生产人参皂甙-Rd的一种方法技术

本发明专利技术涉及一种有利于工业上制备人参皂甙－Ｒｄ（人参皂甙的一种）的方法．按照本发明专利技术的方法，能以高产率、高纯度并很容易地生产出人参皂甙－Ｒｄ．所制得的人参皂甙－Ｒｄ可用做止痛剂、镇静剂、改善代谢或改善心血管系统的药剂．（*该技术在2006年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及到一种便于工业上制备人参皂甙-Rd(人参皂甙中的一种)的方法。近年来对人参(例如人参Panax ginseng C.A.Meyer的根)的成分进行了广泛的研究，并已分离出作为人参有效成分的不同类型的人参皂甙。在这些人参皂甙中，人参皂甙-Rd(以下可称它为化合物〔Ⅰ〕)和人参皂甙-Rb1(以下称可它为化合物〔Ⅱ〕)属于人参的主要有效成份。对它们的药理作用已经做了阐明，现在已经知道这两种人参皂甙-Rd和-Rb1，在它们所具有的许多种活性之中，在实用的药理活性，例如止痛活性、镇静活性、改善代谢的活性、或改善心血管系统的活性。已经表明人参皂-Rd的药理活性比人参皂甙-Rb1的药理活性要强得多。但是，在人参(例如人参Panax ginseng C.A.Meyer的根)中人参皂甙-Rd的含量很少，以致从植物中抽提它远不是工业上有利的制法。此外，人参是非常昂贵的。因此需要发展一种产率高，纯度好，并简单易行的制取人参皂甙-Rd的方法。近来有报告从绞骨蓝(Gynostemma pentaphyllum Makino)中，与人参皂甙-Rb1一起提取出人参皂甙-Rd，绞骨蓝是一种多年生的藤本植物，天然生长于亚洲各地，〔日本药学杂志(Yakugaku zasshi)，103，第173页(1983)〕;日本公布的未审查专利申请号No.56-12739(12739/1981)。但是，绞骨蓝中主要的皂甙不是人参皂甙-Rd，而是gypenoside V。人参皂甙-Rd，人参皂甙-Rb1和gypenoside V(以下可称它为化合物〔Ⅲ〕)都可用下面的结构式表示，它们的化学名称如下。 从上述结构式中可看出，在人参皂甙-Rd、人参皂甙-Rb1、和gypenoside V中的化学结构式上只有取代基R有区别，因此本专利技术者们认为人参皂甙-Rd可以从人参皂甙-Rb1或gype-noside V用化学方法衍生。更具体地说，认为R-O键的选择性断裂，即在人参皂甙-Rb120-位上的龙胆二糖基部分的末端β-D-葡糖苷键或是gypenoside V 20-位上的芸香糖基部分的α-L-鼠李糖苷键断裂将会产生人参皂甙-Rd。但是，在人参皂甙-Rb1或gypenoside V中，除R-O部分外还有三个对水解敏感的糖苷键，仅选择性地水解这一R-O部分是困难的。例如，当在不同的酸性条件下将人参皂甙-Rb1或gypenoside V进行水解时， 并不能得到人参皂甙-Rd。本专利技术者们对于比酸水解有更高选择性的水解反应进行了深入的研究，用一种特异性酶的酶反应从人参皂甙-Rb1和/或gype-noside V有效地生产人参皂甙-Rd获得成功，于是完成了本专利技术。这就是说，本专利技术涉及到生产人参皂甙-Rd的工艺过程，它包括鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶对gypenoside V和/或人参皂甙-Rb1的作用。更具体地说，按照本专利技术的工艺，人参皂甙-Rd是以鼠李糖甙酶对gypenoside V作用，或葡糖甙酶对人参皂甙-Rb1作用而生产出来的。作为本专利技术的方法的起始原料(底物)的gypenoside V和人参皂甙-Rb1，可以分别将其分离出来，或者以其混合物形式分离出来。从工业观点出发，最好是使用含有gypenoside V，人参皂甙-Rb1和人参皂甙-Rd的绞骨蓝提取物，或是含有人参皂甙-Rb1和人参皂甙-Rd的人参根的提取物做为原料(底物)。按照本专利技术的方法将gypenoside V或/和人参皂甙-Rb1转变成人参皂甙-Re，但在原料中的人参皂甙-Rd不改变。诚然，用绞骨蓝提取物做为原料(底物)是最有利的，因为绞骨蓝可以很便宜地买到，而人参却很贵。将绞骨蓝提取物或人参根的提取物做为底物按照本专利技术的方法进行酶解可以提供一种富集人参皂甙-Rd的提取物。将这样提取出来的物质再进行普通的分离和/或纯化处理，例如层析，重结晶等，很快就得到高纯度的人参皂甙-Rd。与从绞骨蓝或人参根中抽提、分离和/或纯化人参皂甙-Rd的普通方法相比，本专利技术的方法提供的人参皂甙-Rd产量大，纯度高，并且容易得多。在本专利技术中所使用的酶是鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶。鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶是用培育微生物的方法生产的，这种微生物能够在液体培养基中产生鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶，并累积鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶。这些微生物的例子中包括真菌和酵母。用这些酶来水解人参皂甙-Rb1的葡糖苷键和/或gypenoside V的鼠李糖苷键。具体来说，是鼠李糖苷酶水解gypenoside V上的α-L-鼠李糖苷键，葡糖苷酶水解人参皂甙-Rb120-位的龙胆二糖基部分的末端β-D-葡糖苷键。因此，在本专利技术中所使用的鼠李糖苷酶可以是对gypenoside V有活性的任何一种酶，在本专利技术中所使用的葡糖苷酶可以是能水解人参皂甙-Rb1末端β-D-葡糖苷键的任何一种酶。这两种酶可以单独纯化后使用，也可以用它们的混合物。当用gypenoside V或绞骨蓝提取物做底物时，可使用鼠李糖苷酶或使用鼠李糖苷酶和葡糖苷酶的混合物，当用人参皂甙-Rb1或人参根的提取物做底物时，可使用葡糖苷酶或使用葡糖苷酶和鼠李糖苷酶的混合物。但是，要得到纯的酶一般需要大量的劳动和花费。在本专利技术中，这两种酶甚至在粗制品状态也可使用，只要它们含有的鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶具有足够满足本专利技术需要的活性。此外，也可以使用含有具有适合于本专利技术所需活性的鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶的液体培养基。从工业观点出发，使用绞骨蓝提取物做为底物，和用粗酶或液体培养基做为酶，是生产人参皂甙-Rd最为有利的方法。本专利技术的酶解作用一般在pH值从大约4到7和温度从大约40到65℃的条件下进行的。做为适用于本专利技术效用的粗酶，商业上可买到的粗酶制剂都可使用，例如“可溶性桔皮苷酶”(由日本Tanabe Seiyaku公司生产)。这种“可溶性桔皮苷酶”是一种粗酶，除含有对gypenoside V有活性的鼠李糖苷酶外，还含有葡糖苷酶。例如，当把“可溶性桔皮苷酶”加到gypenoside V上或加至绞骨蓝的水提取液中时，将混合物保持在pH值从大约6.8到7(最好在缓冲溶液中)，温度从大约50到60℃的条件下，则可以很高的产率产生人参皂甙-Rd。当缓冲溶液使用普通常用的缓冲溶液，如邻苯二甲酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液等时，“可溶性桔皮苷酶”是一种特别适用于将gypenoside V转变为人参皂甙-Rd的酶。适合于本专利技术效用的液体培养基可以这样来制备，即将属于真菌类(例如真菌、酵母)的某些菌株放在含有L-鼠李糖或一种含有α-L-鼠李糖苷键的物质(做为碳源)的培养基中培养，然后按照以下介绍的方法，选择能够将gypenoside V和/或人参皂甙-Rb1以高产率转换成人参皂甙-Rd的菌株。在这种液体培养基中，除葡糖苷酶外，还累积了对gypenosi-de V有活性的鼠李糖苷酶，液体培养基本身也可被用做将gypeno-side V和/或人参皂甙-Rb1转变成人参皂甙-Rd的酶源。例如，将gypenoside V或绞骨蓝提取液加到这种液体培养基中，使混合物pH值保持在约4到7，温度从约40到65℃，最好在pH值从约5至7，和在温度从约40到55℃的条件下，则会以高产率得本文档来自技高网...

【技术保护点】
生产人参皂甙－Ｒｄ的一种方法，包括鼠李糖苷酶和／或葡糖苷酶对ｇｙｐｅｎｏｓｉｄｅ－Ｖ和／或人参皂甙－Ｒｂ↓〔１〕的作用。

【技术特征摘要】
JP 1985-7-22 162268/198;JP 1986-3-11 54341/19861.生产人参皂甙-Rd的一种方法，包括鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶对gypenoside V和/或人参皂甙-Rb1的作用。2.按权利要求1的方法，其中鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶是用培养微生物的方法产生，这种微生物能够在液体培养基中产生鼠李糖苷酶和/或葡糖苷酶。3.按权利要求2的方法，其中微生物是真菌类。4.按权利要求2的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：大盐春治，桑原雅明，小宫威，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]