一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法技术

本发明专利技术公开了一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法，该方法以苯基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以含有酸性添加剂的有机相为流动相A，含有酸性添加剂的水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方法，检测波长为210‑230nm，对双嘧达莫关键中间体2,6‑二氯‑4,8‑二(哌啶‑1‑基)嘧啶并[5,4‑d]嘧啶及其相关杂质进行分离测定。该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高，能够对双嘧达莫合成过程中的关键中间体二氯化物进行质量控制，使后处理简化并保证终产物的质量。

【技术实现步骤摘要】
一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法
本专利技术涉及药物化学及分析领域，具体涉及一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法。
技术介绍
双嘧达莫(Dipyridamole)，是一种抗血小板聚集和冠状动脉扩张药，它通过抑制腺苷的细胞吸收和代谢，提高环磷酸腺苷浓度等多种作用模式防止血栓的形成，与阿司匹林联合使用有协同扩张冠状血管及降低血小板凝聚作用，临床上主要用于防止脑血栓的形成、降低心肌梗塞的治疗，为心脑血管治疗领域的主要用药，化学结构式如下：式2为双嘧达莫的合成路线及合成过程的杂质谱分析谱图。从图中可以看出，整个合成过程是首先通过四氯化物(2,4,6,8-四氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶)与哌啶缩合生成关键中间体二氯化物(2,6-二氯-4,8-二(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)，随后二氯化物与二乙醇胺缩合生成双嘧达莫产物。不难发现，在整个反应过程中，随着关键中间体二氯化物(2,6-二氯-4,8-二(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)的产生，出现了大量的副反应杂质产物，主要有一氯化物(2-氯-4,6,8-三(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)、三氯化物(2,4,6-三氯-8-(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)、四氯化物(2,4,6,8-四氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶)。近年来，为了提高产率、纯度及更适合于商业化生产，双嘧达莫的合成工艺得到了很多改进，如美国专利US8946414B2公开的一种双嘧达莫的制备工艺以及中国专利201510118075.4中公开的一种双嘧达莫纯化工艺的报道，但其中所针对的均是二氯化物与二乙醇胺反应的改进及对所得到的双嘧达莫粗品的纯化。此外，现行的欧洲药典(EP8.0)中规定了特定杂质，即杂质A、B、C、D、E、F、G，虽然与二乙醇胺缩合后生成的双嘧达莫粗品及后续精制过程的有关物质水平可以采用此标准进行监控，但二氯化物作为合成双嘧达莫前一步的中间体，其杂质水平的高低直接决定了成品的质量以及后续处理程度的难易。因此，根据杂质需从源头控制的理念考虑，有必要建立一种新的用于双嘧达莫合成质量控制的关键中间体杂质分析方法，即基于对二氯化物前后步骤中的杂质进行监测和控制，使杂质能由工艺上得到有效控制，从而便于后处理，保证后续产品的质量。该方法有利于加强双嘧达莫产品内控质量，为工艺条件的优化提供必要的理论和实践依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于建立一种用于双嘧达莫合成质量控制的关键中间体杂质分析方法，该方法具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高，能够对双嘧达莫合成过程中的关键中间体二氯化物进行质量控制，使后处理简化并保证终产物的质量。为了达到上述目的，本专利技术采用高效液相色谱法(HPLC)，其通过如下技术方案实现:以苯基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以含有酸性添加剂的有机相为流动相A，含有酸性添加剂的水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方法，检测波长为210-230nm,对双嘧达莫关键中间体二氯化物(2,6-二氯-4,8-二(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)及其杂质进行分离测定。根据本专利技术，所述杂质为一氯化物(2-氯-4,6,8-三(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)、三氯化物(2,4,6-三氯-8-(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶)、四氯化物(2,4,6,8-四氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶)。根据本专利技术，在填料的选择方面，由于二氯化物属于双环共轭含氮杂环类结构，四氯化物及不同哌啶取代个数的三氯或一氯化物均可看作二氯化物的位置异构体，而对于苯环异构的分离，苯基与被测物之间的π-π共轭作用比C18填料的疏水分配相互作用的选择性更强，也更为适合。因此，色谱柱填料采用苯基硅烷键合硅胶。在洗脱步骤方面，采用梯度洗脱方法，是由于各物质的极性相差较大，相比等度洗脱方法，采用梯度条件更易实现二氯化物与其相关杂质的有效分离，空白无干扰，杂质之间的分离度均在2.0以上，由于梯度洗脱改善了峰形，杂质的灵敏度得到显著提高。根据本专利技术，梯度洗脱的具体步骤可以为：0min，流动相A为45％～50％；0～5min，流动相A以45％～50％等度洗脱；5～20min，流动相A增加至75％～90％；20～30min，流动相A以75％～90％等度洗脱；30～35min，流动相A线性减小至45％～50％；35min后平衡色谱柱，其中流动相A和B均为体积百分比。根据本专利技术的实施方式之一，在流动相中添加酸。其原因是，含氮杂环类物质一般显弱碱性，且二氯化物及其特定杂质的溶解性较差，通过在流动相中添加酸可使被测物增强离子化，提高溶解度，从而有助于分离。流动相中的酸性添加剂为磷酸、冰醋酸、三氟乙酸、甲酸中的一种酸。优选地，酸性添加剂为磷酸。根据本专利技术的实施方式之一，酸性添加剂的浓度可以为0.05％-0.2％。优选地，酸性添加剂的浓度为0.1％。根据本专利技术的实施方式之一，有机相为乙腈、甲醇中的一种。优选地，有机相为乙腈。所述色谱条件还可以进一步优选检测波长为220nm；流动相流速为0.8-1.2mL/min，优选为1.0mL/min；色谱柱的柱温为20-30℃，优选为25℃。此外，本专利技术还采用了氯仿-乙腈混合物作为稀释剂，采用的样品进样量为10μL。由于采用了上述杂质分析方法，使得本专利技术具有分离度好、简单快速、专属性强、灵敏度高的特点，能够对双嘧达莫合成过程中的关键中间体二氯化物进行质量控制，保证整个合成过程的可控性。故该法可以作为双嘧达莫关键中间体二氯化物中杂质水平的监测手段，同时也可为二氯化物中杂质控制策略提供有益的借鉴和依据。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1为实施例1中等度洗脱条件分析二氯化物的HPLC图；图2为实施例2中三氯化物、二氯化物及一氯化物混合对照品溶液的HPLC图；图3为实施例2中四氯化物溶液的HPLC图；图4为实施例3中三氯化物、二氯化物及一氯化物混合对照品溶液的HPLC图；图5为实施例3中四氯化物溶液的HPLC图；图6为实施例4中三氯化物、二氯化物及一氯化物混合对照品溶液的HPLC图；图7为实施例4中四氯化物溶液的HPLC图；图8为实施例5中系统适用性溶液的HPLC图；图9为实施例5中空白溶剂的HPLC图；图10为实施例5中供试品溶液HPLC图。具体实施方式通过下面的实施例可以对本专利技术进行进一步的描述，然而，本专利技术并不限于下面的实施例，这些实施例不以任何方式限制本专利技术的范围。本领域的技术人员在权利要求的范围内所作出的某些改变和调整也应认为属于本专利技术的范围。实施例1等度洗脱(对比实验)仪器与条件高效液相色谱仪：Agilent1260色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱(Bondapak4.6×250mm,5μm)流速：1.0mL/min检测波长：220nm柱温：25℃稀释剂：氯仿-乙腈进样量：10μL流动相：乙腈:水＝92:8实验步骤精密称取二氯化物50mg，置50mL量瓶中，加氯仿溶解、并加乙腈稀释定容至刻度，摇匀，作为供试品溶液。按上述条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1，三氯化物和一氯化物相对于二氯化物的保留时间分别为0.33和2.47。虽然二氯化物与其相关杂质的分离度满足本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法，其特征在于，该方法包括：以苯基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以含有酸性添加剂的有机相为流动相A，含有酸性添加剂的水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方法，检测波长为210‑230nm，对双嘧达莫关键中间体2,6‑二氯‑4,8‑二(哌啶‑1‑基)嘧啶并[5,4‑d]嘧啶及其相关杂质进行分离测定。

【技术特征摘要】
1.一种双嘧达莫合成的关键中间体杂质HPLC分析方法，其特征在于，该方法包括：以苯基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以含有酸性添加剂的有机相为流动相A，含有酸性添加剂的水溶液为流动相B，采用梯度洗脱方法，检测波长为210-230nm，对双嘧达莫关键中间体2,6-二氯-4,8-二(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶及其相关杂质进行分离测定。2.根据权利要求1所述的杂质分析方法，其特征在于所述相关杂质为2-氯-4,6,8-三(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶、2,4,6-三氯-8-(哌啶-1-基)嘧啶并[5,4-d]嘧啶、2,4,6,8-四氯嘧啶并[5,4-d]嘧啶。3.根据权利要求1所述的杂质HPLC分析方法，其特征在于所述梯度洗脱方法为：0min，流动相A为45％～50％；0～5min，流动相A以45％～50％等度洗脱；5～20min，流动相A增加至75％～90％；20～30min，流动相A以75％～90％等度洗脱；30～35min，流动相A线性减小至45％～50...

【专利技术属性】
技术研发人员：王羽，何英翠，
申请(专利权)人：亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山西,14