对应的规定时间可以求出。如上所述，对于氧电极法，初期菌数越多则可以越快地得到测定结果，即输出电流减少至规定阈值Ith或Ith以下所需的时间。具体来说，在初期菌数为105CFU/ml或其以上的情况测定的所需时间约为4小时或4小时以下。另一方面，例如对于以往的琼脂培养法，需要在培养基中进行12～48小时左右的细菌培养。因此，氧电极法是可以用非常短的时间进行微生物数测定的方法。另外，琼脂培养法需要测定者以目视计数在培养基中生成的细菌的菌落数，但是氧电极法通过监控电信号就可以测定。因此，采用氧电极法容易实现测定的自动化、测定结果的数据基础化、测定系统的网络化。进而，氧电极法具有的优点还有通过测定自动化，可以排除测定结果因每个测定者的个人差异，不需要测定者学会专门的技术。另外，与本专利技术相关的技术表示如下。专利文献1特开2000-287699号公报专利文献2特开2001-252066号公报非专利文献青木智，《影响茶叶单离细胞的活性及稳定性的多酚吸附剂的效果》，茶叶技术研究，1980年，第58号，p.42-44
技术实现思路
测定微生物数时，检体中含有烯丙基硫或蒜素(包含在葱类中)这样的硫化物、儿茶素(包含在绿茶等中)这样的多酚等。另外，有时也含有乙酸、柠檬酸、抗坏血酸等。硫化物会抑制作为微生物的细菌的增殖或者代谢。如果像这样的抑制细菌的增殖或者代谢的成分包含在检体中，则会影响细菌数的测定。这样的影响对于以往的琼脂培养法也是问题，但是特别是对于氧电极法等快速测定法的情况，其成为严重问题。其理由如下。在琼脂培养法中，检体液和培养基以1∶20左右的比例混合。另一方面，在氧电极法等中，一般地检体液和培养基以1∶1左右的比例混合。因此，包含在氧电极法中使用的检体中的成分对测定的影响与琼脂培养法相比约为10倍左右。并且，对于通过琼脂培养法的细菌数测定，细菌的培养至少需要24～48小时。因此，即使在检体液中含有抑制细菌的增殖或者代谢的成分，在培养过程中该成分由于挥发等而失活，对测定结果的影响小。另一方面，对于通过氧电极法的细菌数测定，细菌的培养时间(测定时间)比较短，因而多数情况是在该成分失活前测定就结束。从而，该成分对测定结果的影响大。另外，对于通过氧电极法等快速测定法及琼脂培养法的细菌数测定的任意一种情况，如果检体中含有抑制细菌增殖或者代谢的成分，都会导致测定时间的长期化。特别是，对于通过氧电极法的细菌数测定，由于具有包含在培养基中的细菌数越多则可以越快地得到测定结果的特点，检体中含有抑制细菌增殖或者代谢的成分时，测定时间的长期化显著。在通过氧电极法等快速测定法的细菌数测定中，硫化物会进一步降低来自电极的输出电流，从而影响测定。多酚也会降低该输出电流。具体来说，对于氧电极法的情况，输出电流与测定开始时的培养基中的溶解氧量无关，自测定开始来自氧电极的输出电流就立刻开始降低。有时甚至直接达到阈值Ith。因而，针对含有硫化物、多酚等成分的检体通过氧电极法进行细菌数测定时，从测定开始时直到输出电流达到阈值Ith所需时间有时与初期菌数无关，并且该时间大致是一定的。对于这样的状况，由该所需时间算出液体培养基中的初期菌数是困难的。本专利技术是为了解决上述的课题而进行的，其目的是，即使是检体中含有影响测定的成分的情况也可以减小该影响。本专利技术的第1方案涉及的微生物数测定方法，其是测定包含在检体中的微生物的个体数的微生物数测定方法，包括步骤(a)，向培养基中添加所述检体；步骤(b)，求出在所述步骤(a)中添加的所述检体中所包含的所述微生物数；所述检体含有具有抑制所述微生物增殖或者代谢作用的成分，在实行所述步骤(b)时的所述培养基中含有吸附所述成分的吸附剂。根据本专利技术的第1方案涉及的微生物数测定方法，由于具有抑制包含在检体中的微生物的增殖或者代谢作用的成分被吸附剂所吸附，因而该成分对步骤(b)的影响减小。具体来说，可以防止由于微生物的增殖或者代谢被抑制而使测定时间长期化，或者避免不能算出初期微生物数。本专利技术的第2方案涉及的微生物数测定方法，其是第1方案所述的微生物数测定方法，其中，在所述步骤(b)中，测定所述培养基中对应其中的含氧量而流通的电流，从而求出所述微生物数。根据本专利技术的第2方案涉及的微生物数测定方法，由于培养基中的含氧量随着微生物的代谢而变动，因而可以适用于第1方案涉及的微生物数测定方法。本专利技术的第3方案涉及的微生物数测定方法，其是第1方案所述的微生物数测定方法，其中，在所述步骤(a)中，所述检体被含有所述吸附剂的稀释液稀释后再添加到所述培养基中。根据本专利技术的第3方案涉及的微生物数测定方法，由于抑制包含在检体中的微生物的增殖或者代谢的成分被稀释液中含有的吸附剂所吸附，因而可以避免抑制微生物的增殖或者代谢。本专利技术的第4方案涉及的微生物数测定方法，其是第3方案所述的微生物数测定方法，其中，在所述步骤(b)中，测定所述培养基中对应其中的含氧量而流通的电流，从而求出所述微生物数。根据本专利技术的第4方案涉及的微生物数测定方法，由于培养基中的含氧量随着微生物的代谢而变动，因而可以适用于第3方案涉及的微生物数测定方法。本专利技术的第5方案涉及的微生物数测定方法，其是第1本文档来自技高网...

【技术保护点】
微生物数测定方法，其是测定包含在检体中的微生物的个体数的微生物数测定方法，包括：步骤（ａ），向培养基中添加所述检体；步骤（ｂ），求出在所述步骤（ａ）中添加的所述检体中所包含的所述微生物数；所述检体含有具有抑制所述微生物增殖或者代谢作用的成分，在实行所述步骤（ｂ）时的所述培养基中含有吸附所述成分的吸附剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：福井直树，赤松惠，
申请(专利权)人：大金工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]