自玉足海参中提取玉参多糖的方法技术

本发明专利技术提供自玉足海参中提取玉参多糖的方法，该方法包括使玉足海参粉碱解、酶解、去除酸性蛋白、醇沉等步骤。所得的玉参多糖含有５５％（重量）以上的玉足海参总多糖。所述的玉参多糖具有减少脑缺血、改善软脑膜微循环、防止血小板聚集及血栓形成和明显的抗凝作用，因而该玉参多糖可用于制备治疗缺血性脑中风及血液栓塞性疾病的药物。

【技术实现步骤摘要】
,该玉参多糖及其药物用途的制作方法
本专利技术涉及，该玉参多糖本身及该玉参多糖的药物用途。
技术介绍
缺血性脑中风及血液栓塞性疾病是常见而多发的疾病，这类病严重地威胁着人类的健康。为防治这类疾病，人们开发了多种药物。中医药界为此做出了自己的贡献。按照中医理论，海参具有滋阴养血、活血通络、补肾益精的功效。然而简单地通过食用海参并不能有效地防治缺血性脑中风及血栓性疾病，其原因在于1.不同种类的海参中所含的有效物质的量以及其组成有很大的差异；2.简单地食用海参无法准确地控制有效物质的摄入量。因此，选择适宜的海参，从中提出有效物质并将其用于制药是本专利技术的目的。
技术实现思路
本专利技术的，包括以下步骤(1)将玉足海参破碎成粉；(2)用NaHCO3将所得玉足海参粉碱解，然后再用木瓜蛋白酶使其酶解；(3)将上述碱解、酶解产物经低温静置后取上清液；(4)在PH值为2的条件下，去除所得上清液中的酸性蛋白后，将其浓缩至1.05-1.10的相对密度；(5)往所得浓缩物中加入乙醇后，提取沉淀物；(6)将所得沉淀物经溶解，脱色和低温处理后，提取上清液；(7)往所得上清液加乙醇，使其产生沉淀，然后提取该沉淀物，即玉参多糖。所述玉参多糖的用途为制造用于治疗缺血性脑中风及血液栓塞性疾病的药物。本专利技术所用的玉足海参Holothuria(Mertensiothuria)Leucospilota(Brandt)是经本专利技术人多次筛选后发现的一适用的海参。所述的玉参多糖是本专利技术人定义的用本专利技术的方法自玉足海参中得到的提取物，它含有55％(重量)以上的玉足海参总多糖，其余主要是玉足海参蛋白、无机盐和水等非活性物质。所述的玉足海参多糖是有效物质，它具有延长凝血时间、推迟血栓形成、降低血粘度和血小板聚集率及改善软脑膜微循环和缩小脑梗塞面积的功效。玉参多糖中的玉足海参总多糖由占72％(重量，下同)的硫酸粘多糖和占28％的聚岩藻糖硫酸酯组成。所述的硫酸粘多糖是一种抗凝活性最强的一种多糖，但其提纯工艺十分复杂，而且成本高昂，而玉参多糖的提取工艺则相对简单，成本也低，尽管其中含有玉参蛋白等非有效物质，但用其制备用于口服的药物已足以达到专利技术目的了。用本专利技术的方法提取的玉参多糖对治疗缺血性脑中风及血液栓塞性疾病的动物实验已经完成，结果表明经灌服玉参多糖后，大鼠因三氯化铁所致大脑缺血的行为障碍得到明显改善，梗塞面积缩小，脑部血流量增加；小鼠灌服玉参多糖后，其凝血时间明显延长。本专利技术药物的急毒性实验表明，该药基本无毒。小鼠的最大耐受量为109.2g/kg体重，相当于70kg体重成人日用量的471倍。长期毒性试验表明，实验动物的脏器系数与对照组比较无明显改变。系统尸检结果表明，全部实验动物均无异常，可见本专利技术的药品是安全可靠的。本专利技术的药物的制备工艺由于只提取玉参多糖而相对简单，而用所得的玉参多糖来制备口服制剂其纯度已是足够的了。按本专利技术的方法提取的玉参多糖可按需要制成适于口服的各种固体剂型，如胶囊、片剂或颗粒。下面通过具体实施方式具体地说明本专利技术。具体实施例方式实施例1，取玉足海参干品1000g，粉碎成粉(粒度在20目以下)，用10％的NaHCO3溶液8000ml，将其于55-60℃碱解8h；用60mol/L HCL将PH调至8，加木瓜蛋白酶10g于55-60℃酶解10h，95℃灭活30min，于0-5℃静置过夜，取清液，用6mol/L HCL调整PH至2.0后，静置1h，取清液，再用1mol/LNaOH调整PH至8.0后，清液于薄膜蒸发器中浓缩至相对密度1.05-1.10(室温)。浓缩液中加乙醇，调整到含醇为50％，静置过夜，收集沉淀物，即为粗品。将粗品溶于适量水中，用1mol/L NaOH调整PH至8-9，加NaHSO3及30％H2O2脱色，置于0-5℃冰箱中过夜。次日，取上清液加乙醇调整含醇量至50％，静置过夜。次日，收集沉淀物，用无水乙醇洗涤三次，干燥后即得40-50g玉参多糖粉末，其中，含玉足海参总多糖在55％以上。实施例2，1.受试药品及配置(1)将得自实施例1的玉参多糖粉末用1％羟甲基纤维素钠(CMC-Na)配成的，10、20、40mg/ml的混悬液；(2)阿司匹林天津力生制药厂生产，批号971009，含量99.74％。(3)红四氰唑(TTC)上海试剂三厂，批号970410。(4)三氯化铁天津化学试剂三厂，批号920410。(5)高分子右旋糖苷中国医学科学院血液研究所提供，分子量300,000，为10％的消毒生理盐水溶液，安瓶封装，每支10ml。(6)天保宁银杏叶片中国科学院药物研究所、浙江康恩贝制药有限公司生产，批号980601，每片含银杏叶片精提物40mg。实验时以1％的羟甲基纤维素钠(CMC-Na)配成40mg/ml和5mg/ml的混悬液；(7)人工脑脊液葡萄糖0.67g，KCl 0.22g，NaCl 7.3g，NaHCO32.1g，CaCl20.28g，MgCl22H2O 0.24g，尿素0.36g，以蒸馏水溶解并配成1000ml的溶液。(8)二磷酸腺苷(ADP)SIGMA公司产品；(9)花生四烯酸SIGMA公司产品；(10)胶原称取大鼠腹部去毛皮肤1g，加入10ml生理盐水，于冰水浴中研磨成匀浆，3000rpm离心10min，取上清液，再以8000rpm离心10min，取上清液制得100mg/ml母液；2.实验动物(1)昆明种小鼠动物合格证津实动设施准第001号；(2)Wistar大鼠动物合格证津实动设施准第001号；3.实验方法与结果一.对局灶性脑缺血影响的检测Wistar雄性大鼠，体重278±13kg(250-300g)，按体重随机分为5组，每组10只，对照组每天灌服1％CMC-Na，给药组分别灌服玉参多糖50、100、200mg/kg，阳性对照组灌服阿斯匹林200mg/kg。给药体积均为0.5ml/100g，每天一次，连续7天，于末次给药后1h腹腔注射12％水合三氯乙醛350mg/kg麻醉，侧卧位固定，在手术显微镜下，于外耳道与眼外眦连线中点切开皮肤，暴露额骨，铰断，于颅骨底处开约2mm直径小颅窗，暴露大脑中动脉，置一片塑料薄膜保护血管周围组织，将吸有10毫升50％三氯化铁的直径约2mm滤纸敷在该段动脉上，30分钟后去掉滤纸，用生理盐水棉球冲洗局部组织数次，逐层缝合后，回笼饲养。于术后4、8、12h进行动物行为评分，以此作为脑功能障碍的指标。评分采用盲法，即评分者不知道给药的情况，评分标准如下(1)提鼠尾离开地面约一尺，观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲、肘屈曲、肩内旋或既有腕、肘的屈曲又有肩内旋者，分别计为1、2、3和4分；(2)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力，如双侧阻力对等且有力者，记为0分；如向手术对侧推动阻力下降者，根据下降的程度不同分为轻、中、重3度，分别记为1、2、3分；(3)将动物置一金属网上，观察前两肢的张力，双侧肌力对等有力者计为0分；同样，根据手术对侧前肢张力的下降程度不同记为1-3分；(4)动物无转圈者计为0分，有向一侧转圈行为者计1分，向一侧不停转者计为2分，根据上述标准满分为12分，分数越高，表明动物行为障碍越严重。24小时评分结束后，断头取脑本文档来自技高网...

【技术保护点】
自玉足海参中提取玉参多糖的方法，该方法包括以下步骤：（１）将玉足海参破碎成粉；（２）用ＮａＨＣＯ↓［３］将所得玉足海参粉碱解，然后再用木瓜蛋白酶使其酶解；（３）将上述碱解、酶解产物经低温静置后取上清液；（４） 在ＰＨ值为２的条件下，去除所得上清液中的酸性蛋白后，将其浓缩至１．０５－１．１０的相对密度；（５）往所得浓缩物中加入乙醇后，提取沉淀物；（６）将所得沉淀物经溶解，脱色和低温处理后，提取上清液；（７）往所得上清液加乙醇 ，使其产生沉淀，然后提取该沉淀物，即玉参多糖。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈任重，王志国，
申请(专利权)人：黑龙江红豆杉药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：23[中国|黑龙江]