嵌合传染性DNA克隆,嵌合猪环状病毒及其用途制造技术

本发明专利技术涉及传染性ＤＮＡ克隆，猪环状病毒（ＰＣＶ）的传染性嵌合ＤＮＡ克隆，保护猪免受ＰＣＶ２引起的病毒感染或断奶后多系统衰竭综合征（ＰＭＷＳ）的疫苗和方法。所述新型嵌合的传染性ＤＮＡ克隆及其衍生的有毒力的嵌合病毒是用非致病性ＰＣＶ１构建的，其中，致病性ＰＣＶ２的免疫原性ＯＲＦ基因取代了非致病性ＰＣＶ１的基因，优选是在相同的位置上取代。所述嵌合病毒优选保留了ＰＣＶ１的非致病性表型，但是，仍然能诱导对致病性ＰＣＶ２的特异性免疫应答。本发明专利技术还包括所述免疫原性多肽表达产物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】,嵌合猪环状病毒及其用途的制作方法对相关美国专利申请的交叉引用根据35 U.S.§119(e)的规定，本非临时申请要求申请日为2002年11月8日的美国临时申请号60/424,840的权益，而后者根据35 U.S.§119(e)的规定，要求申请日为2001年12月12日的美国临时申请号60/340,775的权益。以上两份在在先的专利申请，被以它们的全文形式收作本文参考。有关联邦资助的研究或开发的声名无对“序列表”的引用在本申请中所提供的记录在包含序列表文件的一张CD上的材料被收作参考。建立日期为＿＿，2003，文件大小为大约＿＿。
技术介绍
专利
本专利技术涉及可用作疫苗的传染性猪环状病毒1型(PCV1)和2型(PCV2)DNA克隆，衍生自所述嵌合DNA克隆的嵌合PCV1-2传染性DNA克隆和活的嵌合病毒。相关领域的说明在本说明书中所引用的所有专利和文献都被以它们的全文形式收作本文参考。猪环状病毒(PCV)最初是以猪肾细胞系PK-15的细胞培养物的污染物形式分离的(I.Tischer等，“具有环状单链DNA的非常小的猪病毒”Nature 29564-66(1982)；I.Tischer等，“永久性猪肾细胞系中乳多空病毒和小RNA病毒-样颗粒的鉴定”，Zentralbl.Bakteriol.Hyg.Otg.A.226(2)153-167(1974))。PCV是小型二十面体无外被病毒，它含有大约1.76kb的单链环状DNA基因组。PCV属于环状病毒科，该科包括三种其他的动物环状病毒(鸡贫血病毒(CAV)，鹦鹉喙和羽毛病病毒(PBFDV)，和最近从鸽子体内发现的鸽子环状病毒(CoCV))，以及三种植物环状病毒(香蕉蔟顶病病毒，椰子叶腐病病毒和地三叶草矮化病毒(M.R.Bassami等，“鹦鹉喙和羽毛病病毒核苷酸序列分析及其与猪环状病毒，植物环状病毒和鸡贫血病毒的关系”，Virology 249453-459(1998)；J.Mankertz等，“猪环状病毒(PCV)的转录分析”，Virus Genes 16267-276(1998)；A.Mankertz等，“鸽子环状病毒(CoCV)-来自鸽子的新的环状病毒的克隆和测序”，Arch.Virol.1452469-2479(2000)；B.M.Meehan等，“猪环状病毒DNA的序列与植物环状病毒的亲和力”，J.Gen.Virol.78221-227(1997)；B.M.Meehan等，“与猪衰竭性综合征相关的新型环状病毒DNAs的鉴定”，J.Gen.Virol.792171-2179(1998)；D.Todd等，“三种动物病毒与环状单链DNA基因组的比较”，Arch.Virol.117129-135(1991))。以上三种以前鉴定的动物环状病毒(PCV，CAV和PBFDV)的成员，彼此之间不拥有核苷酸序列同源性或抗原决定簇(M.R.Bassami等，1998，同上；D.Todd等1991，同上)。新鉴定的CoCV的基因组与PCV的基因组拥有大约40％的核苷酸序列同一性(A.Mankertz等，“鸽子环状病毒(CoCV)——来自鸽子的新的环状病毒的克隆和测序”，Arch.Virol.1452469-2479(2000))。最近，从与输血后肝炎相关的个体体内鉴定了一种被命名为输血传播的病毒或TT病毒(TTV)的具有环状基因组的新型人类环状病毒(H.Miyata等，“新的富含GC的113个核苷酸区的鉴定，以便完善第一种人类环状病毒TT病毒的环状单链DNA基因组”，J.Virol.733582-3586(1999)；T.Nishizawa等，“与未知病因学的输血后肝炎的较高的转氨酶水平相关的新型DNA病毒(TTV)”，Biochem.Biophys.Res.Commun.24192-97(1997))。另外，从正常血液供体体内鉴定了人类TTV-样小病毒(TLMV)(P.Biagini等，“TT病毒-样小病毒人类分离物的完整基因组和亚基因组序列的遗传学分析”，J.Gen.Virol.82379-383(2001)；K.Takahashi等，“直接与TT病毒和鸡贫血病毒相关的新的人DNA病毒(TTV-样小病毒，TLMV)的鉴定”，Arch.Virol.145979-93(2000))，并且还从患有输血后肝炎的人体内发现了被称为SEN病毒(SENV)的第三种新型人类环状病毒(T.Umemura等，“SEN病毒感染及其与输血相关的肝炎的关系”，Hepathology 331303-1311(2001))。两种人类TTV和TLMV的基因组组构与CAV的基因组组构类似(P.Biagini等，2001，同上；H.Miyata等，1999，同上；K.Takahashi等，2000，同上)。尽管PCV的抗体是在包括人类，小鼠，牛和猪的各种动物物种中发现的(G.M.Allan等，“猪环状病毒的单克隆抗体的生产，初步鉴定和应用”，Vet.Immunol.Immunopathol.43357-371(1994)；G.C.Dulac和A.Afshar，“PK-15细胞系(ATCC CCL-33)中的猪环状病毒抗原和加拿大猪体内的环状病毒抗体的证据”，″Can.J.Vet.Res.53431-433(1989)；S.Edwards和J.J.Sands，“英国猪体内环状病毒感染的证据”，Vet.Rec.134680-1(1994)；J.C.Harding和E.G.Clark，“了解和诊断断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)”，Swine Health andProduction 5201-203(1997)；R.K.Hines和P.D.Lukert，“猪环状病毒在美国对猪的血清学监督”，Swine Health and Production371-73(1995)；G.P.Nayar等，“患有呼吸病和流产的牛胎儿的环状病毒证据”，Can.Vet.J.40277-278(1999)；I.Tischer等，“在不同的育种场的猪群体中猪环状病毒抗体的分布”，Arch.Virol.140737-743(1995)；1.Tischer等，“在人，小鼠和牛血清中与猪环状病毒抗体反应的存在”，Arch.Virol.1401427-1439(1995))，对所述动物物种PCV的致病作用的了解很少。具有PK-15细胞衍生的PCV的猪的实验感染不能产生临床疾病，因此，这种病毒不被认为是对猪有致病性的(G.M.Allan等，“猪环状病毒的病理学缺少初乳的小猪崽的实验感染以及猪胎材料的检查”，Vet.Microbiol.4449-64(1995)；I.Tischer等，“对猪环状病毒的流行病学和致病性的研究”，Arch.Virol.91271-276(1986))。将来自污染的PK-15细胞系的非致病性PCV命名为1型猪环状病毒或PCV1。最早在1991年披露的断奶后多系统衰竭综合征(PMWS)(J.C.Harding和E.G.Clark，1997，同上)是断奶猪崽的复杂疾病，这种病正越来越广泛地传播。由于对养猪行业造成了潜在的严重经济学影响的威胁，已经迫切需要开发针对PMWS的主要致病剂PCV2的疫苗。PMWS本文档来自技高网...

【技术保护点】
猪环状病毒（ＰＣＶ１－２）的传染性嵌合核酸分子，其特征在于具有编码传染性，非致病性ＰＣＶ１的核酸分子，它包括取代了所述ＰＣＶ１核酸分子的ＯＲＦ基因的致病性ＰＣＶ２的免疫原性开放读框（ＯＲＦ）基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟祥金，M费瑙克斯，PG哈尔布尔，
申请(专利权)人：弗吉尼亚科技知识产权有限公司，衣阿华州立大学研究基金公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]