一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法技术

本申请公开了一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，包括，将R‑邻氯扁桃酸样品用HPLC法进行分离测定，分离测定时采用纤维素‑三‑4‑甲基苯甲酸酯_手性色谱柱作为固定相的手性色谱柱，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱。该方法能够简单、快速、准确地分离邻氯扁桃酸的对映异构体杂质。

A method for the separation and determination of eoalmandelic acid enantiomers by HPLC

The invention discloses a HPLC separation and determination of o-cl-ma enantiomers of method, R o-chloromandelic acid samples with the HPLC method for the separation and determination of separation and determination of the three cellulose chiral column as stationary phase 4 methyl benzoate _ chiral column and the mixture of alkanes and alcohols as mobile phase under isocratic elution. This method can easily, quickly and accurately separate the enantiomer impurities of O - chloromandelic acid.

【技术实现步骤摘要】
一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法
本专利技术属于医药化工领域，更具体地，涉及一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法。
技术介绍
邻氯扁桃酸，化学名为2-(2-氯苯基)-2-羟基乙酸，其R型和S型的结构式如下：自然界生命体存在手性属性,由此产生了药物的手性问题。药理学研究表明存在手性对映体的药物往往只有一种对映体具有所需的药效,而另一种则不能达到期望的药效作用。因此,全球范围内对单一对映体药物的需要持续增长。在抗血小板聚集新药氯吡格雷(临床上广泛应用于预防心肌梗塞、中风、动脉硬化等心脑血管疾病)的制备过程中,需要具有光学活性的R-邻氯扁桃酸作为中间体。因为以R-邻氯扁桃酸为原料进行氯吡格雷的生产即可获得单一构型的氯吡格雷，而无需再进行拆分。因此,制备具有光学活性的R-邻氯扁桃酸具有很重要的意义。在制备R-邻氯扁桃酸的过程中，由于邻氯扁桃酸具有一个手性中心，因此总是不可避免的混有邻氯扁桃酸的对映异构体。为了控制药物的质量，需要控制邻氯扁桃酸的对映异构体的含量。因此，建立可靠的分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的分析方法是非常有必要的。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，该方法能够简单、快速、准确地分离邻氯扁桃酸的对映异构体杂质。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，所述方法包括，将R-邻氯扁桃酸样品用HPLC法进行分离测定，分离测定时采用纤维素-三-4-甲基苯甲酸酯作为手性色谱柱的固定相，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱。优选地，所述的烷烃包括正己烷、正庚烷的一种或者其混合液；所述的低级醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的一种或一种以上的组合。优选地，所述流动相中，烷烃与低级醇的体积比为980：20～550：450；优选所述流动相中，烷烃与低级醇的体积比为900:100～600:400。优选地，用HPLC法进行分离测定前，在所述的流动相中加入酸性溶剂，其中酸性溶剂的体积占流动相总体积的0.03～4.0％。优选地，所述的酸性溶剂包括甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或一种以上的组合。优选地，在进行HPLC检测时，柱温为10℃～40℃，进样量为5-15uL，检测波长为200～250nm；流动相的流速为0.3～2.5ml/min。优选地，在进行HPLC检测时，将正己烷、乙醇、甲醇和三氟乙酸的混合溶液作为流动相，所述混合溶液中，正己烷、乙醇、甲醇、三氟乙酸体积比是900：80：20：1；采用紫外检测器，检测波长是230nm；流动相的流速为1.5ml/min；柱温为16℃。优选地，在进行HPLC检测前，还包括将所述R-邻氯扁桃酸粗品用异丙醇溶解的过程。优选地，R-邻氯扁桃酸粗品用异丙醇溶解后，还包括用与流动相成分一致的溶液进行稀释并配置成0.2～5.0mg/mL邻氯扁桃酸溶液的过程。优选地，所述的R-邻氯扁桃酸样品是指包含R-邻氯扁桃酸和S-邻氯扁桃酸的混合物。本申请能产生的有益效果包括但不限于：1)本申请所提供的纤维素-三-4-甲基苯甲酸酯作为手性固定相的手性色谱柱，可以有效的分离邻氯扁桃酸的对映异构体。手性色谱柱(ChiralHPLCColumns)是由具有光学活性的单体，固定在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相(ChiralStationaryPhases)。对于手性异构体的分离，不同化学性质的异构体需采用不同类型的手性柱，如何根据化合物的分子结构选择适用的手性色谱柱是非常重要的。市场上可选择的手性色谱柱越来越多，根据固定相的化学结构，将手性色谱柱分为以下几种：刷型、多糖型、环糊精型、大环抗生素型、蛋白质型、配位交换型、冠醚型等。专利技术人曾尝试选择分离手性化合物较常用的环糊精型的多个手性色谱柱进行邻氯扁桃酸及其手性异构体的分离测定，但是无论如何调整流动相及其它色谱条件都无法将各峰分离，色谱峰的信号较弱且峰形差。专利技术人对多糖衍生物型色谱柱进行考察，其中固定相硅胶表面涂敷纤维素衍生物的色谱柱能够实现分离。经过长期的实验，最终发现采用硅胶表面涂覆纤维素—三(4—甲基苯甲酸酯)作为固定相的手性色谱柱，并采用适当的有机溶剂进行洗脱，可以有效的分离邻氯扁桃酸的对映异构体。上述色谱柱为固定相为硅胶表面涂敷纤维素—三(4一甲基苯甲酸酯)的手性色谱柱，均为日本大赛璐公司生产的手性柱。该类手性色谱柱能够达到理想的分离效果，对于其拆分机制，一般认为对映体与固定性之间存在着偶极—偶极，氢键—氢键，π—π，空间排阻，疏水包合等多种相互作用，由于这些立体作用和电性作用的存在，使得两个对映体与固定性所形成的非对映体络合物的稳定性产生差别从而实现分离。2)本申请所提供的采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱，使得其分离度更高。经过实验考察发现，两个对映体的分离度与流动相中烷烃与低级醇的比例以及有机酸添加剂的种类和添加量有关。同时在考察柱温对分离度的影响时发现，正相洗脱系统中降低柱温有利于提高分离度，使R-邻氯扁桃酸与S-邻氯扁桃酸能更彻底分离。3)本申请所提供的一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，与现有技术中的用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法相比，首先对样品本身不需要做任何衍生化处理，流动相也是普通的正相色谱的溶剂，不需要任何手性流动相添加剂。因此，本申请所提供的方法较现有技术的方法简单。而且，本申请所提供的方法干扰因子少，在测定过程中不存在空白干扰，且灵敏度高，其分离度R在1.7以上。附图说明图1：实施例1中空白溶液色谱图；图2：实施例1中系统适用性溶液色谱图；图3：实施例1中标准品溶液色谱图；图4：实施例1中供试品溶液色谱图。具体实施方式下面结合实施例详述本申请，但本申请并不局限于这些实施例。本专利技术所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本专利技术所描述的方法制备而得。本专利技术所使用的分析试剂及溶液符合中国药典2015版附录的要求，除另有说明外。本专利技术中所述的分离度R是指相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也称分辨率，表示相邻两峰的分离程度。R越大，表明相邻两组分分离越好。一般说当R＜1时，两峰有部分重叠；当R＝1.0时，分离度可达98％；当R＝1.5时，分离度可达99.7％。通常用R＝1.5作为相邻两组分已完全分离的标志。当R＝1时，称为4σ分离，两峰基本分离，裸露峰面积为95.4％，内侧峰基重叠约2％。R＝1.5时，称为6σ分离，裸露峰面积为99.7％。R≥1.5称为完全分离。《中国药典》规定R应大于1.5。分离度计算公式：R＝2(tR2-tR1)/(W1+W2)tR2:相邻两峰中后一峰的保留时间；tR1:相邻两峰中前一峰的保留时间；W1、W2:此相邻两峰的峰宽实施例1一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，包括如下步骤：(1)供检测溶液的配制：系统适用性溶液的配制：取邻氯扁桃酸消旋体对照品约10mg，精密称定至25mL容量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适应性溶液。标准品溶液的配制：取R-邻氯扁桃酸标准品约10mg，精密称定至25mL容量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准品溶液。供试品溶液的配制：取自制R本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，其特征在于，所述方法包括，将R‑邻氯扁桃酸样品用HPLC法进行分离测定，分离测定时采用纤维素‑三‑4‑甲基苯甲酸酯作为手性色谱柱的固定相，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱。

【技术特征摘要】
1.一种用HPLC分离测定邻氯扁桃酸对映异构体的方法，其特征在于，所述方法包括，将R-邻氯扁桃酸样品用HPLC法进行分离测定，分离测定时采用纤维素-三-4-甲基苯甲酸酯作为手性色谱柱的固定相，并采用烷烃和低级醇的混合溶液作为流动相进行等度洗脱。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的烷烃包括正己烷、正庚烷的一种或者其混合液；所述的低级醇包括甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、正丁醇或异丁醇中的一种或一种以上的组合。3.根据权利要求1或2中所述的方法，其特征在于，所述流动相中，烷烃与低级醇的体积比为980：20～550：450；优选所述流动相中，烷烃与低级醇的体积比为900：100～600∶400。4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其特征在于，用HPLC法进行分离测定前，在所述的流动相中加入酸性溶剂，其中酸性溶剂的体积占流动相总体积的0.03～4.0％。5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述的酸性溶剂包括甲酸、乙酸或三氟乙酸中的一种或一种以上的组合。6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：皮金红，赵涛涛，夏静平，张伟，邓军，张琦，
申请(专利权)人：武汉武药制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42