罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物技术

本发明专利技术提供一种罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物。本发明专利技术一方面提供一种罗汉果三萜皂甙及其盐的制备方法，包括得到提取液、得到澄清的水溶液、得到富集罗汉果三萜皂甙的水-乙醇混合溶液、得到粗品罗汉果三萜皂甙水溶液和制得罗汉果三萜皂甙及其盐的步骤；本发明专利技术另一方面提供一种由上述制备方法得到的罗汉果三萜皂甙及其盐；本发明专利技术又一方面提供上述罗汉果三萜皂甙及其盐在制备用于治疗肿瘤的化疗增效剂中的应用；本发明专利技术再一方面提供一种药物组合物，其包含上述罗汉果三萜皂甙及其盐和药用载体。本发明专利技术提供的罗汉果三萜皂甙及其盐能提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和减少化疗药物的用量。

【技术实现步骤摘要】
罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物
本专利技术涉及从植物中提取的化合物在制备用于治疗肿瘤的化疗增效剂中的应用，具体地涉及罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物。
技术介绍
化疗是治疗肿瘤疾病的重要途径之一，然而，部分化疗药物副作用较大，给患者带来痛苦，如长春新碱、甲氨喋呤、顺铂、环磷酰胺等可导致注射局部疼痛、静脉栓塞、胃肠道反应、骨髓抑制、外周神经病变等毒副作用。此外，由于化疗药物的细胞毒性，甚至会引发病人产生感染、出血等并发症。例如，顺铂属于细胞周期非特异性药物，具有细胞毒性，可抑制癌细胞的DNA复杂过程，并损伤其细胞膜上的结构，患者使用顺铂后可能会出现以下不良反应：骨髓抑制、胃肠道反应、肾脏毒性、神经毒性、过敏反应、电解质紊乱等。肿瘤化疗增敏剂是一类能提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性、减少化疗药物用量的药物。为减少化疗药物的毒副作用、提高药物疗效、降低抗药性的产生，选择合适的化疗增敏剂进行联合使用，已成为治疗肿瘤的重要方案之一。如，临床上将顺铂与5-Fu、博来霉素联合使用治疗食管癌，从而提高疗效。因此，人们一直希望找到不良反应小，甚至没有不良反应的肿瘤化疗增效剂。肿瘤对药物的敏感性与其相关基因的表达密切相关，研究发现Bax表达可增强胰腺癌对吉西他滨和5-FU等化疗药物以及放射治疗的敏感性，此外，发现Bax基因在胃癌、肝癌等肿瘤组织中表达明显下调，提示Bax的表达可增强肿瘤对放疗、化疗的敏感性(何巍，李玉霞，李巍。转染Bax基因对A549细胞系的凋亡及化疗敏感度的影响[J]。肿瘤防治研究，2014，06：515-518)。Bcl-2蛋白是Bcl-2原癌基因的编码产物，是细胞存活促进因子，Bcl-2基因家族中的Bcl-2是最重要的凋亡抑制基因，有研究发现Bcl-2的高表达能明显抑制化疗药诱导肿瘤细胞凋亡,导致肿瘤细胞对多种化疗药物耐受(周亭芳，庄英帜，曹建国。罗格列酮增强顺铂抑制人肺腺癌细胞增殖作用[J]。中国药理学通报，2005，01：88-91)。多药耐药(MDR)是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时对其他结构不同、作用靶位点不同的抗肿瘤药物也产生耐药的现象。多项研究显示，ERK通路的过表达与肿瘤的化疗耐药存在正相关的关系。ERK信号通路的研究为临床上治疗肿瘤耐药提供了药物支持(梁伟，陈志霞，王慧君，王松坡。ERK信号通路参与至真方逆转人大肠癌多药耐药细胞HCT-8/VCR耐药作用机制的研究[J]。中国中西医结合消化杂志，2015，05：315-320)，在绝大多数急性白血病细胞中，ERK高表达。例如K562细胞系抗凋亡特性就与ERK基础活性较高有关，ERK活性受抑后，可使K562发生凋亡。通过阻抑ERK通路，降低磷酸化ERK1/2蛋白表达水平，进而下调端粒酶活性，可以达到增强白血病、卵巢癌等多种耐药细胞对化疗药物敏感性的目的(李登举，张瑶珍，黄伟，孟凡凯。抑制ERK增强白血病和卵巢癌耐药细胞系化疗敏感性[J]。中国实验血液学杂志，2003，11(6)：595-599)。因此，为了解决现有技术中的上述不足，本专利技术提出了一种新的解决方案。
技术实现思路
为了解决现有技术中的上述问题，本专利技术提供了罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物。根据本专利技术提供的罗汉果三萜皂甙及其盐能够上调Bax的表达和下调Bcl-2的表达，或者能够下调p-ERK的表达，能提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性和减少化疗药物的用量，且无其他毒副作用和不良反应。本专利技术一方面提供了一种罗汉果三萜皂甙及其盐的制备方法，包括以下步骤：1)将罗汉果粉碎、称重，按罗汉果与水质量比为1:6-1:8的比例加入水，在80-95℃的温度下搅拌提取1-3个小时，离心收集上清液，将沉淀重复搅拌提取1-4次，每次均离心收集上清液，合并上清液以得到提取液；2)向所述提取液中加入絮凝剂，除去所述提取液中的鞣质和可溶性蛋白，得到澄清的水溶液；3)采用XAD-16树脂对所述水溶液进行吸附，然后用30-50％的乙醇进行洗脱，得到富集罗汉果三萜皂甙的水-乙醇混合溶液；4)将所述水-乙醇混合溶液进行减压浓缩，并回收乙醇，浓缩至膏状的浸膏并称重，向所述浸膏中加入3-6倍质量的去离子水来稀释浸膏，以得到粗品三萜皂甙水溶液；5)采用DiaionPA树脂对所述粗品三萜皂甙水溶液进行脱色处理，收集下注液，得到富集液，再利用半制备液相色谱分离制得纯度大于98％的罗汉果三萜皂甙及其盐。本专利技术另一方面提供了一种由上述制备方法得到的罗汉果三萜皂甙及其盐，其特征在于，所述罗汉果三萜皂甙及其盐具有以下通式：其中，R为H原子、金属离子或n个葡萄糖分子，R1为金属离子或n个葡萄糖分子，n均≥1。可选地，所述罗汉果三萜皂甙具有以下结构式：罗汉果皂甙Ⅵ罗汉果皂甙Ⅴ罗汉果皂甙Ⅳ罗汉果皂甙Ⅲ。本专利技术又一方面提供了上述罗汉果三萜皂甙及其盐在制备用于治疗肿瘤的化疗增效剂中的应用。可选地，所述化疗增效剂包括化疗增敏剂和耐药逆转剂。进一步地，所述罗汉果三萜皂甙及其盐能够调控肿瘤细胞中与药物敏感的、耐药相关的基因的表达。进一步地，所述罗汉果三萜皂甙及其盐能够上调Bax的表达和下调Bcl-2的表达，或者能够下调p-ERK的表达。可选地，所述肿瘤选自白血病、肝癌、肺癌、血癌、结肠腺癌、淋巴癌、乳腺癌、胰腺癌、喉癌、黑色素瘤或宫颈癌。本专利技术再一方面提供了一种药物组合物，其包含上述罗汉果三萜皂甙及其盐和药用载体。可选地，所述药用载体选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、稀释剂、赋形剂或润湿剂。根据本专利技术提供的罗汉果三萜皂甙及其盐和其制备方法、应用及包含该罗汉果三萜皂甙及其盐的药物组合物，能够带来至少以下有益效果之一：(1)具有化疗增效剂的作用。本专利技术提供的罗汉果三萜皂甙及其盐，在肿瘤化疗的治疗中具有显著的增敏和耐药逆转作用，此处所述的增敏作用包括能够增加非耐药肿瘤细胞对于化疗药物敏感性的作用，以及能够克服耐药肿瘤细胞耐药性的作用，本专利技术提供的罗汉果三萜皂甙及其盐通过调控肿瘤细胞中Bax、Bcl-2蛋白以及抑制ERK信号通路而具有化疗增敏和耐药逆转的作用，既可以发挥较显著的抑制肿瘤细胞增殖的效应，又能有效降低化疗药物剂量，从而提高疗效，具有实际的应用价值；(2)使用方便，应用广泛。本专利技术提供的含有罗汉果三萜皂甙及其盐可以单独使用或以药物组合物的形式使用，可通过口服或注射给药，可通过口服或注射给药，可与抗代谢药物、转录抑制药物、有丝分裂抑制药物和干扰DNA复制药物等化疗药物联合使用，且可用于白血病、口腔癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、宫颈癌或胰腺癌等各种肿瘤。附图说明图1示出了本专利技术实施例1提供的罗汉果三萜皂甙Ⅵ调控胰腺癌细胞PANC-1中Bax、Bcl-2蛋白的蛋白免疫杂交结果；图2示出了本专利技术实施例1提供的罗汉果三萜皂甙Ⅵ与吉他西滨联合抑制胰腺癌的结果；图3示出了本专利技术实施例2提供的罗汉果三萜皂甙Ⅴ调控肝癌细胞中Bax、Bcl-2蛋白的蛋白免疫杂交结果；图4示出了本专利技术实施例2提供的罗汉果三萜皂甙Ⅴ与顺铂联合抑制肝癌的结果；图5示出了本专利技术实施例3提供的罗汉果三萜皂甙本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种罗汉果三萜皂甙及其盐的制备方法，包括以下步骤：1)将罗汉果粉碎、称重，按罗汉果与水的质量比为1:6‑1:8的比例加入水，在80‑95℃的温度下搅拌提取1‑3个小时，离心收集上清液，将沉淀重复搅拌提取1‑4次，每次均离心收集上清液，合并上清液以得到提取液；2)向所述提取液中加入絮凝剂，除去所述提取液中的鞣质和可溶性蛋白，得到澄清的水溶液；3)采用XAD‑16树脂对所述水溶液进行吸附，然后用30‑50％的乙醇进行洗脱，得到富集罗汉果三萜皂甙的水‑乙醇混合溶液；4)将所述水‑乙醇混合溶液进行减压浓缩，并回收乙醇，浓缩至膏状的浸膏并称重，向所述浸膏中加入3‑6倍质量的去离子水来稀释浸膏，以得到粗品罗汉果三萜皂甙水溶液；5)采用Diaion PA树脂对所述粗品罗汉果三萜皂甙水溶液进行脱色处理，收集下注液，得到富集液，再利用半制备液相色谱分离制得纯度大于98％的罗汉果三萜皂甙及其盐。

【技术特征摘要】
1.一种包含罗汉果三萜皂甙及其盐的组合物在制备用于治疗肿瘤的化疗增效剂中的应用，其特征在于，所述罗汉果三萜皂甙及其盐具有以下通式：其中，R为H原子、金属离子或n个葡萄糖分子，R1为金属离子或n个葡萄糖分子，n均≥1。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述罗汉果三萜皂甙具有以下结构式：3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述化疗增效剂包括化疗增敏剂和耐药逆转剂。4.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘灿，窦德泉，马兰青，荣龙，赵晓萌，王燕，李钧涛，孙媛霞，
申请(专利权)人：北京农学院，刘灿，
类型：发明
国别省市：北京;11