小球藻邻苯二酚1,2‑双加氧酶的提取以及活性测定制造技术

本发明专利技术公开了小球藻邻苯二酚1,2‑双加氧酶的提取以及活性测定，提取的具体步骤为：将小球藻粉低温研磨，加入Tris‑HCl缓冲液，离心得胞内酶粗酶液；将粗酶液滤，浓缩，透析，上样到纤维素柱，洗脱，浓缩，透析，浓缩，上样到Mono‑Q柱，洗脱，透析，浓缩，干燥，即得邻苯二酚1,2‑双加氧酶。小球藻邻苯二酚1,2‑双加氧酶的酶活性测定方法为：将反应体系在水浴中反应，测定产物的生成量。有益效果为：本发明专利技术的提取邻苯二酚1,2‑双加氧酶的方法除杂率高、条件温和、纯度高，能较好地保持酶的活性，并能维持酶之间的相互作用，具有较大发展潜力；该酶的活性测定简单可行。

Extraction and determination of dioxygenase activity of Chlorella 1,2 and Catechol

【技术实现步骤摘要】
小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取以及活性测定
本专利技术涉及邻苯二酚1,2-双加氧酶，尤其是涉及小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取以及活性测定。
技术介绍
邻苯二酚（C6H6O2）又名儿茶酚，是苯的两个邻位氢被羟基取代后形成的化合物，一般以衍生物的形式广泛存在于自然界中，是芳香类物质降解的重要中间产物。邻苯二酚及其衍生物是一类重要的化工产品，可广泛应用在医药、农药、食品、香料、化学助剂等方面。由于邻苯二酚能在各行业中广泛应用，邻苯二酚的需求量随着经济的快速发展也与日俱增，各类废水的排放量及复杂度也随着增大。而邻苯二酚属于高毒性物质，少量邻苯二酚经皮肤吸收就会引起湿疹性皮炎，邻苯二酚可经皮肤、呼吸道和消化道进入生物体，含有邻苯二酚的废水都具有致癌、致崎、致突变等潜在危害。所以，工业中邻苯二酚释放到土壤和水体中，通过富集作用，不仅污染环境，还会对人类的生存发展构成威胁，具有类激素作用，导致内分泌紊乱而危害生物健康。且随着生产和使用量的增加，进入环境中的邻苯二酚也相应增加，环境中邻苯二酚的污染危害日渐严重，因此，环境中邻苯二酚的有效去除已引起人们的广泛关注。目前，在生物降解处理邻苯二本文档来自技高网...

【技术保护点】
小球藻邻苯二酚1,2‑双加氧酶的提取，包括胞内酶粗酶液制备、浓缩透析、首次纯化、二次纯化，其特征在于：所述的胞内酶粗酶液制备步骤为：将对数期后期小球藻液抽滤，烘干得小球藻粉，研磨，再加入Tris‑HCl缓冲液，混合均匀后离心，上清液即为胞内酶粗酶液。

【技术特征摘要】
1.小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，包括胞内酶粗酶液制备、浓缩透析、首次纯化、二次纯化，其特征在于：所述的胞内酶粗酶液制备步骤为：将对数期后期小球藻液抽滤，烘干得小球藻粉，研磨，再加入Tris-HCl缓冲液，混合均匀后离心，上清液即为胞内酶粗酶液。2.根据权利要求1所述的小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，其特征在于：所述的胞内酶粗酶液制备步骤中研磨温度为2-5℃，时间为5-15min。3.根据权利要求1所述的小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，其特征在于：所述的胞内酶粗酶液制备步骤中Tris-HCl缓冲液的pH为7.8-8.2，小球藻粉与Tris-HCl缓冲液的重量体积比为1:1.8-2.3。4.根据权利要求1所述的小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，其特征在于：所述的浓缩透析步骤为：将胞内酶粗酶液经微孔滤膜过滤，再用聚乙二醇PEG20000浓缩，并用磷酸盐缓冲液透析，即得邻苯二酚1,2-双加氧酶的粗品。5.根据权利要求4所述的小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，其特征在于：所述的浓缩透析步骤中微孔滤膜的孔径为0.15-0.3μm。6.根据权利要求4所述的小球藻邻苯二酚1,2-双加氧酶的提取，其特征在于：所述的浓缩透析步骤中磷酸盐缓冲液的浓度为9-11mmol/L、pH为6.8-7.2，透...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈庆国，王亚超，李晶晶，刘梅，陶玲，国青青，
申请(专利权)人：浙江海洋大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33