糖链天冬酰胺衍生物的制备方法技术

本发明专利技术提供糖链天冬酰胺衍生物的制备方法。按照该制备方法，与以前相比能够非常容易且大量地得到医药品开发等领域中有用的各种分离的糖链天冬酰胺衍生物。另外，本发明专利技术还提供通过上述糖链天冬酰胺衍生物的制备工序制备糖链天冬酰胺的方法以及制备糖链的方法。而且，本发明专利技术还提供新型的糖链天冬酰胺衍生物、糖链天冬酰胺和糖链。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及以及糖链天冬酰胺衍生物。
技术介绍
以前，通过糖水解酶将糖链分解制备衍生物的技术一直用于糖链的结构解析等数毫克级的分析研究。但是，由于不能大量得到各种糖链的衍生物，因此克等级的研究技术发展缓慢。因此，难以将糖链的衍生物应用于药品制造等合成研究。另一方面，已知由卵黄能够得到大量糖肽(BiochimicaetBiophysica Acta 1335(1997)p23～32)。但是，并没有大量得到关于图1所示化合物1以及该化合物1中缺失分支糖链的一个非还原末端的唾液酸或半乳糖等几个糖残基的一系列化合物的芴基甲氧基羰基(Fmoc)化的糖链衍生物。另外，也有从人体血液中的蛋白质等少量分离出几种糖链的实例，但是如果将该糖链用于药品的制造，则存在对人体有害的艾滋病病毒或肝炎病毒等混入该药品中的危险性，因此将该糖链应用于药品的技术成了问题。可是，也有很多用分支型糖链制备其分支部分具有相同结构的糖链的实例。作为这种现有技术，存在三种方法。第一种是由天然存在的糖蛋白分离纯化结合了天冬酰胺的复合型糖链的方法。作为其代表例，有T.Tamura等，Anal.Biochem.，1994，216，p335-344；V.H.Thomas等，Carbohydr.Res.，1998，306，p387-400；K.G.Rice等，Biochemistry，1993，32，p7264-7270等记载的方法。这些方法的优点在于没有必要合成糖链。但是，也存在一些缺点。例如，来源于上述糖蛋白的糖链作为在非还原末端部分随机缺失几个糖残基的糖链的混合物得到，该混合物中含有的糖链由于其物理和化学性质类似，分离成各种糖链非常困难，因此大量得到单一的糖链实际上是不可能的。另外，为了比较大量地得到糖链，也有由人血中的蛋白质(由血纤维蛋白原(fibrinogen)分离C.H.Hokke等，Carbohydr.Res.，305(1997)，p463-468；由人血清转铁蛋白(Human SerumTransferrin)分离M.Mizuno等，J.Am.Chem.Soc.，1999，121，p284-290)分离糖链的实例。如上所述，在人血中的蛋白质中有可能混入了艾滋病病毒和肝炎病毒，必需慎重操作。因此，难以将得到的糖链、其衍生物用于开发医药品。另外，即使得到大量糖链，其结构也是有限的，实际上并没有得到多种结构的糖链或其衍生物的实例。在K.G.Rice等，Biochemistry，1993，32，p7264-7270或Rice等，Neoglycoconjugate，Academic Press，1994，ISBN 0-12-440585-1 p286-321中，使用糖水解酶由糖链的非还原末端除去了糖残基，但是由于不能大量得到作为原料的单一结构的糖链，因此只能在分析等级实施。E.Meinjohanns(J.Chem.Soc.Perkin Transl，1998，p549-560)等由牛胎球蛋白(Bovine Fetuin)(来源于牛的糖蛋白)得到图5所示的化合物56后，经由图3所示的化合物33，合成了图1所示的化合物10。为了得到最初的原料化合物56，利用了肼分解反应。该肼毒性高，将得到的糖链衍生物应用于医药品时，有可能混入微量的肼，因此在安全性方面存在问题。另外，只能少量得到未结合唾液酸的化合物56、33和10的糖链衍生物。第二种方法是化学合成糖链的方法。如J.Seifert等，Angew ChemInt.Ed.2000，39，p531-534的报告例所述，现在已经能够利用化学合成法将单糖组合构建约10个糖。这种方法的优点是理论上能够得到所有糖链衍生物。但是，由于其步骤数量庞大，因此存在难以大量合成的缺点。另外，即使合成数毫克约10个糖残基结合而成的糖链，也需要近1年的时间。迄今为止虽然有一些化学合成糖链的实例，但现状是大多数仅能合成数毫克作为目的物的糖链。第三种方法是将酶反应和化学反应组合合成糖链的方法。作为其代表例，有例如Carlo Unverzagt，Angew Chem Int.Ed.1996，35，p2350-2353的报道。这种方法是利用化学合成构建某种程度的糖链后，利用酶反应在糖链上加成糖残基，使糖链延长的方法。但是，由于延长糖时使用的酶具有基质特异性，因此能够导入糖链的糖的种类受到限制。另外，由于化学合成的步骤数量庞大，因此难以大量合成，最终只能得到少量目的物。另外，C.H.Lin(Bioorganic & MedicinalChemistry，1995，p1625-1630)等采用M.Koketsu等报道的方法(J.Carbohydrate Chemistry，1995，14(6)，p833-841)，由卵黄得到唾液酸寡糖肽，然后使用糖水解酶、糖转移酶，改变了糖链的非还原末端部分的结构。在该论文的图中，记载了非还原末端部分仅结合了1个天冬酰胺(Asn)残基的糖链，但是按照J.CarbohydrateChemistry，1995，14(6)，p833-841报道的方法，得到糖链的非还原末端除天冬酰胺以外还结合了平均2.5个赖氨酸等几种氨基酸的物质的混合物。因此，不能作为单一化合物得到糖链的衍生物，另外，也没有暗示得到大量有关分支型糖链的分支糖链的糖残基任意缺失的化合物的各种衍生物。在C.H.Lin等的论文中，也没有给出作为单一产物得到糖链肽的根据。Y.Ichikawa在Glycopeptide and RelatedCompounds(Marcel Dekker，Inc.，1997，ISBN 0-8247-9531-8，p79-205)中指出，对3支链型的复合型糖链从末端依次用糖水解酶处理，能够从糖链的非还原末端依次除去糖链，得到各种糖链的衍生物。但是，并没有叙述酶处理后如何分离各种糖链，另外，仅合成了支链均一的物质。因此，认为采用该方法，也不能大量得到有关分支型糖链的分支糖链的糖残基任意缺失的化合物的各种衍生物。专利技术公开本专利技术的目的在于提供一种，与以前相比能够非常容易且大量地得到医药品开发等领域中有用的各种分离的糖链天冬酰胺衍生物。另外，本专利技术的目的还在于提供一种糖链天冬酰胺的制备方法和糖链的制备方法，其中包括制备糖链天冬酰胺衍生物的步骤，与以前相比能够非常容易且大量地分别得到与糖链天冬酰胺衍生物同样有用的各种分离的糖链天冬酰胺和糖链。而且，本专利技术的目的还在于提供一种新型的糖链天冬酰胺衍生物、糖链天冬酰胺和糖链。也就是说，本专利技术涉及(1)一种来源于糖链天冬酰胺的，其中，包括下述步骤(a)在含有1种或2种以上糖链天冬酰胺的混合物中含有的该糖链天冬酰胺上，导入脂溶性的保护基，得到糖链天冬酰胺衍生物混合物，以及(b)将该糖链天冬酰胺衍生物混合物或该糖链天冬酰胺衍生物混合物中含有的糖链天冬酰胺衍生物水解，将得到的混合物供于色谱法，分离各种糖链天冬酰胺衍生物。(2)如上述(1)所述的，进一步包括步骤(b’)，即，使用糖水解酶将步骤(b)分离的糖链天冬酰胺衍生物水解。(3)如上述(1)或(2)所述的，含有1种或2种以上糖链天冬酰胺的混合物中含有下述化合物和/或该化合物中缺失1个以上糖残基得到的化合物。 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种来源于糖链天冬酰胺的糖链天冬酰胺衍生物的制备方法，其中，包括下述步骤：（ａ）在含有１种或２种以上糖链天冬酰胺的混合物中含有的该糖链天冬酰胺上，导入脂溶性的保护基，得到糖链天冬酰胺衍生物混合物，以及（ｂ）将该糖链天冬酰胺衍 生物混合物或该糖链天冬酰胺衍生物混合物中含有的糖链天冬酰胺衍生物水解，将得到的混合物供于色谱法，分离各种糖链天冬酰胺衍生物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：梶原康宏，佐佐木贤，
申请(专利权)人：大塚化学株式会社，梶原康宏，
类型：发明
国别省市：JP[日本]