新型肿瘤抗原蛋白SART-3及其肿瘤抗原肽制造技术

新型肿瘤抗原蛋白；其基因；衍生自该肿瘤抗原蛋白的肿瘤抗原肽；这些物质的衍生物；以及在体内或体外利用这些物质治疗、预防、诊断肿瘤等。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及新型肿瘤抗原蛋白及其肿瘤抗原肽。更具体地说，本专利技术涉及新型肿瘤抗原蛋白及其基因、衍生自该肿瘤抗原蛋白的肿瘤抗原肽和这些物质的衍生物、以及体内或体外利用这种肿瘤抗原蛋白、基因、肿瘤抗原肽或它们的衍生物治疗、预防或诊断肿瘤。虽然长期以来人们不了解攻击自身肿瘤细胞的CTL的靶分子，但是免疫学和分子生物学的最新进展已经逐渐揭示了这类靶分子。准确地说，已经发现CTL利用T细胞受体(TCR)识别称为肿瘤抗原肽的肽和主要组织相容性复合体Ⅰ类抗原(Ⅰ类MHC抗原，在人类称为HLA抗原)之间的复合物，由此攻击自身肿瘤细胞。肿瘤抗原肽产生自肿瘤抗原蛋白(即肿瘤特异性蛋白)在具有蛋白酶体的细胞中的降解，所述肿瘤抗原蛋白在细胞内合成。由此产生的肿瘤抗原肽结合至在内质网中的MHCⅠ类抗原(HLA抗原)上，形成复合物，而且该复合物被转运到细胞表面作为抗原提呈。肿瘤特异性CTL识别作为抗原提呈的该复合物，并通过其细胞毒性作用或产生淋巴因子呈现其抗肿瘤效应。因为这一系列作用的阐明，通过使用肿瘤抗原蛋白或肿瘤抗原肽作为所谓的癌症疫苗增强肿瘤患者体内的肿瘤特异性CTL来治疗肿瘤已成为可能。作为肿瘤抗原蛋白，T.Boon等于1991年首次由人黑素瘤细胞鉴定了命名为MAGE的蛋白(Science,254:1643,1991)。此后主要从黑素瘤细胞鉴定了数种其它肿瘤抗原蛋白。已鉴定的黑素瘤抗原的实例是黑色素体蛋白，例如黑素细胞组织特异性蛋白、gp 100(J.Exp.Med.,179:1005,1994)、MART-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,91:3515,1994)和酪氨酸酶(J.Exp.Med.,178:489,1993)；不仅在黑素瘤细胞而且在各种癌症细胞和正常睾丸细胞上表达的MEGE-相关蛋白(J.Exp.Med,179:921,1994)；具有肿瘤特异性氨基酸突变的β-连环蛋白(J.Exp.Med.,183:1185,1996)和CDK4(Sience,269:1281,1995)。还鉴定了不是得自黑素瘤的肿瘤抗原蛋白，包括癌基因产物，例如HER2-neu(J.Exp.Med.,181:2109,1995)和p53(变异体)(Proc.Natl.Acad.Sci.USA,93:14704,1996)、肿瘤标记物例如CEA(J.Natl.CancerInst.,87:982,1995)和PSA(J.Natl.CancerInst.,89:293,1997)，以及病毒蛋白例如HPV(J.Immunol.,154:5934,1995)和EBV(Int.Immunol.,7:653,1995)。关于这些物质的详细描述可见公开出版的综述(例如Immunol.Today,18:267,1997；J.Exp.Med.,183:725,1996；和Curr.Opin.Immunol.,8:628,1996)。应用肿瘤抗原蛋白或肿瘤抗原肽治疗或诊断肿瘤时，重要的是鉴定可广泛用于比黑素瘤发病率高得多的鳞状细胞癌例如食管癌和肺癌的肿瘤抗原。与此相关的是，本专利技术人对编码得自食管癌鳞状癌细胞的新肿瘤抗原蛋白的基因进行了克隆，以及首次从非黑素瘤肿瘤细胞鉴定了几种结合并提呈在HLA型为HLA-A24或HLA-A26的HLA抗原上的肿瘤抗原肽(J.Exp.Med,187:277,1998；国际专利公开WO97/46676)。当将这些肿瘤抗原肽在临床实际应用时，最好使用两种或多种不同肿瘤抗原肽而不是仅使用单一肽。也就是说，鉴于这样的事实所有癌症细胞并不是表达共有的相同肿瘤抗原以及在单一癌细胞上存在两种或多种不同肿瘤抗原肽，所以认为采用两种或多种不同肿瘤抗原肽治疗更有效。实际上，对于黑素瘤已经尝试研制包含两种或多种肽的混合制剂，因为衍生自肿瘤抗原的单一肽不能产生足够的作用(Int.J.Cancer,66:162,1996；和Int.J.Cancer,67:54,1996)。在这样的情况下，需要鉴定能够广泛用于发病率较高的鳞状细胞癌的新的肿瘤抗原蛋白和肿瘤抗原肽。为了获得新型肿瘤抗原蛋白和肿瘤抗原肽，本专利技术人进行了以下努力。首先，本专利技术人从食管癌细胞系KE-4(FERM BP-5955)制备了cDNA文库，并用该文库的重组质粒和含HLA-A2402(一种HLA-A24)cDNA的重组质粒双重转染成纤维细胞系VA-13(RIKEN CELLBANK,The Institute of Physical and Chemical Research)。用针对KE-4的KE-4CTL(FERM BP-5954)处理获得的转染子，测量产生的IFN-γ量以确定是否激活KE-4CTL。重复进行这种广泛的筛选，尽管本专利技术人不能保证这种筛选就能够获得新的有用的肿瘤抗原蛋白，但是我们最终成功克隆了一个编码肿瘤抗原蛋白的基因。本专利技术人将该基因编码的肿瘤抗原蛋白称为“SART-3”。比较SART-3与已知序列的碱基序列表明，SART-3的所述碱基序列是一种新的碱基序列，有一个碱基不同于在GenBank数据库以登录号D63879登记的KIAA0156基因，其作用仍不清楚。此外，本专利技术人在SART-3的氨基酸序列中鉴定了结合并提呈在HLA-A24和HLA-A2上的肿瘤抗原肽部分，并证实这类肽具有肿瘤抗原肽活性。本专利技术人根据上述发现完成了本专利技术。因此，本专利技术涉及(1)编码以下蛋白的DNA:SEQ ID NO:1所示氨基酸序列组成的蛋白或在SEQ ID NO:1中替代、缺失和/或添加一个或多个氨基酸残基的氨基酸序列组成的蛋白变异体，前提是所述蛋白和蛋白变异体可产生能够结合HLA抗原而且被细胞毒性T淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽；(2)SEQ ID NO:2所示碱基序列组成的DNA或在严格条件下与所述DNA杂交的DNA变异体，前提是所述DNA或DNA变异体产生和表达的蛋白可产生能够结合HLA抗原而且被细胞毒性T淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽；(3)含有上述(1)或(2)的DNA的表达质粒；(4)用上述(3)的表达质粒转化的转化体；(5)产生重组蛋白的方法，它包括培养上述(4)的转化体，回收表达的重组蛋白；(6)上述(1)或(2)的DNA编码的肿瘤抗原蛋白，或者通过上述(5)的方法产生的肿瘤抗原蛋白； (7)包含作为活性成分的上述(1)或(2)的DNA或上述(6)的蛋白的药用组合物；(8)用于治疗或预防肿瘤的药用组合物，它包含作为活性成分的上述(1)或(2)的DNA或上述(6)的蛋白；(9)为衍生自上述(6)的蛋白的部分肽、而且能够结合HLA抗原并被细胞毒性T淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽，或其具有相同功能特性的衍生物；(10)上述(9)的肿瘤抗原肽，其中所述HLA抗原是HLA-A24或HLA-A2或其具有相同功能特性的衍生物；(11)上述(10)的肿瘤抗原肽或其具有相同功能特性的衍生物，所述肿瘤抗原肽包含选自SEQ ID NO:3-52中任一个所示全部或部分氨基酸序列的序列；(12)上述(11)的肿瘤抗原肽或其具有相同功能特性的衍生物，所述肿瘤抗原肽包含选自SEQ ID NO:3-9和25-29中任一个所示全部或部分氨基酸序列的序列；(13)上述(11)的肿瘤抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＤＮＡ，它编码ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１所示氨基酸序列组成的蛋白或取代、缺失和／或添加一个或多个氨基酸残基的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１氨基酸序列组成的蛋白变异体，前提是所述蛋白和蛋白变异体产生能够与ＨＬＡ抗原结合而且被细胞毒性Ｔ淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：伊东恭悟，中尾真修，
申请(专利权)人：伊东恭悟，大日本住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]