利用N-糖苷酶F制备蛋黄寡糖的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用在酿酒酵母细胞表面高效表达的Ｎ－糖苷酶Ｆ通过酶法水解鸡蛋蛋黄中糖蛋白和糖酞，提取制备蛋黄Ｎ－寡糖的方法，其工艺流程为：蛋黄原料→脱脂→蛋白酶水解→变性处理→离心后取上清液→Ｎ－糖苷酶Ｆ酶解→离心后取上清液→超滤（分子量截留为１０ｋＤ）→脱盐→离子交换柱→减压干燥→蛋黄寡糖产品。本发明专利技术的创新点在于利用在酿酒酵母表面表达的ＰＮＧａｓｅ　　Ｆ，酶发水解制备蛋黄糖蛋白中的酸性Ｎ－糖链，研究结果表明，此制品可抑制轮状病毒对婴幼儿的侵染，防治婴幼儿的腹泻症状；同时，此寡糖的非还原端还可作为流感病毒的吸附位点，减缓病毒对人体的侵染；另外，目前的糖合成技术还无法得到完整的Ｎ－糖链，利用本发明专利技术制备的完整Ｎ－糖链产品，在糖科学的研究中也具有广阔的应用前景。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药，具体地是关于利用酶法从鸡蛋蛋黄中提取唾液酸寡糖的方法。
技术介绍
研究证明，唾液酸寡糖在细胞识别、病毒感染和中和毒素等生命活动中起着非常重要的作用，其糖链末端的唾液酸残基是多种病原体和毒素侵染细胞的识别结合位点，如流感病毒和造成幼儿腹泻的轮状病毒；同时，对肝廓清机制的研究表明，能够清除血液中异源复合物的肝凝集素，是去唾液酸糖蛋白受体(ASGR)，它能够识别去掉唾液酸的半乳糖残基，因此带有唾液酸寡糖重组蛋白药物可明显提高药物在血液中的稳定性和半衰期；日本科学家(L.R.Juneja等)饲喂小鼠的实验中也证明，日粮中添加一定比例的蛋黄唾液酸寡糖，可明显提高幼鼠的智力。因此寡糖，尤其是唾液酸寡糖在医药、食品等行业中有很大的应用开发潜力。目前，在人乳、牛乳、鸡蛋等物质中，已成功地分离出游离的唾液酸寡糖成分，并进行了结构分析和其生物学活性试验；唾液酸寡糖化学合成的研究也是糖合成研究的热点之一；利用肼解法已成功地从鸡蛋蛋黄中分离出蛋黄唾液酸寡糖，但由于受原料和成本的限制，以上所得到的唾液酸寡糖只是用于分析鉴定，日本Taiyo Kagaku公司用蛋白酶水解法制备带有唾液酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用Ｎ－糖苷酶Ｆ制备蛋黄寡糖的方法，其特征在于：其工艺流程是蛋黄原料→脱脂→蛋白酶水解→变性处理→离心后取上清液→Ｎ－糖苷酶Ｆ酶解→离心后取上清液→超滤（分子量截留为１０ｋＤ）→脱盐→离子交换柱→减压干燥→蛋黄寡糖产品。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏，张大伟，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：88[中国|济南]