本发明专利技术提供了一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽。该蚕蛹蛋白肽的制备方法包括：(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；(2)超声处理蚕蛹蛋白液；(3)加入复合蛋白酶酶解，同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。本发明专利技术方法操作简单，适于产业化生产，酶用量少，制备过程无需添加酸或碱调节pH值，且不添加任何添加剂，较好地保持产品的功能特性，得率高，风味好，所得的蚕蛹蛋白肽具有优异的ACE抑制活性，IC50小于320μg/mL，且具有较好的抗氧化功能，广泛应用于特需食品和营养食品的制造。
A protein peptide of silkworm chrysalis with antioxidation and ACE inhibition
【技术实现步骤摘要】
一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽
本专利技术涉及食品加工
，具体地涉及一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
蛋白质经过水解得到多肽，使得蛋白质的结构被改变，疏水区的活性官能基团暴露，随着肽键的裂解，游离氨基酸增加，从而可以提供质子或电子源，保持较高的氧化还原电位，使其具有清除活性自由基的能力，还原力，具有抑制脂质过氧化作用的发生，从而抗氧化肽的抗氧化活性得以提高。氧化对需氧生物特别是脊椎动物和人类是一个重要的代谢过程，但是它却导致了自由基的形成。自由基是高度不稳定的、易于和其他分子发生化学反应，活性氧自由基(ROS)被认为能引起氧化应激。氧化应激涉及多种人类疾病如动脉粥样硬化，糖尿病，神经系统疾病，如阿尔茨海默病，帕金森氏病等等，以及老龄化。在食品体系中，脂类或蛋白质可能会受到ROS的攻击经历氧化过程，从而导致食品产生不愉快味道，颜色发暗，同时也可能产生潜在的毒性产物。抗氧化多肽的应用能使人体免受氧化应激的破坏，并防止食品成分由于捐献电子给ROS以及中和ROS的负面作用而变质。因此抗氧化肽在医学、化妆品、生物、食品领域有广泛的应用价值。血管紧张素转化酶(AngiotensinIconvertingenzyme，ACE)为肾素-血管紧张素系统的关键酶。血管紧张素原在肾素的作用下转化为血管紧张素I，血管紧张素I在ACE的作用下转化为血管紧张素II，刺激血管收缩，造成血压上升。抑制ACE的活性对降低血压有着积极的作用，因而开发有效的ACE抑制剂引起人们的极大关注。虽然来源于食物的ACE抑制肽比人工合成的ACE抑制剂作用弱，但是它有其独特的优点，不会产生降压过度的问题，安全性高，无副作用，除降压功能外，往往同时具有免疫促进、易消化吸收等功能。由于药物疗法存在副作用，天然食物中的降血压功能因子的开发利用将成为今后高血压非药物治疗的重要部分。现有技术中关于ACE抑制肽开发的报道，主要是通过酶解的方法从水产动物体或牛乳乳清蛋白源获得ACE抑制肽，酶解过程通常都需要通过添加酸或碱来调节体系的pH值，这无疑影响了获得的ACE抑制肽产品的功能特性，且增加了操作的繁琐程度，这些方法均不同程度地增加了操作步骤和生产成本，制约了产业化规模化ACE抑制肽的生产及蛋白肽的得率。目前国内外专利中未见利用蚕蛹为原料制备同时具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的报道。本专利技术针对目前蚕蛹蛋白产品开发的现状，利用蚕蛹蛋白粉为原料，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白酶复合酶解，通过膜分离和凝胶分离技术，开发了同时具有特定降压和抗氧化功能的蚕蛹蛋白肽，建立一套简单高效的多功能的蚕蛹蛋白肽的制备方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术的目的是在于提供一种具有ACE抑制和抗氧化功能的蚕蛹蛋白肽。本专利技术的另一目的在于提供上述蚕蛹蛋白肽的制备方法。本专利技术的再一个目的在于提供上述蚕蛹蛋白肽的应用。为了实现上述技术目的，本专利技术提供了一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽，包括以下步骤:(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；(2)超声处理蚕蛹蛋白液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。上述制备方法中，步骤(1)水与蚕蛹蛋白粉的质量比为10-15:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-3小时。步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液调至75-80℃，75-100kH的超声频率处理25-30min。优选80kH的超声频率处理25-30min。本专利技术通过大量实验发现，蚕蛹蛋白液温度调至75-80℃进行超声处理，效果最好，能够较好地改变蚕蛹蛋白的组织结构，使下面酶解步骤缩短酶解时间和使用较少的酶量，就能够获得优质的蛋白肽。步骤(3)按照蚕蛹蛋白液总重量的0.9-1.4％(优选参数值1.2％)的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶组成，四者质量比为1：(1-2):(1-2):1。步骤(3)的酶解条件为50-65℃(优选参数值55℃)酶解1.5-3.5小时(优选参数值2.5小时)；步骤(3)所述超声处理是25-40kH处理；步骤(3)酶解之后于90-95℃下保温10-20min，冷却至65-75℃(优选参数值70℃)，过滤分离，收集分离液。在本专利技术的实施例中，是通过硅藻土进行过滤分离，然后收集分离液。本领域技术人员可以采用任何具有等同效果的分离方式进行过滤分离。步骤(4)的两步超滤法为先用孔径为3000D的膜超滤，再用孔径为1000D的膜超滤，得到分子量小于1000D的蛋白肽。具体地，是利用孔径为3000道尔顿的陶瓷膜超滤，先将分子量小于3000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为1000道尔顿的膜将分子量小于1000道尔顿的蛋白肽分离出来。步骤(5)滤液过柱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰，浓缩、冷冻干燥得到蚕蛹蛋白肽。具体地，取分子量为小于1000的蛋白肽液，再经过SephadexG-25凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第13-14分钟洗脱出来的肽液；将步骤(5)得到的肽溶液通过浓缩、冷冻干燥，得到蚕蛹蛋白肽粉。通过LC-MS/MS对蚕蛹蛋白肽的主要成分进行测定，其氨基酸序列为IDPEIQK(异亮氨酸-天冬氨酸-脯氨酸-谷氨酸-异亮氨酸-谷氨酰胺-赖氨酸)、IDKVRF(异亮氨酸-天冬氨酸-赖氨酸-缬氨酸-精氨酸-苯丙氨酸)、KNYSPY(赖氨酸-天冬酰胺-酪氨酸-丝氨酸-脯氨酸-酪氨酸)的肽的含量共计83％～90％，其中IDPEIQK(27％-31％)、IDKVRF(30％-37％)、KNYSPY(24％-30％)。所述％均为质量百分比。上述制备方法制备得到的蚕蛹蛋白肽属于本专利技术的保护范围。本专利技术通过实验发现，本专利技术上述方法制备得到的蚕蛹蛋白肽具有优异的ACE抑制和抗氧化功能。进而，本专利技术提供了该蚕蛹蛋白肽在制备降血压或抗氧化药物中的应用。含有本专利技术方法制得的蚕蛹蛋白肽的食品、保健品或药物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术发现氨基酸序列如SEQIDNO.1-3所示的肽均具有抗氧化和ACE抑制功能。进一步地，本专利技术提供了氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示的肽在制备食品、保健品或药物中的应用。本专利技术的优点在于：(1)本专利技术提出蚕蛹蛋白肽制备全过程同步利用不同频率的超声波处理，制备方法简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。(2)本专利技术的蛋白肽具有很好的抗氧化和ACE抑制功能，蚕蛹蛋白肽的清除DPPH自由基能力达到93％以上，还原力达到0.90以上，其ORAC为21以上，其中IDPEIQK肽清除DPPH自由基能力达到96％以上，还原力达到0.94以上，其ORAC为22以上。蚕蛹蛋白肽的ACE抑制活性(IC50值)小于320ug/mL本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；(2)超声处理蚕蛹蛋白液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化和ACE抑制功能的蚕蛹蛋白肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)蚕蛹蛋白粉中加水，在高温下处理得到蚕蛹蛋白液；(2)超声处理蚕蛹蛋白液；(3)加入复合蛋白酶酶解，酶解过程同步进行超声处理；高温下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；(4)分离液通过二步超滤法处理；(5)滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)水与蚕蛹蛋白粉的质量比为10-15:1，所述高温下处理为100-121℃搅拌1-3小时。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(2)超声处理方法为将步骤(1)得到的蚕蛹蛋白液调至75-80℃，75-100kH的超声频率处理25-30min。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)按照蚕蛹蛋白液总重量的0.9-1.4％的重量百分比加入复合蛋白酶，所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：张恒，罗永康，刘怀高，
申请(专利权)人：安徽国肽生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽,34
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