得自亲环蛋白B的肿瘤抗原肽制造技术

得自亲环蛋白Ｂ的肿瘤抗原肽或其具有相同功能特性的衍生物；含有作为活性成分的这些肿瘤抗原肽、其衍生物、亲环蛋白或其肽片段、或编码所述亲环蛋白或其肽片段的基因的用于肿瘤的药物、预防剂或诊断剂；上述物质在体外治疗肿瘤中的应用；以及抗上述肿瘤抗原肽或其衍生物的抗体。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及得自亲环蛋白和相关物质的新的肿瘤抗原肽。更具体地说，本专利技术涉及得自亲环蛋白B及其具有相同功能性质的衍生物的肿瘤抗原肽，以及进一步涉及体内或体外利用这类肿瘤抗原肽、其衍生物、亲环蛋白B多肽、或它们的基因治疗、预防或诊断肿瘤。
技术介绍
已知免疫系统尤其是T细胞在体内肿瘤排斥中起着重要作用。实际上在人肿瘤病灶中已经观察到对肿瘤细胞具有细胞毒性效应的淋巴细胞的浸润(Arch.Surg.，126200，1990)，而且已经比较容易地从黑素瘤分离到识别自身肿瘤细胞的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)(例如，Immunol.Today，8385，1987；J.Immunol.，138989，1987；和Int.J.Cancer，5252，1992)。此外，通过引入识别自身肿瘤细胞的CTL对黑素瘤的临床治疗结果也表明T细胞在肿瘤排斥中的重要性(J.Natl.Cancer.Inst.，861159，1994)。虽然长期以来人们不了解攻击自身肿瘤细胞的CTL的靶分子，但是免疫学和分子生物学的最新进展已经逐渐揭示了这类靶分子。准确地说，已经发现CTL利用T细胞受体(TCR)识别称为肿瘤抗原肽的肽和主要组织相容性复合体I类抗原(MHC I类抗原，在人类称为HLA抗原)之间的复合物，由此攻击自身肿瘤细胞。肿瘤抗原肽产生自肿瘤特异性蛋白即肿瘤抗原蛋白在具有蛋白酶体的细胞中的降解，该肿瘤抗原蛋白在细胞内合成。由此产生的肿瘤抗原肽结合至在内质网中的MHC I类抗原(HLA抗原)上，形成复合物，而且该复合物被转运到细胞表面作为抗原提呈。肿瘤特异性CTL识别作为抗原提呈的该复合物，并通过其细胞毒性作用或产生淋巴因子呈现其抗肿瘤效应。因为这一系列作用的阐明，通过使用肿瘤抗原蛋白或肿瘤抗原肽作为所谓的癌症疫苗增强肿瘤患者体内的肿瘤特异性CTL来治疗肿瘤已成为可能。作为肿瘤抗原蛋白，T.Boon等于1991年首次由人黑素瘤细胞鉴定了命名为MAGE的蛋白(Science，2541643，1991)。此后主要从黑素瘤细胞鉴定了数种其它肿瘤抗原蛋白。已鉴定的黑素瘤抗原的实例是黑色素体蛋白，例如黑素细胞组织特异性蛋白、gp 100(J.Exp.Med.，1791005，1994)、MART-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，913515，1994)和酪氨酸酶(J.Exp.Med.，178489，1993)、不仅在黑素瘤细胞而且在各种癌症细胞和正常睾丸细胞上表达的MEGE-相关蛋白(J.Exp.Med.，179921，1994)、具有肿瘤特异性氨基酸突变的β-连环蛋白(J.Exp.Med.，1831185，1996)和CDK4(Scence，2691281，1995)。还鉴定了不是得自黑素瘤的肿瘤抗原蛋白，包括癌基因产物，例如HER2-neu(J.Exp.Med.，1812109，1995)和p53(Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9314704，1996)、肿瘤标记物例如CEA(J.Natl.Cancer Inst.，87982，1995)和PSA(J.Natl.Cancer Inst.，89293，1997)，以及病毒蛋白例如HPV(J.Immunol.，1545934，1995)和EBV(Int.Immunol.，7653，1995)。关于这些主题的详细描述可见公开出版的综述(例如Immunol.Today，18267，1997；J.Exp.Med.，183725，1996；和Curr.Opin.Immunol.，8628，1996)。应用肿瘤抗原蛋白或肿瘤抗原肽治疗或诊断肿瘤时，重要的是鉴定可广泛用于比黑素瘤发病率高得多的上皮肿瘤例如胃癌和肺癌的肿瘤抗原。与此相关的是，本专利技术人对编码得自食管癌鳞状癌细胞的新肿瘤抗原蛋白基因进行了克隆，以及首次从非黑素瘤肿瘤细胞鉴定了几种结合并提呈在HLA型为HLA-A24或HLA-A26的HLA抗原上的肿瘤抗原肽(J.Exp.Med.，187277，1998；国际专利公开WO97/46676)。当将这些肿瘤抗原肽在临床实际应用时，最好使用两种或多种不同肿瘤抗原肽而不是仅使用单一肽。也就是说，鉴于这样的事实所有癌症细胞并不是表达共有的相同肿瘤抗原以及在单一癌症细胞上存在两种或多种不同肿瘤抗原肽，所以认为采用两种或多种不同肿瘤抗原肽治疗更有效。实际上，对于黑素瘤已经尝试研制包含两种或多种肽的混合制剂，因为衍生自肿瘤抗原的单一肽不能产生足够的作用(Int.J.Cancer，66162，1996；和Int.J.Cancer，6754，1996)。在这样的情况下，需要鉴定能够广泛用于发病率高的上皮肿瘤如胃癌和肺癌的新的肿瘤抗原蛋白和肿瘤抗原肽。专利技术公开本专利技术的目的是提供得自亲环蛋白和相关物质的新肿瘤抗原肽。更具体地说，其目的是提供得自亲环蛋白B的肿瘤抗原肽和其具有相同功能性质的衍生物以及在体内或体外利用所述肿瘤抗原肽、其衍生物、亲环蛋白B多肽、或它们的基因来治疗、预防和诊断肿瘤。衍生自亲环蛋白B的本专利技术肿瘤抗原肽包括结合并提呈在日本人和白种人携带率高的HLA抗原HLA-A24和HLA-A2上的肿瘤抗原肽，而且它也是能够用于治疗或预防包括上皮肿瘤的多种肿瘤(例如肺癌、膀胱癌、骨肉瘤和白血病)的肿瘤抗原肽。因此，预测亲环蛋白B、本专利技术的肿瘤抗原蛋白和它们的基因、或衍生自亲环蛋白B的肿瘤抗原肽可用作新的抗肿瘤药物。为了获得新肿瘤抗原肽和产生所述肽的肿瘤抗原蛋白，本专利技术人进行了以下努力。本专利技术人首次从肺腺癌患者淋巴细胞建立了识别HLA-A24或HLA-A2阳性膀胱癌、肺癌、骨肉瘤或白血病细胞系的CTL细胞系并命名为KG-CTL(保藏号FERM BP-6725)。其次，从上述KG-CTL与其强烈反应的膀胱癌细胞系HT-1376制备cDNA文库，并用所述文库的重组质粒和含有HLA-A2402(HLA-A24中的一种)cDNA的重组质粒双重转染COS-7细胞。用上述KG-CTL处理所获得转染子，并检测产生的IFN-γ量以确定是否活化KG-CTL。重复进行所述筛选的结果，本专利技术人最终成功克隆编码肿瘤抗原蛋白的基因。对该基因的碱基测序表明，所述肿瘤抗原蛋白与已知蛋白亲环蛋白B具有相同的氨基酸序列。已知亲环蛋白B是免疫抑制剂环胞菌素A的结合蛋白并参与活化免疫细胞。但是，在本专利技术以前并不知道它具有肿瘤抗原的作用。再后，本专利技术人在亲环蛋白B的氨基酸序列中鉴定了结合并提呈在HLA-A24和HLA-A2上的肿瘤抗原肽部分，并证实在这样的肽及其衍生物中保有肿瘤抗原肽活性。此外，本专利技术人证实亲环蛋白B的同系物、亲环蛋白A、C和D也具有与亲环蛋白B相似的肿瘤抗原肽活性。根据上述发现完成了本专利技术。因此，本专利技术涉及(1)产生自亲环蛋白的部分肽而且能够结合至HLA抗原并被细胞毒性T淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽，或其具有相同功能性质的衍生物；(2)产生自亲环蛋白B的部分肽而且能够结合至HLA抗原并被细胞毒性T淋巴细胞识别的肿瘤抗原肽，或其具有相同功能性质的衍生物；(3)其中所述HLA抗原是HLA-A24或HLA-A2的按照上述(1)或(2)的肿瘤抗原肽，或其具有相同功能性质的衍生物；(4)按照上述(3)的肿瘤抗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肿瘤抗原肽或其具有相同功能特性的衍生物，所述肿瘤抗原肽是产生自亲环蛋白的部分肽而且能够结合至ＨＬＡ抗原并可被细胞毒性Ｔ淋巴细胞识别。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：伊东恭悟，五味慎也，
申请(专利权)人：伊东恭悟，大日本住友制药株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]