菌影载体PMAL-E-SN的构建及其在大肠杆菌中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种菌影载体ＰＭＡＬ－Ｅ－ＳＮ的构建及其在大肠杆菌中的应用，以ＰｈｉＸ１７４噬菌体ＲＦＩ质粒为模板进行ＰＣＲ扩增，得到Ｅ基因；以金黄色葡萄球菌标准株ＡＴＣＣ２５９２３基因组ＤＮＡ为模板进行ＰＣＲ扩增，得到ＳＮ基因；用十五个柔性氨基酸的Ｌｉｎｋｅｒ串连Ｅ基因和ＳＮ基因，得到Ｅ－ＳＮ基因；Ｅ－ＳＮ基因ＰＣＲ扩增产物与ｐＭＤ１８－Ｔ载体连接，筛选阳性质粒ｐＴ－Ｅ－ＳＮ测序；用质粒载体ＰＭＡＬ－ｐ２Ｘ和测序正确的重组质粒ｐＴ－Ｅ－ＳＮ构建菌影载体ＰＭＡＬ－Ｅ－ＳＮ。本发明专利技术的菌影载体ＰＭＡＬ－Ｅ－ＳＮ通过“ｔａｃ”强启动子和ｍａｌＥ翻译起始信号使Ｅ基因和ＳＮ基因获得高效表达，成功制备了大肠杆菌菌影，裂解效率可达９９．９９％；本发明专利技术引入次要杀伤基因ＳＮ，并联合Ｅ基因和ＳＮ基因连入高效表达载体ＰＭＡＬ－ｐ２Ｘ，取得了良好的效果，可广泛应用于大肠杆菌菌影的制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种利用E基因和SN基因构建菌影载体PMAL-E-SN的方法，本专利技术 还涉及菌影载体PMAL-E-SN在制备大肠杆菌菌影中进行应用，属于基因工程领域。
技术介绍
菌影(bacterial ghost,BG)是一种新型的疫苗及佐剂形式，其实质是一种不含胞浆及 核酸等内容物的空细胞体，它最大的特点是保留了和活菌一样的完整内外膜结构，能 够有效刺激机体产生特异性和非特异性免疫应答，抵抗病原微生物的侵袭。相对于传 统灭活疫苗来说，它的表面抗原结构得到最大程度的保留，免疫原性高，较之新型疫 苗又兼有疫苗和佐剂的双重作用，并可在其内部及外膜上负载外源抗原，成为优良的 抗原递送载体，同时为联合疫苗的研究提供研究平台，在致病性微生物越来越难以控 制的今天，菌影系统开始受到国内外研究者的关注。噬菌体PhiX174的E基因编码一91个氨基酸的膜蛋白，它能融合革兰阴性菌内膜和 外膜，形成一种大小介于40 200nm的E特异性跨膜裂解通道。在渗透压的作用下，细 菌只剩下内外膜结构，其内部空间失去了核酸、核糖体和其他内容物。电镜显示周浆 间隙在裂解通道边缘被封闭，很可能是蛋白E作用后，胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种菌影载体ＰＭＡＬ－Ｅ－ＳＮ，其特征在于：由Ｅ基因、ＳＮ基因和质粒载体ＰＭＡＬ－ｐ２Ｘ组成。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：雷连成，杜崇涛，韩文瑜，孙长江，冯新，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]