在豌豆中瞬时表达外源蛋白的发芽种子真空侵染法制造技术

本发明专利技术属于植物基因工程技术领域，具体涉及在豌豆中瞬时表达外源蛋白的发芽种子真空侵染法　首先，建立发芽种子真空侵染法并进行优化，选择根长２－３厘米的豌豆种子为侵染材料，以绿色荧光蛋白ＧＦＰ为报告基因对真空时间、真空压力及菌液浓度进行优化得到 表达外源蛋白的最适条件。然后进行人源酸性成纤维细胞生长因子植物病毒表达载体的构建，将编码人源酸性成纤维细胞生长因子ＤＮＡ序列连入改造的植物病毒表达载体，转入农杆菌ＧＶ３１０１中用于在植物中瞬时表达。在最佳条件下侵染豌豆发芽种子，侵染后１２－１４天收获外源蛋白。本发明专利技术周期短、易操作、成本低、无污染，可以方便、快捷在豌豆中大量瞬时表达外源蛋白。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
在豌豆中瞬时表达外源蛋白的发芽种子真空侵染法，其特征是：　１）．以绿色荧光蛋白ＧＦＰ为报告基因建立和优化发芽种子真空侵染瞬时表达体系　首先将豌豆早褐病毒载体ｐＣＡＰＥ１和ｐＣＡＰＥ２－ＧＦＰ转入农杆菌ＧＶ３１０１中，挑取经转化和 鉴定的农杆菌ＧＶ３１０１－ｐＣＡＰＥ２－ＧＦＰ和ＧＶ３１０１－ｐＣＡＰＥ１单菌落，分别接种于ＬＢ液体培养基中选择培养，离心收集菌体，菌体沉淀用无菌水溶液重悬；将ＧＶ３１０１－ｐＣＡＰＥ２－ＧＦＰ和ＧＶ３１０１－ｐＣＡＰＥ１两种菌体的重悬液混合后侵染根长２－３厘米的豌豆发芽种子；侵染后将种子播种于土壤中，８－２０天在紫外灯下观察豌豆植株中绿色荧光蛋...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴智，朱筱娟，范亚军，李伟，
申请(专利权)人：东北师范大学，
类型：发明
国别省市：82[中国|长春]