一种有效芽孢杆菌数量的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种微生物数量检测方法，具体地说是涉及微生物肥料有效芽孢杆菌数量的检测方法。该方法的特点是将检测样品进行简便易行的物理方法处理后；再按照常规方法吸取并进行涂皿，２～３天后平板上长出可见的菌落，再进行常规的菌落计数和计算，获得该样品中纯芽孢萌发形成的菌数。本发明专利技术提供的检测方法适用于采用有效芽孢杆菌生产的微生物肥料及其它微生物商品肥料的产品质量检测使用。还可以进一步了解到产品中“芽孢”与营养体的比例，使其在产品出厂时的检测结果更加符合产品在有效期内的实际有效菌数，有利于指导生产，保证产品质量。与现有的方法相比，本发明专利技术提供的检测方法简便，准确易行。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种微生物数量检测方法，具体地说是涉及。
技术介绍
微生物肥料(菌剂)是一种新型的农业生产资料，已在我国推广并展现出美好的应用前景。为了稳定微生物肥料的应用效果，必须首先保证微生物肥料的产品质量。微生物肥料中有效微生物的活菌数量，是产品的质量核心。因此有效微生物活菌数量检测方法的准确性，对指导生产、保证产品质量有着非常重要的意义。为此，我国农业部已经制定和颁发了以有效微生物的活菌数量为核心的产品质量标准“微生物肥料行业标准(NY-227-94)”，并对其相关的质量检测方法作了具体规定。其中关于有效微生物数量的检测，选用了常规的微生物平板计数法，以产品中有效微生物在规定条件下，所形成的菌落数量作为计数的标准，以样品中含有的有效活菌数量亿个(菌落形成单位)/克(毫升)来表示。当前，在微生物肥料产品中，有效微生物数量的稳定性(出厂检验至产品规定的有效期)是一个直接影响产品质量和应用效果的问题。由于大多数种类的微生物菌体，不能耐受高温和干燥的影响，因此在产品中经过一段时间就会丧失生活能力。即使选用具有抗高温、抗干燥的芽孢杆菌，也因为生产工艺不同，在大生产条件下，真正形成芽孢的数量和比例也存在很大差异。而现在在检测微生物肥料生产及产品中的芽孢杆菌时，使用常规的微生物稀释平板测定法进行检测，虽然可以相对准确的测出样品中的有效微生物活菌的总数，但却无法区分出不同菌体形态所形成的菌数，即无法分辨出菌落是由性状稳定的芽孢萌发而形成的，还是由性状不稳定的营养体直接生长形成的。所以，使用现有方法难以测出产品中具有稳定性的有效微生物数量，给评价产品的真正质量带来困难。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有检测方法的结果，不能反映出产品中有效活菌的真实数量，不能准确评价产品的真正质量的缺陷，从而在现有通用检测方法NY-227-94的基础上，根据芽孢杆菌的生物学特性，提供一种用于微生物肥料的有效芽孢杆菌数量的检测方法。本专利技术的目的是通过如下的技术方案实现的本专利技术提供的微生物肥料产品中有效芽孢杆菌数量的检测方法，包括如下的步骤1)按照微生物肥料行业标准NY-227-94的规定，进行产品的取样、称量、稀释、塗皿、培养、计数和计算；2)将上述样品的稀释液装入三角瓶或试管中，置于80～90℃恒温水浴中进行高温处理10～20分钟；3)同时，采用与步骤2)中相同的三角瓶或试管，加入与步骤2)中的稀释样品同体积的蒸馏水，作为温度处理的参照标准液，置于同一个水浴槽中，在80～90℃中进行高温处理10～20分钟；4)取出经高温处理的样品稀释液，按照常规方法吸取并进行塗皿，然后放入30℃温箱中进行培养；5)2～3天后平板上长出可见的菌落，取出进行常规的菌落计数和计算，获得该样品中纯芽孢萌发形成的菌数。本专利技术提供的检测方法适用于采用有效芽孢杆菌生产的微生物肥料及其它微生物商品肥料的产品质量检测使用。还可以进一步了解到产品中“芽孢”与营养体的比例，使其在产品出厂时的检测结果更加符合产品在有效期内的实际有效菌数，有利于指导生产，保证产品质量。本专利技术提供的有效芽孢杆菌数量的检测方法，是在现有通用检测方法的基础上，根据微生物及“芽孢”杆菌的生物学特点，而设计、应用的可以直接检测出样品中成熟芽孢和其它营养细胞所形成菌落数量的检测方法。该方法通过高温处理，不仅可以打破产品中成熟芽孢的休眠，使之很快萌发形成菌落(不经加温处理，即有部分芽孢，因为处于休眠，不能立即萌发，不能形成菌落而无法计入)；还可以杀死样品中未能形成芽孢的菌体，使之提前死亡，避免了因为营养体形成菌落而计入活菌总数，干扰检测结果。做到早期鉴别，“去伪存真”，使出厂时的检测结果能够更加符合产品在有效使用期内的实际活菌数量。以此结果作为产品的出厂检测数据更为准确，更加符合真实情况，更加有利于保证产品的质量。而且，与现有的方法相比，本专利技术提供的检测方法简便，准确易行，适用于所有采用芽孢杆菌生产的微生物肥料产品及微生物肥料产品的商品检测。具体实施例方式从同一批巨大芽孢杆菌(磷细菌)的液体产品中相同的取样2份，其中的1份按照农业部颁发的“微生物肥料行业标准NY-227-94”规定的常规方法，进行检测培养基的制备和平板的制作，以及样品的取样、称量、稀释、塗皿、培养、计数和计算，获得样品的有效菌总数，结果列于表1。另一份样品使用本专利技术提供的方法，进行有效芽孢杆菌数量的检测，具体步骤如下1)同样按照农业部颁发的“微生物肥料行业标准NY-227-94”规定的常规方法，进行检测培养基的制备和平板的制作，以及样品的取样、称量、稀释、塗皿、培养、计数和计算；2)将上述样品稀释液装入三角瓶或试管中，置于80℃恒温水浴中进行高温处理10分钟；3)同时，采用与步骤2)中相同的三角瓶或试管，加入与步骤2)中的稀释样品同体积的蒸馏水，同时置于同一个水浴槽中，作为温度处理的参照标准液，在80℃中进行高温处理10分钟；4)将经高温处理的样品稀释液，按照步骤1)相同的方法进行塗皿，然后放入30℃温箱中进行培养；5)2～3天后平板上长出可见的菌落，取出进行常规的菌落计数和计算，则可获得该样品中纯芽孢萌发所形成的有效活菌数，结果列于表1。表1、2种方法的检测结果 由表1所列的结果可以看出1、由于产品中含有大量营养体和少量芽孢，因此在产品出厂时采用常规检测方法，测得了较高数量的菌数。但是同一产品经室温保存6个月后，再采用常规方法检测，则由于产品中大量营养体死亡，导致活菌数量大幅度下降。此时的检测结果仅为出厂检测结果的19％。数量大幅度下降，结果表明常规方法虽然可以相对准确地测出产品中的活菌总数，但对于活菌制剂及其商品肥料的检测，则有很大的误差和局限性，不能真正反映出活菌制剂在有效期内的活菌数量，会给产品的质量保证和应用带来麻烦，造成混乱。2、采用本专利技术所检测的结果，由于采用了高温处理，提早杀死了产品中的营养体，因此出厂时的检测结果与产品保存6个月后的检测数据基本一致，表明该项方法测定的结果更符合实际情况。3、根据微生物肥料商品的要求及芽孢杆菌的生物特性，采用本专利技术的检测方法，可以排除样品内在的干扰，测定结果更加符合实际情况，更为准确，更有得于保证产品的质量和应用效果。权利要求1.，包括如下的步骤1)按照微生物肥料行业标准NY-227-94的规定，进行产品的取样、称量、稀释、塗皿、培养、计数和计算；2)将上述样品的稀释液装入三角瓶或试管中，置于恒温水浴中进行高温处理10～20分钟；3)同时，采用与步骤2)中相同的三角瓶或试管，加入与步骤2)中的稀释样品同体积的蒸馏水，作为温度处理的参照标准液，置于同一个水浴槽中进行高温处理10～20分钟；4)取出经高温处理的样品稀释液，按照常规方法吸取并进行塗皿，然后放入温箱中进行培养；5)2～3天后平板上长出可见的菌落，取出进行常规的菌落计数和计算，获得该样品中纯芽孢萌发形成的菌数，则可代表该样品的有效活菌数量。2.如权利要求1所述的有效芽孢杆菌数量的检测方法，其特征在于所述步骤2)的恒温水浴的温度为80～90℃。3.如权利要求1所述的有效芽孢杆菌数量的检测方法，其特征在于所述步骤3)的恒温水浴的温度为80～90℃。4.如权利要求1所述的有效芽孢杆菌数量的检测方法，其特征在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种有效芽孢杆菌数量的检测方法，包括如下的步骤：　　　　１）按照微生物肥料行业标准ＮＹ－２２７－９４的规定，进行产品的取样、称量、稀释、塗皿、培养、计数和计算；　　　　２）将上述样品的稀释液装入三角瓶或试管中，置于恒温水浴中进行高温处理１０～２０分钟；　　　　３）同时，采用与步骤２）中相同的三角瓶或试管，加入与步骤２）中的稀释样品同体积的蒸馏水，作为温度处理的参照标准液，置于同一个水浴槽中进行高温处理１０～２０分钟；　　　　４）取出经高温处理的样品稀释液，按照常规方法吸取并进行塗皿，然后放入温箱中进行培养；　　　　５）２～３天后平板上长出可见的菌落，取出进行常规的菌落计数和计算，获得该样品中纯芽孢萌发形成的菌数，则可代表该样品的有效活菌数量。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：高昭远，
申请(专利权)人：北京丹路生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]